Спосіб оцінки клітинного імунітету периферійної крові слизової оболонки в ділянці перехідної складки присінку ротової порожнини

Спосіб оцінки стану клітинного імунітету периферійної крові слизової оболонки в ділянці перехідної складки присінку ротової порожнини, що включає забір периферійної крові, приготування з цільної крові лейкоконцентрату, визначення субпопуляції Т-лімфоцитів, який відрізняється тим, що забір крові проводиться в ділянці перехідної складки або в ділянці, що прилягає до вогнища запалення як одонтогенного, так і неодонтогенного походження, а як моноклональні антитіла для визначення Т-лімфоцитів використовують антитіла CD3+, CD4+, CD8+, CD16+ та додатково CD25+; HLA-DR. (19) (21) u200813960 (22) 04.12.2008 (24) 27.04.2009 (46) 27.04.2009, Бюл.№ 8, 2009 р. (72) ТКАЧЕНКО ПАВЛО ІВАНОВИЧ, UA, КАЙДАШЕВ ІГОР ПЕТРОВИЧ, UA, СІДАШ ЮЛІЯ ВОЛОДИМИРІВНА, UA, МИТЧЕНОК МАРІЯ ПЕТРІВНА, UA, ЛОБАЧ ЮРІЙ БОРИСОВИЧ, UA, МЯКУШКО АНДРІЙ ВАЛЕРІЙОВИЧ, UA (73) ТКАЧЕНКО ПАВЛО ІВАНОВИЧ, UA, КАЙДАШЕВ ІГОР ПЕТРОВИЧ, UA, СІДАШ ЮЛІЯ ВОЛОДИМИРІВНА, UA, МИТЧЕНОК МАРІЯ ПЕТРІВНА, UA, ЛОБАЧ ЮРІЙ БОРИСОВИЧ, UA, МЯКУШКО АНДРІЙ ВАЛЕРІЙОВИЧ, UA 3 40851 ної крові порожнини рота (Ткаченко П.І., Гоголь A.M. Показники клітинного імунітету зубощелепного сегмента тимчасових зубів при фізіологічній зміні // Матер, міжнар. наук.-практ. конф. "Сучасні технології щелепно-лицевої і хірургічної стоматології". - Івано-Франківськ, 2005. - С. 94.). В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб оцінки клітинного імунітету периферійної крові слизової оболонки в ділянці перехідної складки присінку ротової порожнини шляхом удосконалення відомого способу, який дозволив би об'єктивно судити про рівень імунних реакцій, які відбуваються в тканинах ротової порожнини, що безпосередньо прилягають до вогнища запалення та досягти об'єктивізації інформації щодо стану субпопуляцій лімфоцитів, які беруть участь в цих реакціях. Поставлена задача вирішується шляхом розробки способу оцінки стану клітинного імунітету периферійної крові слизової оболонки в ділянці перехідної складки присінку ротової порожнини, що включає забір периферійної крові, приготування з цільної крові лейкоконцентрату, визначення субпопуляції Т-лімфоцитів, який, згідно корисної моделі, відрізняється тим, що забір крові проводиться в ділянці перехідної складки, або в ділянці, що прилягає до вогнища запалення як одонтогенного, так і неодонтогенного походження, а в якості моноклональних антитіл для визначення Тлімфоцитів використовують антитіла CD3+, CD4+, CD8+, CD16+ та додатково CD25+; HLA-DR. Запропонований спосіб здійснюється наступним чином: 1. Визначається місце забору матеріалу з урахуванням місця розташування уражених тимчасових чи постійних зубів, або ж сегменту ясен, слизової оболонки, що «скомпроментовані». 2. Після визначення ділянки, ураженої патологічним процесом і ізоляції її від ротової рідини ватними тампонами та висушуванням місця вколу, виконується скарифікація перехідної складки чи визначеної ділянки ясен і за допомогою мікропіпетки проводиться забір периферійної крові для дослідження (500 мкл в об'ємі). Комп’ютерна верстка І.Скворцова 4 3. В охолоджену до - 5°С пробірку, що вміщує гепарин (з розрахунку 25 ОД на 1 мл крові), добавляється зібрана кров. 4. Після лізису еритроцитів готується лейкоконцентрат. 5. Проводиться інкубація клітин з моноклональними антитілами (МКАТ) до CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD25+, HLA-DR. Для їх візуалізації проводиться наступна інкубація з РІТС-кон'югованими козячими антитілами до мишиних імуноглобулінів. 6. За допомогою проточного цитофлюориметра „COULTER EPICS XL-МС" проводиться аналіз відсоткового вмісту субпопуляцій Т-клітинних рецепторів лімфоцитів. Приклад використання 1. Проведено дослідження периферійної крові слизової оболонки в ділянці перехідної складки присінку ротової порожнини у практично здорових людей за допомогою непрямого імунофлуоресцентного методу. В якості первинних моноклональних антитіл використовували CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD25+, HLA-DR-мишачі антитіла. Для виявлення комплексу АГ+АТ використовували FITCмічені антитіла. Отримані результати, в загальних рисах, показали нормальну кількість активованих Т-лімфоцитів. Приклад використання 2. Проведено дослідження периферійної крові слизової оболонки в ділянці перехідної складки присінку ротової порожнини при хронічному періодонтиті. У даної групи пацієнтів спостерігалось збільшення кількості Т-лімфоцитів з маркерами CD3+, CD4+, незначне зменшення з маркерами CD8+, CD4+ та незначне збільшення з маркерами CD16+ і CD25+. Отримані результати досліджень, проведених запропонованим методом, дозволяють зробити висновок про високу інформативність аналізу клітинного імунітету периферійної крові слизової оболонки в ділянці перехідної складки присінку ротової, який дозволяє об'єктивно оцінити роль імунних механізмів у патогенезі одонтогенних запальних процесів щелепно-лицевої ділянки та захворювань тканин пародонта. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601