Спосіб діагностики захворювань, викликаних умовнопатогеними мікроорганізмами

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим способам исследования и может применяться для диагностики заболеваний, вызванных условно-патогенными микроорганизмами в лечебных учреждениях терапевтического и хирургического профиля. Известны способы диагностики заболеваний, вызванных условнопатогенными микроорганизмами, которые основаны на высеваемости этих микроорганизмов из очагов воспаления [1]. Однако эти способы трудоемки, требуют специальных питательных сред: забор материала при заболеваниях внутренних органов (почки, желудок, кишечник) часто неосуществим, кроме того нельзя исключить контаминацию культуры широкораспространенными условно-патогенными микроорганизмами без их участия в патогенезе данного воспалительного заболевания. Наиболее близким к предлагаемому техническому решению является способ диагностики заболеваний, вызванных условнопатогенными микроорганизмами вида Pseudomonans путем определения специфических антимикробных антител в сыворотке крови больных [2]. Однако приготовление антигена из условнопатогенных микроорганизмов в этом способе - процесс трудоемкий, трудно поддающийся стандартизации, без учета оптимального времени выращивания микроорганизмов, отсутствия выбора наиболее антигенных фрагментов микробной клетки и актуального для развития заболеваний у человека вида этих микроорганизмов. Кроме тога, высокая серологическая разнородность поверхностных антигенов псевдомонад, из которых изготавливался диагностикум и недостаточная степень их очистки снижают специфичность реакции и достоверность исследования в целом. В основе изобретения была поставлена задача создать способ, который бы позволил повысить точность диагностики воспалительных заболеваний, вызванных условнопатогенными микроорганизмами Pseudomonans fluorescens, наиболее частой причиной развития воспаления у ослабленных больных. Задача достигается тем, что согласно изобретению, в предлагаемом способе используют эритроцитарный диагностикум с экзоцеллюлярным ЛПС Ps. Fluorescens, проводят реакцию пассивной гемагглютинации и при наличии титра антител диагностируют заболевание, вызванное условнопатогенны-ми микроорганизмами Ps. Fluor. Сравнение заявляемого способа со способом прототипа позволило установить соответствие его критерию "новизна", поскольку выделение и использование в эритроцитарном диагностикуме ЛПС Ps. Fluor. проводится впервые. При изучении други х те хнических решений в данной области признаки, отличающие заявляемое изобретение от прототипа не были заявлены и поэтому они обеспечивают заявляемому способу соответствие критерию "существенные отличия". В отношении соблюдения критерия существенные отличия можно сказать, что предлагаемый способ предусматривает использование в эритроцитарном диагностикуме в качестве антигена ЛПС, обладающего высокой антигенной активностью и значительно повышающего чувствительность выявления антител, кроме этого использование экзоцеллюлярного ЛПС позволяет определять специфические антитела к большой группе микроорганизмов вида Pseudomonans, одного из наиболее актуальных в развитии воспалительных заболеваний человека, вызванных условнопатогенными микроорганизмами. Целесообразность применения эритроцитарного диагностикума с экзоцеллюлярным ЛПС определяется необходимостью унифицирования экспрессдиагностики заболеваний человека, вызванных условнопатогенными микроорганизмами ускорения и упрощения исследования, повышения точности диагностики. Экспресс-диагностика в нашем способе обеспечивается наличием высокоактивного, очищенного, стандартизованного препарата экзоцеллюлярного ЛПС Ps. fluor. и изготрвления на его основе эритроцитарного диагностикума для долговременного использования. Время на проведения нашего способа - около 2 часов. Этапы процесса - забор исследуемой сыворотки крови у больного, проведение реакции гемагглютинации с эритроцитарным диагностикумом и учет результатов. Выявление титров антител в исследуемой сыворотке свидетельствуют об инфицировании пациента условнопатогенными микроорганизмами и необходимости проведения соответствующих лечебных мероприятий. Таким образом, наш способ диагностики заболеваний, вызванных условнопатогенными микроорганизмами Ps. Fluor. представляет новых подход к достижению поставленной задачи экспресс-диагностике заболеваний, вызванных условнопатогенными микроорганизмами. Способ осуществляется следующим образом. Готовят 20мл 4% взвесь эритроцитов барана на физиологическом растворе и смешивают с равным объемом 0,01% раствора экзоцеллюлярного липополисахарида Ps. Fluorescens, инкубируют в термостате при 37°C 30 минут, отмывают трехкратно при g 1500/минуту в течение 10 минут. Затем к осадку приливают физраствор и объем доводят до 40мл. В планшетах с 0,2мл физраствора в каждой лунке титруют исследуемые сыворотки, которые предварительно инактивируют при 56°C 30 минут. Затем в каждую лунку добавляют по 0,2мл эритроцитов барана, нагруженных ЛПС. Учет реакции гемагглютинации проводят через 2 часа и при наличии титра антител диагностируют у данного больного инфекцию, вызванную условнопатогенными микроорганизмами. Преимущества предлагаемого технического решения по сравнению с прототипом: При проведении сравнительных исследований выявления заболеваний с помощью нашего способа и способа прототипа получены результаты, приведенные в таблице. В результате у больных с язвенной болезнью отсутствовали антитела при определении по способу прототипа при концентрации ЛПС 0,01% и имелось недостоверное повышение титра антител к ЛПС при более высокой концентрации - 0,01%. При определении нашим способом достоверное увеличение титра антител наблюдалось как при использовании низких, так и высоких концентраций ЛПС, что позволяет выявлять антитела нашим способом с более высокой точностью, чем в прототипе, к более широкой группе микроорганизмов Ps. fluorescens и таким образом своевременно назначать больным соответствующее лечение. Преимущества предлагаемого изобретения: сокращение времени исследования; упрощение исследования; повышение точности исследования.