9-аміно-2-метил-5-нітроакридинію етиламіду 3-карбокси-2-хлорсукцинанілат, що проявляє антимікробну, протигрибкову, протизапальну, аналгетичну, діуретичну активність та потенцюючу дію у відношенні до бензилпеніц

Реферат: 9-Аміно-2-метил-5-нітроакридинію етиламіду 3-карбокси-2-хлорсукцинанілат, що проявляє антимікробну, протигрибкову, протизапальну, аналгетичну, діуретичну активність та потенцюючу дію у відношенні до бензилпеніциліну натрієвої солі. Винахід стосується хіміко-фармацевтичної промисловості, зокрема синтезу нових хімічних сполук. Синтезований 9-аміно-2-метил-5-нітроакридинію етиламіду 3-карбокси-2-хлорсукцинанілат структурної формули NH2 CH3 + N H NO2 COOCl NHCOCH2CH2CONHC2H5 , UA 98172 C2 (12) UA 98172 C2 що проявляє антимікробну, протигрибкову, протизапальну, аналгетичну, діуретичну та потенцюючу до бензилпеніциліну натрієвої солі дію. UA 98172 C2 5 10 15 Винахід стосується хіміко-фармацевтичної промисловості, зокрема синтезу 9-аміно-2-метил5-нітроакридинію етиламіду 3-карбокси-2-хлорсукцинанілату, який проявляє антимікробну, протигрибкову, протизапальну, аналгетичну, діуретичну активність та потенцюючу дію у відношенні до бензилпеніциліну натрієвої солі. Пошук нових засобів з широким спектром фармакологічної дії є актуальною проблемою сучасної медицини. Відомий цілий ряд лікарських засобів синтетичного походження, кожен з яких має свою домінуючу дію: етакридину лактат (антимікробна дія), фурацилін та гризеофульвін (протигрибкова дія), вольтарен (протизапальна дія), анальгін (аналгетична дія), гіпотіазид (діуретична дія) (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М: ООО "Издательство Новая Волна", 2005.-1200 с: ил. - С.951, 852, 913, 170, 159, 499). До недоліків зазначених засобів можна віднести, зокрема, наявність у тій чи іншій мірі негативної побічної дії. У комплексному лікуванні виникає необхідність призначення хворому одночасно декількох лікарських засобів з моноспрямованою фармацевтичною дією, внаслідок чого загальна побічна дія підсилюється. За прототип вибраний 6,9-діаміно-2-етоксіакридинію 3,5-динітро-N-(3'-хлорфеніл)антранілат NH2 OC2H5 O N 2 N H N+ H2N 25 Cl NO2 H 20 COO , що виявляє антимікробну, протизапальну, аналгетичну, діуретичну активність та потенцюючу дію у відношенні бензилпеніциліну натрієвої солі (деклараційний патент на винахід №50388 А, Україна, МПК: С07D219/08, А61К31/435. Заявлено 29.12.2001. Опубліковано 15.10.2002. Бюл. №10). Сполука за прототипом має широкий спектр дії, проте ступінь фармацевтичної активності може бути реально підвищений. В основу винаходу поставлена задача по створенню нової хімічної сполуки, що проявляє підвищену антимікробну, протигрибкову, протизапальну, аналгетичну, діуретичну активність та потенцюючу дію у відношенні до бензилпеніциліну натрієвої солі. Поставлена задача вирішується шляхом синтезу нової індивідуальної хімічної сполуки 9аміно-2-метил-5-нітроакридинію етиламіду 3-карбокси-2-хлорсукцинанілату формули NH2 CH3 + N H NO2 30 35 40 45 COOCl NHCOCH2CH2CONHC2H5 , який проявляє антимікробну, протигрибкову, протизапальну, аналгетичну, діуретичну активність та потенцюючу дію у відношенні до бензилпеніциліну натрієвої солі. Речовина, яка заявляється, утворена взаємодією 9-аміно-2-метил-5-нітроакридину та етиламіду 3-карбокси-2-хлорсукцінамілової кислоти у етанольному середовищі. 9-Аміно-2-метил-5-нітроакридиній етиламіду 3-карбокси-2-хлорсукцинанілат - порошок жовтого кольору, розчинний у воді (1:100), етанолі, ДМСО, ДМФА. Будова сполуки підтверджена за допомогою елементного аналізу та ІЧ-спектроскопії, а індивідуальність - методом тонкошарової хроматографії. Винахід ілюструється наступним прикладом Приклад 1. 2,63г (0,01моль) 9-аміно-2-метил-5-нітроакридину розчиняють при нагріванні у 15мл етанолу (розчин №1); 2,99г (0,01моль) етиламіду 3-карбокси-2-хлорсукцинанілової кислоти розчиняють у 10мл етанолу (розчин №2). Потім розчини №1 та №2 змішують. Осад, що випав, відфільтровують, промивають водою та сушать. Вихід 5,08 г (92 %), Ттопл. 214-216 °C, М.м. 551,984. Брутто-формула C27H26ClN5O6. Розраховано: С, % 58,75; N, % 12,68; Н, % 4,02. Знайдено: С, % 58,77; N, % 12,74; Н, % 4,12. -1 ІЧ-спектр у КВr, см : 33345 ( NH,NH ), 2638 ( N  ), 1640 ( asCOO  ), 1438 ( sCOO ), 2  1600 ( C Ph ), 1578 (NH), 1510 ( asNO ), 1412 ( CH ), 1314 ( sNO ), 736 ( Cl ). 2 2 2 1 UA 98172 C2 5 10 15 Rf: 0,44 в системі етанол-хлороформ-гексан (2:1, 5:1). Приклад 2. Визначення антимікробної активності заявленої сполуки проводилося за методом двократних серійних розведень у рідких живильних середовищах (Навашин С.И., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. М.: Медицина, 1982. -С.40-42). Для культивування бактерій використовувався амінопептид, попередньо розведений у два 56 рази дистильованою водою, рН 7,2. Мікробне навантаження склало 10 10 мікробних тіл в 1мл середовища. Для випробування використовувалися 8 штамів мікроорганізмів: 1-Staphylococcus aureus, штам АТСС 25923; 2-Echerichia coli, штам АТСС 7241; 3-Bacillus subtilis, штам АТСС 25922; 4Pseudomonas aeruginosa, штам АТСС 27853, 5-Salmonella choleraesuis; 6-Salmonella thyphimurium; 7-Salmonella thyphisuis, 8-Salmonella duplin. Як критерій фармакологічної активності вибрано рівень мінімальної пригнічуючої концентрації (МПК) та рівень гострої токсичності (DL50). Результати вивчення антимікробної активності та токсичності 9-аміно-2-метил-5нітроакридинію етиламіду 3-карбокси-2-хлорсукцинанілату (сполука № 1), у порівнянні з 6,9діаміно-2-етоксіакридинію 3,5-динітро-N-(3'-хлорфеніл)антранілатом (прототип) та етакридину лактатом наведені у таблиці 1. Таблиця 1 Антимікробна активність і токсичність заявленої сполуки (№1) у порівнянні з прототипом та етакридину лактатом Сполука Сполука №1 Прототип Етакридину лактат 1 2,0 2,8 31,2 МПК (мкг/мл) Штами мікроорганізмів 2 3 4 5 6 2,0 2,0 2,0 5,0 13,0 2,5 2,8 3,8 7,8 31,2 15,6 31,2 62,5 125 250 DL50 (ввутрішньошлунково), мг/кг 7 6,0 10,0 125 8 7,0 12,5 250 >5500 4800 21* Примітка: *DL50 - при внутрішньоочеревинному введенні 20 25 30 35 За даними таблиці 1, сполука №1 активніше етакридину лактату у відношенні до Staphylococcus aureus та Bacillus subtilis у 15,6 разу, у відношенні до Echerichia coli у 7,8 разу, у відношенні до Pseudomonas aeruginosa у 32,25 разу та у відношенні до мікроорганізмів роду Salmonella у 25-35,7 разу. Сполука №1 також перевищує в аналогічних умовах основні характеристики прототипу у відношенні до Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa та у відношенні до організмів роду Salmonella тощо. Крім того, заявлена сполука є дещо менш токсичною ніж прототип і значно менш токсичною ніж етакридину лактат. Приклад № 3. Визначення протигрибкової активності проводилось за відомою методикою (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Бригера - 3-е изд. перераб. и доп. - М.: Медицина, 1982. - С. 392-417). Для вирощування грибів використовувалось середовище Сабуро (рН=6,5-6,7). Навантаження склало 500-600 репродуктивних тілець штамів Candida albicans або Trichophyton rubrum в 1мл середовища. Протигрибкову дію оцінювали за мінімальною мікостатичною концентрацією (ММК), вираженою в мкг/мл. Результати вивчення протигрибкової активності та токсичності 9-аміно-2-метил-5нітроакридинію етиламіду 3-карбокси-2-хлорсукцинілату (сполука № 1) у порівнянні з прототипом, фурациліном та гризеофульвіном наведені в таблиці 2. 2 UA 98172 C2 Таблиця 2 Протигрибкова активність та токсичність заявленої сполуки (№1) у порівнянні з прототипом, фурациліном та гризеофульвіном Сполука Сполука № 1 Прототип Фурацилін Гризеофульвін 5 10 15 20 Штами грибків, ММК (мкг/мл) Candida albicans Trichophyton rubrum 12,5 22,0 30,0 64,0 50 DL50 (внутрішньоочеревинно) мг/кг >2200 1020 82,5 немає даних За результатами дослідження, наведеними у таблиці 2, сполука №1 інгібує ріст Candida albicans у концентрації у 5,12 разу меншій ніж фурацилін. Крім того, сполука №1 у 26,7 разу менш токсична ніж фурацилін при внутрішньочеревному введені. Прототип не проявляє протигрибкову дію у відношенні до Trichophyton rubrum. В результаті експерименту встановлено також, що заявлена сполука є менш токсичною, ніж наведені препарати порівняння та прототип. Таким чином, заявлена сполука перевищує прототип та препарати порівняння за широтою протигрибкової дії. Приклад 4. Вивчення протизапальної активності проводилося на моделі карагенінового набряку (Яковлева Л.В., Зупанец И.А. Использование модели каррагенинового отека у мышей при поиске противовоспалительных средств. // Деп. в УкрНИИНТИ 07.07.87.- №1908. - Ук. 87). Як критерії фармакологічної активності вибрані ізоефективна доза (DE50), при якій фармакологічний ефект одержується в 50 % випадків у експериментальній групі тварин; рівень гострої токсичності (DL50); терапевтичний індекс ТІ (показник відношення DL50/DE50); відносний терапевтичний індекс. Результати вивчення протизапальної активності та токсичності 9-аміно-2-метил-5нітроакридинію етиламіду 3-карбокси-2-хлорсукцинанілату (сполука №1) у порівнянні з прототипом та вольтареном наведені в таблиці 3. Таблиця 3 Протизапальна активність та токсичність заявленої сполуки (№ 1) у порівнянні з прототипом та вольтареном Сполука Сполука № 1 Прототип Вольтарен 25 30 35 DE50, мг/кг DL50, мг/кг Терапевтичний індекс 5,7 6,25 8,0 >5500 >4800 360 964,9 768 45 Відносний ТІ по вольтарену 21,44 17,07 1 Як видно за даними таблиці 3, сполука №1 має виражену протизапальну активність, за широтою терапевтичного ефекту перевищує вольтарен у 21,44 разу, а прототип у 1,25 разу. Приклад 5. Вивчення аналгетичної активності 9-аміно-2-метил-5-нітроакридинію етиламіду 3-карбокси2-хлорсукцинанілату (сполука № 1) проводилося за методом "оцтових корчів" у білих лабораторних щурів масою 150-180 г (Доклінічні дослідження лікарських засобів (методичні рекомендації) / За редакцією члена-кор. АМН України О.В.Стефанова. -К.: Авіцена, 2001. С.307-320). Корчі були викликані внутрішньоочеревним введенням розчину 0,75 % оцтової кислоти у дозі 1мл на 100г маси тіла тварини. Підрахунок кількості корчів проводили через 15 хвилин після введення розчину оцтової кислоти протягом 30 хвилин. Як критерії фармакологічної активності вибрані ізоефективна доза (DE50), при якій аналгетичний ефект одержується в 50 % випадків у експериментальній групі тварин; рівень гострої токсичності (DL50); терапевтичний індекс (ТІ); відносний терапевтичний індекс. Результати вивчення аналгетичної активності та токсичності сполуки №1 у порівнянні з прототипом та анальгіном наведені в таблиці 4. 3 UA 98172 C2 Таблиця 4 Аналгетична активність та токсичність заявленої сполуки (№ 1) у порівнянні з прототипом та анальгіном Сполука 10 15 DL50, мг/кг Сполука №1 Прототип Анальгін 5 DE50, мг/кг 12,9 20,6 55 >5500 >4800 1197 Терапевтичний індекс (ТІ) >426,36 233 21,8 Відносний ТІ по анальгіну 19,56 10,69 1 Як видно за даними таблиці 4, сполука № 1 за широтою терапевтичної дії перевищує анальгін в 19,56 разу та дещо вища, ніж у сполуки за прототипом. Приклад 6. Вивчення діуретичної активності проводили за методою Е.Б.Берхіна (Методы изучения действия новых химических соединений на функцию почек / Хим.-фармац. журн.-1977. - Т.11, №5. - С.3-11) на білих щурах лінії Вістар масою 120-160г. Кожна серія складалася з 7 тварин. Кожну з досліджених сполук (заявлена сполука, сполука за прототипом, препарат порівняння гіпотіазид) вводили у дозі 50мг/кг у водному розчині з розрахунку 3мл води на 100г ваги тварини. Тварини контрольної групи одержували лише воду. Сечу збирали кожну годину протягом 4 годин. Як критерій фармакологічної активності вибрано об'єм сечі досліджених тварин, розрахований у відсотках у порівнянні з контролем. Результати вивчення діуретичної дії сполуки №1, прототипу та гіпотіазиду наведені у таблиці 5. Таблиця 5 Діуретична активність заявленої сполуки (№ 1) у порівнянні з прототипом та гіпотіазидом Сполука Діуретична активність, в % до контролю 305 242 212 Сполука № 1 Прототип Гіпотіазид 20 25 30 Як видно за даними таблиці 5, сполука № 1 за діуретичною дією перевищує гіпотіазид на 93 %, а прототип на 63 %. Приклад 7. Визначення потенцюючої дії 9-аміно-2-метил-5-нітроакридинію етиламіду 3карбокси-2-хлорсукцинанілату (сполука №1) проводилося у суббактеріостатичній концентрації як мікродобавки до бензилпеніциліну натрієвої солі. Тест-моделлю були серійні двократні розведення в рідкому живильному середовищі. Як розчинник використовувалася вода для ін'єкцій. Для випробування використовувалися 2 штами мікроорганізмів: Staphylococcus aureus та Pseudomonas aeruginosa. Як критерій фармакологічної активності вибрано рівень мінімальної пригнічуючої концентрації (МПК). Результати описаного дослідження наведені у таблиці 6. Таблиця 6 Потенціююча дія сполуки №1 та прототипу у відношенні до бензилпеніциліну натрієвої солі Сполука Бензилпеніциліну натрієва сіль (БПNа) BПNa + сполука №1 BПNa + прототип Штам мікроорганізмів, МПК мкг/мл Pseudomonas Staphylococcus aureus aeruginosa 0,9 15,6 0,25 1,54 0,4 2,5 4 UA 98172 C2 5 10 За даними таблиці 6, сполука №1 в суббактеріостатичній концентрації підвищує активність антибіотика у відношенні до Staphylococcus aureus в 3,6 разу, у відношенні до Pseudomonas aeruginosa в 10,13 разу. Активність прототипу у даному випадку нижча в 2,25 разу та 6,24 разу, відповідно. Таким чином, заявлена сполука 9-аміно-2-метил-5-нітроакридинію етиламіду 3-карбокси-2хлорсукцинанілату проявляє широкий спектр фармакологічної дії: антимікробну, протигрибкову, протизапальну, аналгетичну, діуретичну та потенцюючу до бензилпеніциліну натрієвої солі. За окремими видами активності вона перевищує дію препаратів порівняння етакридину лактату, фурациліну, гризеофульвіну, вольтарену, анальгіну, гіпотіазиду. Крім того, собівартість одержання заявленої сполуки нижча за собівартість сполуки за прототипом. Заявлена сполука може знайти застосування у медичній практиці при створенні лікарських засобів у різних лікарських формах для лікування інфекційних та запальних процесів різної етіології, а також середньої сили больових синдромів. 15 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 9-Аміно-2-метил-5-нітроакридинію формули: етиламіду 3-карбокси-2-хлорсукцинанілат структурної NH2 CH3 + N H 20 NO2 COOCl NHCOCH2CH2CONHC2H5 , що проявляє антимікробну, протигрибкову, протизапальну, аналгетичну, діуретичну та потенцюючу до бензилпеніциліну натрієвої солі дію. Комп’ютерна верстка Н. Лисенко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 5