Спосіб отримання позитивної контрольної сироватки до вірусу інфекційного бронхіту курей

Спосіб отримання позитивної контрольної сироватки до вірусу інфекційного бронхіту курей 3 21147 4 яєць, тестували на присутність антитіл до ВХН в Матеріали та реактиви: реакції затримки гемаглютинації (РЗГА). Всі зразки - фізіологічний розчин рН7,2, який містить були негативними. Від охолоджених ембріонів піс0,5% гліцерину (хч); ля їх загибелі або на 4 добу після інокуляції ВХН - дистильована вода; відбирали алантоїсну рідину і використовували як - еритроцитарний антиген до вірусу інфекційджерело вірусу після визначення титру гемаглюного бронхіту; тининів та інфекційного титру. Курчатам 2,5 неді- піпетки мірні на 1,0-2,5см 3; льного віку, вільних від антитіл до ВХН інокулюва- плексиглазові панелі або апарат Такачі із пали інтраокулярно 0,1см 3 просвітленої алантоїсної нелями V. Петлями на 0,05см 3. рідини (log4 ЕІД50) ВХН-К. Ти три сироватки в РЗГА Для постановки РНГА готували двократні розпроти ВХН-К були в межах 1:256-1:512 із 4 гемагведення сироватки, що досліджували, в розведенлютинуючими одиницями вакцинного вірусу. Позині від 1:2 та ви ще. Для цього в ряд лунок панелі тивну сироватку використовували для ідентифікарозливали по 0,05см 3 гліцеринізованого фізіологіції інших ізолятів ВХН [6]. чного розчину рН7,2, потім у першу лунку вносили Метою наши х досліджень була розробка спопо 0,05см 3 досліджуваної сироватки, ретельно собів отримання діагностичної позитивної контропипетували вміст та переносили в другу лунку, льної сироватки до вірусу інфекційного бронхіту потім в третю і т. інш.. Із останньої лунки рідину, для використання як контрольної при проведенні що титр ується видаляли у дезрозчин. Після цього серологічних досліджень, зокрема в РИГА і ІФА. в кожну лунку вносили по 0,05см 3 антигену в робоПоставлена ціль досягається шляхом імунізачому розведенні (1,5%). Панелі витримували при Т ції 120 денних курчат, вільних від специфічних 20-24°С протягом 25-30 хвилин. антитіл до найбільш поширених вірусни х хвороб Приготування робочого розчину антигену. Наптахів, вакцинним штамом вірусу інфекційного тивний антиген в об'ємі 1,5см 3 розчиняли у 8,5см 3 бронхіту к урей на фоні дії препарату супровофізіологічного розчину рН7,2, який містить 0,5% дження. гліцерину (хч). Методика виготовлення позитивної специфічОблік реакції проводять візуально: у контролі ної сироватки до вірусу ін фекційного бронхіту куякості антигену - фізіологічний розчин з 0,5% глірей. церину та однаковий об'єм антигену у робочому Підготовка штаму для імунізації. У роботі вирозведенні протягом 30 хвилин на дні лунки утвокористовують вакцинний штам вірусу інфекційного рює осад у вигляді пункту (крапки). бронхіту курей Massachusets H-120, який застосоПозитивна реакція із досліджуваними сироватвують у пта хівництві для профілактичних щеплень ками характеризується появою осаду еритроцитів птиці. Штам зберігається у ліофільному стані. Пеу вигляді парасольки на дні лунки із рівними або ред застосуванням вміст флакону із вакцинним зубчастими краями. вірусом розчинюють у 10см 3 стерильного фізіолоНегативна реакція із досліджуваними сироватгічного розчину рН7,2. Потім проводять послідовні ками характеризується випадінням еритроцитів у десятикратні розведення вірусу на фізіологічному вигляду п ункту (крапки) на дні лунки. розчині від 10-1 до 10-10. Для імунізації курчат беПри дослідженні сироватки в РНГА з еритроруть розведення вірусу 10-6-10-7. цитарним діагностикумом інфекційного бронхіту Продуцентами позитивної сироватки були 120 ІЕКВМ середній титр становив 7-8log2 (розведення денні курчата кросу "Шевер-579", які утримувались сироватки 1:128-1:256). в умовах ізолятору Кримської дослідної станції із Порядок дослідження сироваток методом імуоднодобового віку. В досліді було використано 30 ноферментного аналізу(ІФА). голів курчат. Попередньо курчат було двічі досліВикористовували набір для визначення антиджено в РНГА на наявність специфічних антитіл тіл до вірусу інфекційного бронхіту, виробництва до вірусів інфекційного бурситу і бронхіту, хвороби Всеросійського науково-дослідного інституту захиНьюкасла, інфекційного ларинготрахеїту, рео- та сту тварин. Суть методу полягає у виявленні комадено- вірусної хвороби, віспи, хвороби Марека, плексу антиген-антитіло, сорбованого на поверхні інфекційної анемії та енцефаломієліту двічі з негалунок полістеролового планшету. Специфічний тивним результатом. комплекс антиген-антитіло взаємодіє із антивидоСхема імунізації. Імунізацію проводили шлявим імунопероксидазним кон'югатом проти IgG хом інфраорбітального уведення вірус утримуючокурей та викликає розклад субстрату, фарбуючи го матеріалу по 0,2см 3 у розведеннях 10-6 – 10-7. вміст лунок планшету. Інокуляцію проводили тричі з інтервалом одна Сироватки досліджували згідно настанови по доба між ін'єкціями та повторно за тією ж схемою застосуванню набору для визначення антитіл до на фоні застосування препарату супроводження. вірусу інфекційного бронхіту. Облік результатів Через 21 добу після останнього уведення курчат аналізу проводили через 10-15 хвилин після внезнекровлювали і отримували сироватку крові. сення субстрату візуально - за інтенсивністю фарВизначення активності та специфічності отрибування вмісту лунок планшету та інструментальманих сироваток. Активність і специфічність сироно, користуючись системою Біочек або Айдекс, ваток визначали в реакції непрямої гемаглютинашляхом оцінки значень оптичної густини досліджуції, яку ставили мікрометодом, користуючись ваних та контрольних сироваток. Кінцевим розвемікротитратором Такачі, і методом імуноферментденням досліджуваної сироватки вважали останнє ного аналізу, користуючись системою Біочек або її розведення, у якому оптична густина перебільАйдекс. шувала негативний контроль у 2,0 - 2,1 рази. Порядок дослідження сироваток в РНГА. 5 21147 6 При дослідженні отриманих позитивних сиро2. Вербицький П.І. Удосконалення заходів боваток крові методом імуноферментного аналізу ротьби і профілактики інфекційної бур сальної встановлено, що величина оптичної густини перехвороби в сучасних умовах ведення птахівництва більшувала оптичну густин у негативних контрольУкраїни. Автореф. дис. на здоб. н.с. канд. вет. наних сироваток у два рази. Так, оптична густина ук. - X. -2000, с.18. досліджуваних сироваток становила 2,5-3,1. Вста3. Сюрин В.Н., А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьновлено граничний титр досліджуваних сироваток ев, н,в,Фомина Вирусные болезни птиц. ВНИ1:800.(акт випробувальних досліджень додається). ТИБП, М., 1998, с. 183-196. При отриманні сироватки у титрах 1:128-1:256 4. Wright H., En-Min Zhou. Development in interі вище в РНГА та з оптичною густиною відносно national standartization. //Vet. Smmunol. And нормальних сироваток не менше 2,5 і граничним immunopathol. - 1999.- 72 № 1-2 - p. 243-248/. титром не менше 1:800 в імуноферментному ана5. Singh, T.J.Kim, D.N.Tripathy - Re-emergag лізі, сироватки вважали високо активними, птицю fowlpox: evaluation of isolation of isolates from vacciзнекровлювали з подальшим відокремленням сиnated flocks.// Avian Pathology - 2000-29, 449-445/. роватки. 6. Sreenivasa М. Rao, G. Dhinakar Raj, and B. Літературні джерела, прийняті до уваги при Murali Manohar/ An in vitro and in vivo evaluation of експертизі. the vrulence of Newcastle disease virus and vaccines 1. Белявцева О.А. Вивчення антитіло утворенfor the chicken reproductive tract/ Avian Pathology ня до вірусу інфекційної бур сальної хвороби в (2002), 31, 507-513/. організмі великої рогатої худоби. //Ветеринарна медицина України.-1999- № 2, с. 18-19. Комп’ютерна в ерстка М. Мацело Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601