Спосіб препарування нефронів при експериментальних морфологічних дослідженнях

Способ препарирования нефронов при экспериментальных морфологических исследованиях путем удаления почки из организма экспериментального животного и погружения почки в раствор соляной кислоты с последующей фиксацией ее в формалине и микропрепарированием, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что перед удалением почки из организма экспериментального животного и погружением ее в раствор соляной кислоты в почечную вену вводят 18% раствор соляной кислоты, а погружение осуществляют в тот же раствор соляной кислоты на 1 час при 37°С. ленные рыхлой волокнистой соединительной тканью, узкие очень, мацерирующее вещество медленно диффундирует в глублежащие слои почки, что значительно удлиняет время экспозиции и не позволяет использовать более высокие концентрации мацерирующего вещества. Вследствие этого, способ не позволяет выделить целые изолированные нефроны, а только их сегменты (клубочки и проксимальные извитые канальцы) и не дает возможности провести точную дифференцировку сегментов нефронов, поскольку выделенные отделы являются прерывистыми и содержат примеси не мацерирующей соединительной ткани. Задачей настоящего изобретения является возможность вычленения целых изолированных нефронов с точной дифференцировкой структуры их сегментов. Поставленная задача решается тем, что полное разрушение рыхлой волокнистой со С > О 19737 единительной ткани вокруг почечных канальцев осуществляется путем введения 18% раствора соляной кислоты в почечную вену шприцом перед погружением органа в раствор той же соляной кислоты, а погружение осуществляют в тот же раствор на час при 37°С. Это обеспечивает одновременную мацерацию всей рыхлой волокнистой соединительной ткани, окружающей почечные канальцы при более коротком времени экспозиции. Так как мацерирующее вещество вводится под давлением, вследствие этого увеличиваются промежутки между нефронами, что значительно облегчает последующую микропрепаровку и кроме того на единицу рыхлой волокнистой соединительной ткани вокруг почечных канальцев приходится более больше мацерирующего вещества, что позволяет, обеспечивает повышение эффективности мацерации. За счет увеличения промежутков между нефронами, более эффективно диффундирует мацерирующее вещество снаружи. Используемое вещество нельзя вводить в почечную артерию, так как оно поступает в почечные клубочки, а не к соединительной ткани окружающей канальцы, что не обеспечит достижения желаемого эффекта. Указанная совокупность признаков позволит выделить целые изолированные нефроны, с точной дифференцировкой их Сегментов, а именно: клубочек, проксимальный извитой и прямой канальцы, тонкий сегмент, м о з г о в у ю и к о р к о в у ю толстые восходящие ветви петли нефрона (Генле), дистальный и извитой канальцы, соединительный сегмент и собирательную трубку. Проведенные исследования на 25 белых нелинейных крысах-самцах весом 180-250 г с применением предлагаемого способа позволили в 100% случаев выделить целые Упорядник Замовлення 4352 5 10 15 20 25 4 изолированные нефроны с точной дифференцировкой их сегментов (клубочка, проксимального извитого и прямого канальцев, тонкого сегмента, мозговой и корковой толстой восходящей ветви петли Генле, дистального извитого канальца, соединительного сегмента и собирательной трубки), вто время, (как известный прототип позволил выделить только клубочки и проксимальные канальцы). П р и м е р . Под эфирным наркозом проводят срединную лапаротомию и в почечную вену почки крысы под давлением вводят 18% раствор соляной кислоты. Затем на сосудистую ножку накладывают шелковую лигатуру, почку удаляют и погружают в 18% раствор соляной кислоты при 37°С на 1 час, Затем препарат промывают в дистиллированной воде и помещают в 8% раствор формалина на 24 часа при 5°С, после промывки дистиллированной водой, приступают к микропрепаровке в чашке Петри под стереомикроскопом с помощью микроигл и выделяют целые изолированные нефроны. Использование предлагаемого способа позволит при экспериментальных морфологических исследованиях выделить целые 30 изолированные нефроны, точно дифференцировать клубочки, проксимальный извитой и прямой каналец, тонкий сегмент, мозговой и корковой толстые восходящие ветви петли Генле, дистальный извитой каналец, 35 соединительный сегмент и собирательную трубку как в норме так и при повреждении почечных канальцев. Способ разработанный и предлагаемый авторами по сравнению с прототипом более 40 точно дифференцирует их сегменты, точ~ ность повысилась с 60 до 100%, Техред М.Келемеш Коректор М. Куль Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, КиТв-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.Гагаріна, 101