Спосіб виділення інгібітора трипсиноподібних протеаз із відходів одержання гаммаглобуліну та альбуміну донорської крові людини

Спосіб виділення інгібітора трипсиноподібних протеаз із відходів одержання гаммаглобуліну із клітин живого організму шляхом іонообмінної та афінної хроматографій, який відрізняється тим, що після одержання гаммаглобуліну донорської крові людини за методом Кона виконують гомоге 3 21599 4 0,2М КСl -НСl рН2,0. хвилин, при температурі + 2°С ¸ + 4°С, після чого При вказаному розмірі колонки інгібітор видапіддають роз'єднанню протеази та інгібітора за допомогою іоннобмінної хроматографії на ДЕАЕ ляється у трьох фракціях (23,24,25, об'єм фракції при цьому - 2мл, час одержання фракції 5 хвилин, целюлозі. Очищення до гомогенного стану інгібітошвидкість 0,4мл/хв). Всього при хроматографії ра протеаз проводять за допомогою гельфільтразібрано 30 фракцій. Одержаний розчин інгібіторів ції на сефадексах G-15 та G-50 з подальшою трипсина ліофільнo висушували. Інгібітор трипсину афінною хроматографією на трипсин - сефарозі 4В [2]. До цього слід підготувати імобілізований у фракціях визначали за ступенем гальмування гідролізу БАПНА (№-бензоіл - 1 аргенін - р - нітросорбент трипсин-сефарозу 4В. Відважують потрібнілід) кристалічним трипсином (3). Електрофорез ну кількість активізованої сефарози 4В (1г смоли ізоформ інгібіторів проводили у 7,5% гелі у трисдає 3,5мл геля), відмивають декілька разів на фігліциновому буфері при рН8,3 (4). льтрі зі скла, використовуючи 1мМ НСl (200мл/1г смоли), розчиняють трипсин у робочому буфері, Перевага запропонованого способу у порівнянні з існуючим прототипом полягає у тому, що у використовуючи 0,1 М НСl (10-15мг на 1мл гелю), прототипі одержано інгібітор трипсиноподібних змішують розчин трипсину із суспензією гелю, стапротеаз із легенів білих мишей, а у даному способі влять в отріпувачі на дві години при кімнатній темвін виділений із відходів донорської крові людини пературі. Після чого відмивають надлишок трипсину і блокують залишок активних гр уп, при одержанні гамаглобуліну та альбуміну. Література: використовуючи 0,1М NaHCO3, який утримує 0,5М 1.UA, Патент на Корисна модель №23548А, 6А NaCl, потім відмивають надлишок трипсину на 61К 35/00, Бюл, №.31.08.98, ОДМУ, Дівоча В. А. протязі двух годин 0,1М боратним буфером. У поСпосіб одержання інгібітора трипсиноподібних дальшому відмивають надлишок реагенту та адсорбованого білка (спочатку робочим буфером протеаз. 2.Выделение, очистка, биохимические свойства и биологическая роль ингибиторов зерна (0,1М NaHCO3 з 0,5 М NaCl, а потім 0,1М ацетатзлаковых /Левицкий А.П., Вовчук С.В., Зелинский ним буфером рН4,0, що утримує 0,5 М NaCl). ОдеВ.Г., Малиновский В.А., Пыльнева П.Н., Адамовсржаний кон'югат білка з сефарозою використовукая В.Г. //Химия протеолитических ферментов. ють для афінної хроматографії, для проведення якої використовують колонку фірми Pharmacia fine Материалы II Всесоюзного симпозиума - Углич, 1999. - С. 107. chemical розміром 10/10. Об'єм нанесеної проби 3. Использование показателя ингибитора триможе бути довільним, так як інгібітор трипсину псина и химотрипсина в селекции кукурузы и ячміцно сорбірується з гелем. Афінну хроматографію меня. /Левицкий А.П., Вовчук С.В., Пыльнева П.Н. проводять у 0,05М трис-НСl буфері, рН7,5. Десорбцію білків проводять послідовно буферними рози др. //Методические рекомендации, 1984. 4. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins чинами, які утримують 1М НС1, 8М сечовин у з during the assembly of the head of bacterio phage розчином 0,2М КСl-НСl з рН2,0. Інгібітор елююєтьT4, 1970. - Nature 272. - P. 680-685. ся з колонки одним піком з використанням буфера Комп’ютерна в ерстка М. Мацело Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601