Спосіб визначення концентрації клітин перещеплювальної культури трахеї теляти за допомогою фотокалориметричного приладу

Спосіб визначення концентрації клітин перещеплюваної культури трахеї теляти за допомо Винахід відноситься до ветеринарної медицини, а саме до культивування клітин, які необхідні як біологічний матеріал для репродукції вірусів, вивчення їх біологічних властивостей, ідентифікації, типізування при лабораторній діагностиці інфекційних захворювань тварин Масове приготування тканинних культур у вірусологічних лабораторіях для культивування вірусів при діагностичних дослідженнях на інфекційні захворювання вимагає постійного підрахунку клітин та виведення оптимальної концентрації їх, при пересівах перещеплюваних культур і культивування первинно-трипсинізованих, що є однією з умов отримання в короткі строки моношару клітин Так при засіві в пробірки клітинну суспензію необхідно довести до концентрації клітин 800тис/мл, а якщо в матраси то до 400-500тис/мл Відомим способом визначення концентрації клітин є спосіб підрахунку за допомогою мікроскопа з використанням камери Горяєва, який полягає в тому, що зняті клітини за допомогою диспергуючих розчинів рівномірно змішують з визначеною КІЛЬКІСТЮ рідини і за допомогою капіляра від гемометра Салі вміщують в камеру Горяєва з відомим об'ємом, в якому суспензію клітин розприділяють одним шаром Після ЧОГО проводять підрахунок клітин в камері Горяєва під малим збільшенням мікроскопа (окуляр 7, об'єм 10 ) по всій площі Виводять середню КІЛЬКІСТЬ клітин в камері і проводять підрахунок клітин по формулі (А Н Жуковский, А А Кучерявенко, А Г Гончаренко и др "Методические рекомендации по культивированию гою фотокалориметричного приладу, який включає зняття моношару клітин диспергуючим розчином, який відрізняється, тим що суспензію клітин переносять в кювети, в яких встановлюють оптичну густину клітин за допомогою фотокалориметричного приладу та визначають концентрацію клітин ВІДПОВІДНО оптичної густини суспензії клітин по калібрувальному графіку перевиваемых линий культур клеток СПЭВ - М, ПСП, КЩС, КТП) - Киев , 1987- С 18-19, В С Белоконь, П Т Берус, Б Т Стегний, Р Н Кульбит" Методические рекомендации по консервированию клеточных культур и тканей в условиях низкотемпературных банков " -Харьков- 1993-С 12-14 Недоліком цього способу є його трудомісткість та значні витрати робочого часу на підрахунок клітин та визначення їх КІЛЬКОСТІ ПО формулі В основу винаходу поставлено задачу удосконалити спосіб визначення концентрації клітин та скоротити витрати часу шляхом заміни підрахунку клітин під мікроскопом, на підрахунок їх на фотокалориметричному приладі, що забезпечує більш швидкий і точний підрахунок їх Перевага даного способу полягає в тому, що використання фотокалориметра для підрахунку клітин виключає потребу в мікроскопі, камері Горяєва, капілярі від гемометра Салі та мікрокалькуляторі, а також в необхідності попереднього розведення суспензії клітин для більш якісного підрахунку клітин під мікроскопом та зменшує трудомісткість самого процесу Суть способу полягає у визначенні концентрації клітин перещеплюваної культури трахеї теляти за допомогою фотокалориметричного приладу, який включає зняття моношару клітин диспергуючим розчином, та відрізняється тим, що суспензія клітин переноситься в кювети, в яких встановлюють оптичну густину клітин за допомогою фотокалориметричного приладу та визначається концентрація клітин ВІДПОВІДНО оптичної густини суспензії о> (О 62119 клітин по калібрувальному графіку Спосіб визначення концентрації клітин перещеплюваної культури трахеї здійснюють таким чином 3 культивуючої трьохдобової перещеплюваної культури трахеї теляти в скляних матрасах на поживному середовищі, в склад якого входить 45% середовище 199,45% середовище Ігла та 10% сироватка крові великої рогатої худоби при температурі +37°С з сформованим моношаром зливають поживне середовище і одночасно заливають диспергуючим розчином версена і витримують в термостаті при температурі +37°С на протязі 15-20 хвилин до появи перших ознак відокремлення клітин від поверхні скла Після ЧОГО версен обережно зливають з матрасів і заливають таким об'ємом розчину Ерла без індикатора фенолового червоного, який би лише покрив моношар клітин, що становить 10% від об'єму поживного середовища, що використовується при культивації культури клітин При струшуванні матрасів, клітини відокремлюються від поверхні скла і переходять в розчин Ерла 3 матрасів відбираються проби суспензій клітин в стерильних умовах і переносяться Комп'ютерна верстка Н Лисенко в кювети з робочою довжиною 5 мм, та визначається оптична густина проб на фотокалориметричному приладі КФК-3 проти контролю (контроль дистильована вода) за довжини хвилі 450нм Після встановлення оптичної густини проб проводять визначення концентрації клітин в пробах по каліброваному графіку, де по осі абсцис відмічено різний рівень оптичної густини проб, а по осі ординат ВІДПОВІДНО оптичній густині проб - концентрація клітин в 1мл Було досліджено 34 проби суспензії клітин перещеплюваної культури трахеї теляти, як загальноприйнятим способом, так новим способом Результати досліджень доводять, що спосіб дозволяє набагато швидше і точніше провести підрахунок клітин та скоротити об'єм роботи Враховуючи значну роль вірусологічних досліджень в постановці остаточного діагнозу при тому, чи іншому інфекційному захворюванні, оптимізація виробничого процесу, зменшення рівня його трудомісткості та скорочення витрат часу на вірусологічні дослідження ставить даний спосіб в ряд вагомих внесків в цій галузі ветеринарної медицини Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119