Спосіб визначення імунологічної чутливості організму людини до металів

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и может быть использовано для определения иммунологической чувствительности организма к окислам металлов при протезировании зубов. Определение клинико-иммунологических показателей в патогенезе непереносимости к сплавам металлов, применяемых в ортопедической стоматологии остается актуальной проблемой с точки зрения возникновения патологических изменений слизистой оболочки полости рта и организма в целом. В процессе электрохимической коррозии металлических зубов в полости рта ионы металлов диссоциируют в биологические среды организма. Полость рта является основным источником поступления антигенных структур в организм. Продукты коррозии являются неполными антигенами гаптенами, которые способны соединяться с сывороточными белками. Образующиеся иммунные комплексы активируют систему комплемента, протеолетические ферменты которого совместно с медиаторами воспаления повреждают в конечном итоге органы и ткани. Одним из патогенетических механизмов возникновения непереносимости к сплавам зубного протезирования, является возможная сенсибилизация организма окислами металлов, поступающими в организм человека из внешней среды. За прототип следует принять решение, представленное в а.с. СССР №1526652, 1989. Известный способ состоит в том, что с помощью специального устройства в ротовой полости устанавливается металлическая пластина таким образом, что она соприкасается со слизистой оболочкой челюсти. Результат оценивается по сравнительным характеристикам опытного и контрольного участков слизистой. В случае повышенной чувствительности организма человека к металлам на опытном участке слизистой наблюдается гиперемия, отечность, гистологическая картина. Способ-прототип недостаточно точен и недостаточно информативен. Заявляемый способ решает задачу определения аллергизации организма человека к металлам посредством использования реакции гаптена (металла) с иммуноглобулином в слюне пациента, что позволяет повысить точность и информативность определения чувствительности организма к металлам и таким образом своевременно проводить лечение больных, у которых возникает непереносимость к сплавам в процессе протезирования зубов. Поставленная задача решается тем, что в способе определения иммунологической чувствительности организма человека к металлам посредством воздействия металла на биологический объект организма человека, согласно изобретению, в качестве биологического объекта используют ротовую жидкость, в одной порции которой определяют общее количество иммуноглобулина а в другую - добавляют известное количество соли металла и определяют в ней количество иммуноглобулина не связанного с солью металла, после чего по разности указанных величин судят о чувствительности организма человека к металлам. Анализ существующих методов определения чувствительности организма к окислам металлов свидетельствует о том, что только определение связавшихся с гаптеном иммуноглобулин-антител в слюне позволит судить о сенсибилизации организма к различным окислам металлов и использовать их как исходные данные для оценки иммунологических показателей. В качестве гаптенов использовали окись цинка, сернокислый никель и азотнокислый кобальт. Дозу гаптенов подбирали относительно комплементарных и антикомплементарных свойств таким образом, чтобы сами вещества не влияли на активность комплемента. Таким образом дозы гаптенов для постановки реакции потребления иммуноглобулинов использовали в разведениях: окись цинка - 1 : 8, никель сернокислый - 1 : 1024, кобальт азотнокислый - 1 : 256. Заявляемый способ определения иммунологической чувствительности к окислам металлов осуществляется следующим образом. Утром натощак в стерильную пробирку собирают слюну (ротовую жидкость). Затем ее центрифугируют в течение 20 минут при 3000об/мин. Надосадочную жидкость хранят при 20°C до момента исследования. Исследуемую ротовую жидкость раскапывают в пластиковые пробирки (центрифужные) по 0,15мл. Создают три пробы. В первую пробирку с ротовой жидкостью добавляют Во вторую и третью пробирки добавляют по 0,05мл гаптена. Пробы инкубируют при 37°C в течение 60 минут. После инкубации пробирки с пробами центрифугируют при 6000g не менее 20мин. После центрифугирования из каждой пробирки берут по 0,1мл надосадка и определяют количество иммуноглобулина по классу где - содержание иммуноглобулинов данного класса(контрольная пробирка с - содержание иммуноглобулинов данного класса в антигене (определяется отдельно). Опыт - содержание иммуноглобулинов в надосадке опытной пробы (с гаптеном). Связывание иммуноглобулинов-антител с антигеном определяют по разнице между суммарным количеством иммуноглобулинов в ротовой жидкости и антигене, инкубированных раздельно, и количеством иммуноглобулинов ротовой жидкости и антигена, инкубированных вместе, причем указанное определение проводят для каждого класса иммуноглобулинов. Пример. В две пробирки (опытную и контрольную 1) наливают по 0,15мл ротовой жидкости, а в третью пробирку (контроль 2) такое же количество изотонического раствора хлорида натрия. Гаптен в Объеме 0,05мл добавляют в опытную пробирку и контроль 2, а в контроль 1 такое же количество натрия хлорида. Разведение гаптена подбирают таким образом, чтобы в нем проявлялись лишь начальные антикомплементарные свойства, если они имеются. Содержимое пробирок смешивают, инкубируют в течение одного часа при 37°C, центрифугируют при 3000об/мин 20 минут. После осаждения центрифугированием образовавшихся комплексов антиген-антитело, определяют связавшиеся с антигеном иммуноглобулин-антитела по разнице между суммарным количеством иммуноглобулинов и в ротовой жидкости и антигене, инкубированных раздельно, и количеством иммуноглобулинов ротовой жидкости и антигене, инкубированных вместе. Указанное определение проводят для Пример расчета в мг% Значение иммуноглобул-антител Исследование ротовой жидкости по предлагаемому способу было проведено в контрольной группе (35 человек) и у лиц с признаками непереносимости к сплавам зубного протезирования (26 человек). Результаты исследования ротовой жидкости приведены в таблице. Таким образом, предлагаемый способ позволяет определять количественные показатели связывающей способности иммуноглобулинов ротовой жидкости к различным солям металлов, что позволяет судить о повышенной сенсибилизации организма к продуктам электрохимической диссоциации, возникающей в результате наличия металлических включений в полости рта.