Спосіб діагностики вірусу епштейна-барр

Корисна модель відноситься до медицини і може бути використана для діагностики вірусу Епштейна-Барр (ВЕБ). Відомий способ діагностики ВЕБ, який включає проведення полімеразної ланцюгової реакції (ПЦР) дослідження сироватки крові, визначення фрагменту ДНК специфічного для ВЄБ за наявністю світіння у ультрафіолетовому сві тлі, яке визначають візуально. [Гаранчена Е.Н. качество лабораторного анализа. Москва: Лабинформ. – 1997 - 192с.]. Недоліком аналога є низька точність діагностики за рахунок суб'єктивної оцінка за характером інтенсивності світіння, що впливає на точність дослідження, а також необхідність дорогих тест-систем та апаратури для проведення ПЦР. Задачею корисної моделі є розробка такого способу діагностики ВЕБ, який за рахунок використання для діагностики об'єктивних кількісних змін площі та яскравості цитоплазми нейтрофільних гранулоцитів крові забезпечував би підвищення точності діагностики та відносно низьку вартість і просту у використанні діагностику ВЕБ. Поставлена задача вирішується тим, що в способі діагностики ВЕБ, який включає морфометричне дослідження мазку крові, згідно з корисною моделлю, при морфометричному дослідженні мазку крові вимірюють площу та яскравість цитоплазми нейтрофільних гранулоцитів крові і при наявності клітин, що мають площу більше 170мкм 2 більше ніж 50% та клітин, що мають яскравість цитоплазми нижче 150ум.од більше ніж 50% діагностують ВЄБ. Вимірювання площі та яскравості цитоплазми НГ, забезпечує підвищення точності діагностики тому, що площа клітин та яскравість цитоплазми клітин є найбільш інформативними параметрами, це також сприяє більш точному визначенню відеотека клітин з великою площею (більше ніж 170мкм 2 і ознаками дегенерації) та низькою яскравістю цитоплазми (нижче 150ум.од. і ознаками низької функціональної активності). Вказані в формулі корисної моделі межі зміни відсотку параметрів НГ отримані в результаті морфометричного дослідження 15-ти пацієнтів з клінічними ознаками ВЄБ представлені в таблиці. Таблиця Значення відсотку нейтрофільних гранулоцитів крові з параметрами площі клітин більше ніж 170мкм 2 та яскравості цитоплазми нижче 150ум.од у пацієнтів з клінічними ознаками ВЄБ (n=15) № п/п 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Пацієнт, код хворого Площа НГ (%) Яскравість НГ (%) Результат дослідження М., 652 Щ., 386 К., 602 К., 292 Д., 92 М., 290 С., 678 Р., 123 К., 124 П., 139 В., 142 И., 141 А., 151 Р.,156 В., 150 73,0% 42,5% 69% 54% 56% 61% 56% 66% 57% 66% 43% 44% 60% 45% 29% 66% 84% 65% 70% 77% 92% 78% 95% 92% 96% 39% 41% 53% 40% 45% Діагностовано Діагностовано Діагностовано Діагностовано Діагностовано Діагностовано Діагностовано Діагностовано Діагностовано Діагностовано Не діагностовано Діагностовано Діагностовано Не діагностовано Не діагностовано Спосіб виконують наступним чином. Беруть кров із пальця і наносять на предметне скло, готують мазки, фіксують 10 хвилин у 96% етиловому спирті, фарбують 15 хвилин за методом Романовського-Гімза та проводять морфометричний аналіз при якому вимірюють площу клітин та яскравість цитоплазми у 30 випадково обраних клітин в різних полях зору при збільшені мікроскопу 400. Подальшу стандартизацію зображення проводять за допомогою аналізатору мікроскопічного зображення, який збільшує розмір клітин до величин придатних для об'єктивного аналізу. Показник площі має найбільшу прогностичну ефективність, специфічність і чутливість. Для морфометричного аналізу площі НГ крові використовують комп'ютерний аналізатор зображення, наприклад Olympus (Японія); програмне забезпечення DP-Soft (Німеччина), Paradise _07_014. Виміри здійснюються методом випадкового вибору 30 клітин в різних полях зору мазку крові. Визначають площу та яскравість цитоплазми НГ і при наявності клітин, що мають площу більшу ніж 170мкм 2 більше ніж 50% відсотків та клітин яскравість цитоплазми нижче 150ум.од діагностують ВЄБ. Приклад 1. У пацієнта Д., 92 з клінічними ознаками ВЄБ, брали кров із пальця, наносили клітинний матеріал на предметне скло, робили мазок, фіксували 10 хвилин у 96% етиловому спирті, фарбували 15 хвилин за методом Романовського-Гімза та проводили вимір 30 випадково обраних клітин в різних полях зору при збільшенні мікроскопу 400. Аналіз результатів морфометричного дослідження НГ показав, що клітини із площею 170-190мкм 2 складали 56%, клітини з яскравістю цитоплазми 130-150ум.од. складали 92%. У пацієнта діагностовано ВЄБ. Проведені ПЦР дослідження підтвердили наявність ВЄБ. Приклад 2. У пацієнта В., 142 з клінічними ознаками ВЄБ брали кров із пальця, наносили клітинний матеріал на предметне скло, робили мазок, фіксували 10 хвилин у 96% етиловому спирті, фарбували 15 хвилин за методом Романовського-Гімза та проводили вимір 30 випадково обраних клітин в різних полях зору при збільшенні мікроскопу 400. Аналіз результатів морфометричного дослідження НГ показав, що клітини із площею 170-190мкм 2 складали 43% клітини з яскравістю цитоплазми 130-150ум.од. складали 39%. У пацієнта не діагностовано ВЄБ. Проведені ПЦР дослідження підтвердили отриманий результат - ВЄБ не виявлено. Запропонований спосіб застосовано у 15 пацієнтів. Результатами досліджень у 12 пацієнтів діагностовано ВЄБ, у 3 пацієнтів - не діагностовано. Подальші дослідження підтвердили отримані результати. В той час коли аналогом, при проведенні ПЦР дослідження у 15 пацієнтів, у 11 пацієнтів -діагностовано, а у 4 пацієнтів - не діагностовано ВЄБ. Проведені подальші дослідження показали, що у одного пацієнта діагноз поставлено помилково. Таким чином, порівняння з найближчим аналогом показує, що застосування запропонованого способу дозволяє підвищити точність діагностики ВЄБ.