Спосіб одержання видоспецифічної r-бруцелаовісної аглютинуючої сироватки

Спосіб одержання видоспецифічної Rбруцелаовісної аглютинуючої сироватки шляхом імунізації тварин специфічним імуногенним препаратом з наступним відбором крові та відокремленням цільового продукту, який відрізняється тим, що як специфічний імуногенний препарат тваринам-продуцентам багаторазово вводять суспензію інактивованого бактерину з штаму Brucella ovis 67/ "Б" внутрішньовенно в зростаючих дозах через рівні проміжки часу Винахід відноситься до ветеринарної імунологи та мікробіологи, зокрема, до способів одержання діагностичних сироваток з високим вмістом видоспецифічних протибруцелаовісних антитіл, і може бути використаний на підприємствах ветеринарної промисловості для отримання високоспецифічних позитивних сироваток, які входять до складу протибруцельозних діагностикумів Використання видоспецифічної R-бруцелаовісноі аглютинуючої сироватки дозволить підвищити ефективність індикації і диференціації культур бруцел, зокрема культур бруцел виду овіс - збудника інфекційного епідидиміту баранів манні бруцельозних R-сироваток використовують культуру Brucella abortus в R-формі Найбільш близьким до винаходу, що запропонований, є спосіб одержання аглютинуючої Rбруцельозної сироватки (Профилактика и диагностика болезней животных/ /Сиб отд-ние ВАСХНИЛ - Новосибирск, 1983 - С 103 - 107) В даному способі для одержання R-бруцельозноі сироватки використовують кролів, яких заражають внутрішньовенною живою культурою Brucella abortus чотири рази з інтервалом 3 дні в дозах 7,5, 15,5, 22,5 та 45млрд м к Недоліками цього способу є використання культури Brucella abortus, що не дає можливості одержати видоспецифічну сироватку, яка виявляє лише культури Brucella ovis в R-формі Крім того, використання живої культури бруцел є небезпечним для людей і потребує утримання тварин у ізоляторі В основу винаходу, поставлено завдання розробити спосіб одержання видоспецифічної Rбруцелаовісної аглютинуючої сироватки шляхом імунізації тварин специфічним імуногенним препаратом з послідуючим відбором крові та відокремленням цільового продукту, а як специфічний імуногенний препарат тваринам-продуцентам багаторазово вводять суспензію інактивованого бактерину зі штаму Brucella ovis 67/"Б" внутрішньовенною в зростаючих дозах через рівні проміжки часу і що забезпечить отримання видоспецифічної R-бруцелаовісноі сироватки для діагностичних потреб ВІДОМІ способи одержання моноспецифічних (Патент №2104031, RU, від 01 11 1995, кл А61К39/10 «Способ получения моноспецифических сывороток для дифференциации возбудителей бруцеллеза») та видоспецифічних (Михайлова Ю П Разработка средств диагностики бруцеллеза собак, вызываемого Brucella cams Автореф дис канд биол наук - М , 2000 - 27с) сироваток для диференціації різних видів бруцел Відомо про способи одержання Rбруцельозної аглютинуючої сироватки для диференціації культур бруцел (Получение Rбруцеллезной сыворотки на кроликах/ Л В Дегтяренко, И А Косилов, У Э Ниязов, KB Шумилов В кн Профилактика н диагностика болезней животных//(Гиб отд-ние ВАСХНИЛ - Новосибирск, 1983 - С 103 - 107) Ціль способу досягається одержанням сироватки шляхом використання різних схем імунізації продуцентів культурами бруцел в Rформі Але, в запропонованих способах при отри Для цього використовують клінічне здорових 1 ю 49257 кролів, вагою не менше 2 - 2,5кг, яких імунізують багаторазово, через рівні проміжки часу специфічними імуногенними препаратами Через 12 - 14 днів після останнього введення імуногенну, проводять відбір крові шляхом тотального знекровлення Порівняльний аналіз з прототипом дозволяє зробити висновок про те, що заявлений спосіб відрізняється від відомого використанням для імунізації шактивованого бактерину із штаму Brucella ovis 67/"Б", який характеризується високою видоспецифічною антигенною активністю, завдяки чому підвищується видова специфічність сироватки і и діагностична ЦІННІСТЬ, а тварини-продуценти за лишаються вільними від бруцел, не являють собою небезпеки для людей і тварин, не потребують додаткових збитків для ізольованого утримання тварин Спосіб пояснюється такими прикладами Приклад 1 Виготовляють специфічний імуногенний препарат, який являє собою суспензію шактивованих бактерій Brucella ovis штам 67/"Б" Відбирають клінічне здорових кролів вагою не менше 2 - 2,5кг, яких імунізують даним препаратом багаторазово, через рівні проміжки часу, внутрішньовенне в зростаючих дозах (від 1 до 15млрд м к) Через 1 2 - 1 4 днів проводять відбір крові з виділенням сироватки та визначають специфічність та активність сироватки в пластинчатій реакціїаглютинації (РА) до R та S бруцельозних антигенів При наявності позитивної реакції з Rантигеном не менш як на ++ в розведенні сироватки 1 20 і вище, та відсутності позитивної реакції з S-антигеном, проводять знекровлення тваринпродуцентів з наступним відокремленням сироватки Приклад 2 Отримані сироватки (приклад 1) перевіряють на специфічність і активність з живими культурами бруцел видів абортус, мелітензіс, суіс та овіс, які знаходяться в S-, R- і RS- формах (табл ) Сироватка вважається специфічною, якщо вона аглютинує культури Brucella ovis в R-формі і не аглютинує культури інших видів бруцел в Rформі Робочим титром сироватки вважається подвоєний граничний титр в РА з R-антигеном Таким чином, застосування запропонованого способу одержання видоспецифічної Rбруцелаовісної аглютинуючої сироватки дозволяє отримувати специфічну бруцелаовісну сироватку, яка виявляє культури Brucella ovis в R-формі та не виявляє R-форми інших видів бруцел Таблиця Штами Форма В abortus 3/544 RS В abortus 10/19-770 S В abortus 88/7-26 RS В abortus 160/528 S В mehtensis Rev-la RS В suis 153/1154 S В suis 58/1330 S В ovis 76/982 RS В ovis 156/7807 RS В ovis 157/4151 RS В ovis 158/04496 RS В ovis 1-156/7807 R В ovis 67/ "Б" R В ovis 67/ "Б"-1 R В ovis 65/65939 R Контрольний R-антиген Контрольний S-антиген - сироватка одержана на штам В abortus R-бруцелаовісна видова сироватка — — — — — — — — — — — ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ — Контрольні сироватки S R* ++++ + ++++ — ++++ + ++++ — ++++ ++++ ++++ — ++++ — ++ ++ ++++ ++++ +++ +++ +++ ++++ — ++++ — ++++ — ++++ — ++++ — ++++ ++++ — ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71