Спосіб виділення інгібітора трипсина

союз совєтсних СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ РЕСПУБЛИН (19) ^ (51)5 Ш > А 61 К 35/78 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГННТ СССР ОПИСАНИЕ И30І I (21) 3617660/13 (22) 08,07=33 (46) 30.12.91 . Бюл. № 43 (71) Центральный научно-исследовательский и проектно-технолог ический институт механизации и электрификации животноводства Южной зоны СССР (72) К>.Ф.Новиков, Н.Н.Новиюв, В.Е.Соколова, И В.Шаповал, Н.И.Пройдак, Ж.А.Любецкая, В„Н.Сухинии, Н.Ф.Маслсва и Н.В.Потапова 153) 5^2.973(088.8) (56) Авторское свидетечьство СССР № 962302, кл. С 12 U Э Л 0 , 1982. (5*0(57) СПОСОБ ВЬПЕЛЕНИЯ ИНГИБИТОРА ТРИПСИНА путем коагуляции сока вегетативной массы люцерны и афинной Изобретение относится к биохимической промышленности и касается выделения ингибиторов протеиназ с высокой степенью чисюты. Цель изобретения - упрощение способа . П р и м е р . Люцерну в стадии бутонизации скашивают, измельчают, отжимают сок, нагревают до 85 С. Скоагулированные белки осаждают центрифугированием, супернатант используют для биоспецифической хроматографии на трипсин-сефарозе. Опыт проводят в колонке объемом 265 см* (150)115). Колонку с сорбентом заполняют порцией супернатантэ і: 1 хроматограйии супернатанта на специфическом сорбенте, о т л и ч а ю ц и й с я тем, что, с целью упрощения способа, в качестве сорбента используют трипсин-сефарозу, сорбирование ингибитора трипсина проводят равными порциями супернатанта, соответствующими наружному объему сорбен та в колонке, до насыцения сорбента ингибитором, сорбент последовательно промывают водой до удаления пигментов, 0,12-0,15 М ацетатным буфером с рН 6,0-7,0 и 0,2-0,3 М хлористым натрием до полного злкзирования неспецифически связанных белков и во дой до полного удаления солей, затем смывают ингибитор трипсина 0,070,08 М уксусной кислотой. (коричневого сока), равной 250 мл (наружный объем сорбента). Каждую порцию выдерживают в колонке ТВО с соответственно времени связывания ингибитора с трипсином. Всего используют 17 порций супернатанта общим объемом к,2 л. Полноту насыщения трипсина ингибитором определяют в отдельном опыте. Пигменты удаляют $ объемами воды, неспецифически связанные белки десорбцируют 10 объемами 0,15 М ацетатного буферного раствора с 0,3 М NaCl, рН 7Десорбцию' осуществляют 0,15 М ацетатным буферным раствором с 0,3 М ЧаС1 и рН 7. NaCl удаляют промывкой 6 объемами воды. Ингибируют, тлюируют 0,08 Ц уксусной кислотой. о 00 3 1162081 - Из hf2 л супернатанта полуиают 53 мг ингибитора трипсина, электрофоретически гомогенного. Полученные препараты ингибитора нетоксичны. Редактор Т.Шарганова 4 Внутривенное введение препарата в дозах 50 мг, что является 20-кратной лечебной дозой, не вызывало гибели крыс, Техред М.Моргентал Корректор Л.Пилипенко Заказ 4672 Тираж ' Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ҐКНТ СССР 113035, Москва, М-35, Раушская наб., д. Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород» ул.Гагарина, 101