Спосіб одержання позитивної бруцельозної сироватки

Корисна модель відноситься до ветеринарної імунології та біотехнології, зокрема, до способів одержання діагностичних сироваток з високим вмістом протибруцельозних антитіл і використовується на підприємствах ветеринарної промисловості для виготовлення позитивних сироваток, які входять до складу бруцельозних діагностикумів. Існує спосіб одержання бруцельозної сироватки в якому для одержання сироватки використовують бикапродуцента, якого імунізують триразово живою культурою Brucella abortus 544. Через 18 днів після останнього введення бруцел проводять відбір крові для дослідження та подальше тотальне знекровлення тварини [Ветеринария.- 1982. - №8, С.22-23]. Недоліком цього способу є .використання живих культур. Існує спосіб одержання бруцельозної сироватки [Пат. RU №99116465/13 від 09.02.2001р., А61К39/10 „Способ получения поливалентной диагностической бруцеллезной сыворотки"]. За цим способом проводять імунізацію, тотальне знекровлення, відбір крові, визначення титру антитіл на специфічність та активність. Для одержання сироватки використовують суміш живих культур Brucella melitensis Rev-1, Bracella abortus 19, Brucella suis 61, якою заражають кролів. Недоліком способу є використання живих культур Brucella в S-формі, що є небезпечним для обслуговуючого персоналу і потребує витрати на ізольоване утримання щеплених тварин, та використання кролів, що є не ефективним для одержання бруцельозної сироватки. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб одержання позитивної бруцельозної сироватки, що включає імунізацію, відбір крові, тотальне знекровлення, визначення титру антитіл на специфічність та активність шляхом імунізації тварин-продуцентів специфічними інактивованими імуногенними бактеринами зі штаму Bracella abortus 1-го біовару, щоб забезпечити отримання високоактивної позитивної бруцельозної сироватки. Спосіб виконується таким чином. Для цього використовують клінічно здорову рогату худобу - биків вагою не менше 370-400кг або козлів вагою 40-50кг. Тварин-продуцентів імунізують підшкірно одноразово, а надалі внутрішньовенно у зростаючих дозах з інтервалом 3-4 дні специфічними імуногенними препаратами. Через два тижні після закінчення циклу імунізації, проводять відбір крові для дослідження та подальшого тотального знекровлення. Спосіб пояснюється такими прикладами. Приклад 1. Визначали активність бруцельозної сироватки в реакції аглютинації. Виготовили специфічний бактерій суспензію інактивованої культури Bracella abortus штам 19 1-го біовару. Клінічно здорового бика інв. №05 вагою 370кг імунізували підшкірно бактерином в дозі 40,0 ´ 109м. к. одноразово. Надалі вводили внутрішньовенно шактивовану суспензію Вruсеllа abortus у зростаючих дозах чотири рази з інтервалом 3-4 дні. Знекровлення тварини проводили через 12 днів після закінчення циклу імунізації з наступним одержанням сироватки крові. При дослідженні сироватки на специфічність та активність виявили позитивні реакції в РА в титрі 1:1200++++, 1:1600++, РЗК в титрі 1:200++++, 1:320++ з єдиним бруцельозним антигеном для РА, РЗК, РТЗК (виробництва Херсонської біофабрики), в РБП у розведеннях 1:16++++, 1:32+ з бруцельозним антигеном для роз бенгал проби (РБП) та відсутність позитивної реакції в РТЗК з R - бруцелаовісним антигеном. Результати досліду надані в таблиці 1. Приклад 2. Визначали активність бруцельозної сироватки в реакції зв'язування комплементу. Клінічно здорового бика інв. №06 вагою 390кг імунізували підшкірно інактивованим бактерином з культури Brucella abortus штам 19 1-го біовару одноразово. Надалі вводили внутрішньовенно інактивовану суспензію бруцел у зростаючих дозах декілька раз з інтервалом 3-4 дні. Знекровлення тварини проводили через 13 днів після імунізації з наступним одержанням сироватки крові. При дослідженні сироватки на специфічність та активність виявили позитивні реакції в РА в титрі 1:1200++++, 1:2000++, РЗК в титрі 1:240++++, 1:320+++ з єдиним бруцельозним антигеном для РА, РЗК, РТЗК з бруцельозним антигеном, в РБП у розведеннях 1:16++++, 1:32++ з бруцельозним антигеном для роз бенгал проби та відсутність позитивної реакції в РТЗК з R- бруцелаовісним антигеном (Результати досліджень наведені в табл. 2). Приклад 3. Визначали активність бруцельозної сироватки в розбенгал пробі. Клінічно здорового козла інв. №01 вагою 40кг імунізували підшкірно інактивованим бактерином з культури Brucella abortus штам 19 1-го біовару одноразово. Надалі вводили внутрішньовенно інактивовану суспензію бруцел. Знекровлення тварини проводили через два тижня після імунізації з наступним одержанням сироватки крові. При дослідженні сироватки на специфічність та активність виявили позитивні реакції в РА в титрі 1:1600++++, 1:2000+++, РЗК в титрі 1:320++++ з єдиним бруцельозним антигеном для РА, РЗК, РТЗК, в РБП у розведеннях 1:32++++, 1:64++ з бруцельозним антигеном для роз бенгал проби та відсутність позитивної реакції в РТЗК з R - бруцелаовісним антигеном (табл. 3). Таким чином, застосування запропонованого способу дозволяє отримувати високоактивну в РБП, РА, РЗК специфічну позитивну бруцельозну сироватку для виготовлення діагностичних препаратів, зокрема контрольної позитивної бруцельозної сироватки при дослідженні сироваток крові тварин РА, РЗК з комерційним єдиним бруцельозним антигеном для РА, РЗК, РТЗК в РБП з комерційним бруцельозним антигеном для роз бенгал проби. Таблиця 1 Вид тварини, інв. № Бик, 05 Бик, 06 1:50 4 4 Реакція аглютинації в розведеннях сироватки * 1:100 1:200 1:250 1:500 1:600 1:800 1:1000 4 4 4 4 4 2 1 4 4 4 4 4 3 2 Титр сироватки в РА 1:1200 1:1200 Козел, 01 4 4 4 4 4 4 4 3 1:1600 Примітка: * 4 хреста - 100% аглютинація, 3-75%, 2-50%, 1-25%. Таблиця 2 Вид тварини, інв. № Бик, 05 Бик, 06 Козел, 01 Реакція зв'язування комплементу в розведеннях сироватки * 1:5 1:10 1:20 1:40 1:80 1:100 1:120 і: 160 1:320 4 4 4 4 4 4 3 2 0 4 4 4 4 4 4 4 3 1 4 4 4 4 4 4 4 4 1 Титр сироватки вРЗК 1:200 1:240 1:320 Примітка: * затримка гемолізу еритроцитів 4 хреста - 100%, 3-75%, 2-50%, 1-25%, 0 - гемоліз еритроцитів. Таблиця З Вид тварини, інв. № Бик, 05 Бик, 06 Козел, 01 Реакція аглютинації в розведеннях сироватки * нативна 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 4 4 4 4 4 1 4 4 4 4 4 2 4 4 4 4 4 4 Примітка: * 4 хреста - 100% аглютинація, 3-75%, 2-50%, 1-25%. 1:64 0 0 2 Титр сироватки вРБП 1:16 1:16 1:32