Спосіб визначення рівня секреції норадреналіну у гіпоталамусі експериментальних тварин

Изобретение относится к области физиологии и может быть использовано для изучения механизмов синаптических процессов центральной нервной системы. Наиболее близким к заявляемому является способ определения секции 3Н-норадреналина, включающий введение в мозг микрошприцом по стереотаксическим координатам раствора меченого радиоизотопом нейромедиатора с последующей суперфузией раствором Кребеа-Рингера исследуемых стр уктур мозга с помощью нагнетательно-отсасывающей канюли(1). Недостатком способа является высокая смертность животных после опыта, обусловленная травматизацией тканей головного мозга от введения в мозг микрошприца, что не позволяет производить в эксперименте длительные наблюдения. В основу изобретения поставлена задача создания такого способа определения уровня секции норадреналина в гипоталамусе экспериментальных животных, в котором проведение предварительной обработки костного мозга в иной метод введения 3Н-норадреналина позволили бы снизить травматизацию головного Мозга, и тем самым повысить выживаемость животных. Эта задача решается тем, что в способе определения уровня секции норадреналина в гипоталамусе экспериментальных животных, включающем введение 3Н-норадреналина в организм животного и последующее, определение радиоактивности гипоталамуса, согласно изобретению, предварительно осуществляют краниоцеребральную гипотермию до температуры мозга 33-29°С, а 3Н-норадреналин вводят внутрибрюшинно. Настоящее изобретение позволяет снизить травматизацию головного мозга и таким образом повысить выживаемость животных. Это достигается за счет того, что животным предварительно проводят краниоцеребральную гипотермию до температуры мозга 33-29°С, а 3Н-норадреналин вводят внутрибрюшинно. Примеры осуществления способа. Пример 1. Перед началом эксперимента для блокировки терморегуляторных реакций организма животных (40 крыс весом 200-250 г) наркотизировали внутрибрюшинными инъекциями смеси 5% раствора тиопентала натрия и 30% раствора гаммаоксимасляной кислоты из расчета 30 мг/кг и 100 мг/кг массы животного, соответственно. КЦГ до температуры мозга 33-290С проводили на установке для программного охлаждения. Для Проведения КЦГ на черепе животного устанавливали стеклянные трубки, залитые в протакрил, по которым продували пары азота. В ходе экспериментов измеряли ректальную температур у и температуру в среднем ухе, которая соответствует температуре гипоталамуса. Температуру коры больших полушарий головного мозга измеряли термодатчиком, стереотаксически введенным через специальную направляющую тр убку, укрепленную на черепе животного протакрилом. Измерение температуры осуществления электронным термометром с диапазоном измерения (- 50)-(+ 50)0С (разрешающая способность 0,1 С) и 4-мя датчиками температуры (терморезисторы СТ3-18), размещенными на конце медицинской иглы. После самоотогрева животного изучали секрецию 3Н-НА радиоизотопным методом с использованием "push-pull" канюлй, которую вводили по стереотаксическим координатам в переднюю и заднюю области гипоталамуса. Канюлю соединяли с перистальтическим насосом и всю систему заполняли раствором Кребса-Рингера. После заполнения системы раствором канюлю вводили в передние и задние отделы гипоталамуса, животному внутрибрюшинно вводили 20 мкл раствора 3Н-НА (1 мкк/мин) при помощи микрошприца. Перфузию проводили со скоростью 25-30 мкл раствором Кребса-Рингера. Собирали 20-минутные фракции. Измерение радиоактивности собранных фракций проводили, регистрируя возникающие при радиоактивном распаде b -частицы в сцинтилляционном счетчике. Коэффициент высвобождения (Кв) рассчитывали из отношения радиоактивности исследуемой фракции к радиоактивности последней фракции отмывки, имеющей стабильный уровень радиоактивности: Результаты представлены в таблице 1 в сравнении с прототипом. Из таблицы 1 видно, что заявляемый способ позволяет определять уровень секреции норадреналина в гипоталамусе с такой же точностью, как и способ по прототипу. После определения уровня секреции проводили наблюдение за выживаемостью крыс. Результаты представлены в таблице 2. Из таблицы 2 видно, что к 10-ым суткам выживаемость крыс выше, чем в прототипе в 2 раза, что обусловлено меньшей травматичностью заявляемого способа. Пример 2. Три группы животных (в каждой по 10-15 крыс и 10-15 хомяков) охлаждали, соответственно, до температуры мозга 36, 35 и 340С. После самоотогрева исследовали уровень секреции 3Н-норадреналина в передних и задних отделах гипоталамуса. Результаты свидетельствуют о том, что при данном температурном режиме уровень секреции существенно ниже, чем в прототипе (табл. 3). Пример 3. Три группы животных (в каждом по 10-15 крыс и 10-15 хомяков) охлаждали, соответственно, до температуры 33, 31, 290С (заявляемый режим). Исследовали уровень секреции 3Н-норадреналина в передних и задних отделах гипоталамуса. Результаты представлены в таблице 4. Из таблицы 4 видно, что в заявляемом температурном режиме (33-290С) секреция 3Н-норадреналина в гипоталамусе не отличается от прототипа. Пример 4. Три группы животных (в каждой по 10-15 крыс и 10-15 хомяков) охлаждали, соответственно, до температуры мозга 28, 25, 220С (температурный режим ниже заявляемого) и исследовали уровень секреции 3Н норадреналина. Результаты указывают на то, что при данных температурах уровень секреции практически не определяется.