Спосіб пасивування клітинної культури l929

Спосіб пасивування перещеплюваної клітинної культури L929, який включає застосування відкріплюючих агентів, який відрізняється тим, що як відкріплюючий агент використовують 3% розчин альбуциду упродовж 5 хвилин при температурі 25°С. (19) (21) u200705527 (22) 21.05.2007 (24) 10.08.2007 (46) 10.08.2007, Бюл. № 12, 2007 р. (72) Мавров Іван Іванович, Джораєва Світлана Карьягдиївна, Кутова Валентина Василівна, Гончаренко Валентина Василівна, Щоголєва Олена Володимирівна 3 25661 L929 з використанням альбуциду, його якість залишається достатньо високою, яка задовольняє спеціалістів. Вибір альбуциду у якості відкріплючого агенту обумовлено такими його відомими властивостями як бактерицидна та бактеріостатична дія по відношенню до різних груп мікроорганізмів, низька цитотоксична дія по відношенню до клітин. Спосіб виконують таким чином: Після створення моношару клітинною лінією L929 ростове середовище видаляють, клітини оброблюють 3% розчином альбуциду (20% розчин сульфацилу 4 натрію розводиться середовищем 199 безпосередньо перед застосуванням, pН 7,6-7,8). Після 5 хвилинної експозиції при кімнатній температурі, альбуцид обережно, не пошкоджуючи клітинного моношару видаляють, клітини ресуспендують у ростовому середовищі і вносять у свіже поживне середовище з розрахунку 2-2,5x105клітин/мл, після чого поміщують у термостат при температурі 35°С. Кількісні характеристики цього агента були визначені дослідним шляхом. Дані представлені і таблиці №1. Таблиця 1 Порівняльна характеристика використання версен-трипсинової суміші та альбуциду для пасивування клітинної лінії L929 Назва показнику Час, необхідний для відшаровування моношару від поверхні скла Час, необхідний для формування клітинного моношару Мітотичний індекс культури (на 1000 клітин) Зберігаємость клітин без заміни середовища Використання 3% розчину Використання версенальбуциду трипсинової суміші 5 хвилин при 25°С 5 хвилин при 35°С Ефективність способу, що замовляється ілюструють наступні приклади його використання. Приклад 1 Клітини лінії L929 засівають у культуральні флакони об'ємом 250мл на поживне середовище 199-50мл з додатковим внесенням 3% ембріональної телячої сироватки, розчину гентаміцину у концентрації 100мкг/мл та амфотерицину В у концентрації 2,5мкг/мл при посівній концентрації 22,5х105клітин/мл. Культуральні флакони поміщують у термостат при температурі 35°С. Після формування моношару клітин лінії L929, поживне середовище видаляють за допомогою мірної піпетки об'ємом 10мл та вносять 5мл суміші 0,02% розчину версену і 0,25% розчину трипсину у поєднанні 3:1 на 5 хвилин при температурі 35°С для відшаровування клітин. Після розпушення моношару клітин, суміш 0,02% розчину версену і 0,25% розчину трипсину не пошкоджуючи моношару видаляють за допомогою піпетки об'ємом 5мл, клітини ресуспендують у 5мл свіжого поживного середовища та засівають у нові культуральні флакони при посівній концентрації 2-2,5x105клітин/мл та поміщують у термостат при температурі 35°С. Час, необхідний для формування моношару дорівнював 48 годин, мітотичний індекс культури складав 29,6. Приклад 2 Клітини лінії L929 засівають у культуральні флакони об'ємом 250мл на поживне середовище 199-50мл з додатковим внесенням 3% ембріонаКомп’ютерна в ерстка А. Рябко 24 години 48 годин 54,7±2,6 29,6±0,1 7 діб Р 6 діб Р