Тест-система для діагностики грипу а в реакції затримки гемаглютинації (рзга)

Тест-система для діагностики грипу А в реакції затримки гемаглютинації (РЗГА), що містить антигени вірусу грипу птахів шести серологічних варіантів: А/к урча/Німеччина/Н/49, А/качка/Англія/56, А/індик/Онтаріо/67, яка відрізняється тим, що використовують додатково антигени вірусу семи серологічних варіантів: А/свиня/Айова/15/30, А/Сингапур/1/57, А/индик/Массачусетс/65, А/індик/Вісконсін/66, А/качка/Альберта/60/70, А/мартин/Астрахань/1421/79, А/мартин/Астрахань/227/84. (19) (21) u200609526 (22) 04.09.2006 (24) 15.03.2007 (46) 15.03.2007, Бюл. № 3, 2007 р. (72) Стегній Борис Тимофійович, Музика Денис Васильович, Бісюк Іван Юрійович, Головко Анатолій Миколайович, Гадзевич Дмитро Вікторович, Майорова Клавдія Федорівна, Стегній Марина Юріївна, Олійник Людмила Вікторівна, Бузун Андрій Ігорович, Рула Олександр Миколайович, Бусол Володимир Олександрович (73) НАЦІОН АЛЬНИЙ НАУКОВИЙ ЦЕНТР "ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ І КЛІНІЧНОЇ ВЕТЕРИНАРНОЇ МЕДИЦИНИ" 3 21339 соку специфічність тест-системи для діагностики грипу А в реакції затримки гемаглютинації (РЗГА). Заявлена тест система схожа з вище переліченими аналогами, але по суті представляє собою нову, в якій в якості антигенів використовуються штами вірусу грипу 14 підтипів Н1-Н14 (табл.), що відповідає критерію "новизна". Тест-система може бути використана для діагностики грипу у різних видів сільськогосподарських, свійських, диких тварин та птахів. Приклад 1. Визначення гемаглютинаційного титру антигену вірусу А/качка/Україна/63 для приготування робочої дози вірусу при постановці РЗГА. Для цього використовували планшети з лунками у формі літери V, 1% суспензію еритроцитів півня на фізіологічному розчині. В усі лунки планшету вносили по 25мкл фосфатного буферу (рН7,2), в першу лунку вносили 25мкл антигену вірусу А/качка/Україна/63. Робили двократні послідовні розведення від 1:2 до 1:4096, після чого в усі лунки додавали 25мкл 1% еритроцитів. Після 20 хвилин контакту при кімнатній температурі проводили облік реакції за наявності гемаглютинації в лунках планшетів. Встановлено титр 9log2 (1:512). Приклад 2 Визначення антитіл до вірусу грипу підтипу Н5 у сироватці крові курей. Для постановки реакції 4 використовували планшети з лунками у формі літери V, 1% суспензію еритроцитів півня на фізіологічному розчині, антиген Н5 у робочій дозі 4 гемаглютинуючі одиниці (ГАО). В усі лунки планшету вносили по 25мкл фосфатного буферу (рН7,2), в перші лунку вносили по 25мкл підготовленої належним чином сироватки крові курей. Робили двократні послідовні розведення від 1:2 до 1:4096, після чого в усі лунки додавали 25мкл антигену у робочій дозі. Після 40 хвилин контакту при кімнатній температурі в усі лунки додавали по 25мкл 1% суспензії еритроцитів. Через 20 хвилин проводили облік реакції. За позитивну реакцію (наявність антитіл) вважали затримку гемаглютинації вірусу (еритроцити осідали у лунках у вигляді ґудзика), за негативну - аглютинацію еритроцитів (еритроцити осідали у вигляді парасольки). За титр антитіл вважали найбільше розведення сироватки, яке повністю затримувало аглютинацію еритроцитів. За результатами постановки реакції встановлено титр антитіл у сироватці крові вакцинованих курей у титрі 8log2 (1:256). Використання тест-системи дозволить проводити серологічний моніторинг для діагностики захворювання, для прогнозування епізоотичної ситуації та визначення напруженості імунітету після вакцинації. Таблиця Тест-система для діагностики грипу А в реакції затримки гемаглютинації (РЗГА) Н1 Н2 Н3 Н4 Н5 Н6 Н7 Н8 Н9 Н10 Н11 Н12 Н13 Н14 А/свиня/Айова/15/30 А/Сингапур/1/57 А/качка/Україна/63 А/качка/Чехословаччина/56 А/крячок/Південна Африка/61 А/індик/Массачусетс/65 А/FРV/Данія/27 А/індик/Онтаріо/67 А/індик/Вісконсін/66 А/к урча/Німеччина/К/49 А/качка/Англія/56 А/качка/Альберта/60/70 А/марїин/Астра хань/1421/79 А/мартин/Астрахань/227/84 Комп’ютерна в ерстка С.Литв иненко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601