Спосіб лікування дефектів рогівки при травмах

Спосіб лікування дефектів рогівки при травмах, що включає нанесення культивованих стовбурових клітин на внутрішню поверхню м'якої контактної лінзи із подальшим розміщенням її на рогівку, який відрізняється тим, що як стовбурові клітини використовують культуру стромальних клітин, яку включають в колагеновий гель. (19) (21) u200901258 (22) 16.02.2009 (24) 25.06.2009 (46) 25.06.2009, Бюл.№ 12, 2009 р. (72) БЕРЕЖНА МАРІЯ СЕРГІЇВНА, СУХІНА ІРИНА ВІТАЛІЇВНА, ПОПАНДОПУЛО АНДРІЙ ГЕНАДІЙОВИЧ, КАВЕЛІНА АННА СТАНІСЛАВОВНА (73) ДОНЕЦЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМ. М. ГОРЬКОГО 3 42269 клітини в такий спосіб: аспірат кісткового мозку розбавляють розчином Хенкса і розливають в центрифужні пробірки об'ємом 50 мл, додавши туди градієнт в співвідношенні 1:1, центрифугують зі швидкістю 1800-2000об/хв на протязі 30 хвилин при кімнатній температурі. У центрифужну пробірку з розчином Хенкса збирають клітини інтерфази, виконують ресуспензію. Центрифугують 8001000об/хв. 8-10хв. Зливають надосадок в розчин Хенкса. Повторюють центрифугування три рази, після осідань ресуспендують в ростовому середовищі DMEM/F12 (Sigma, США), 20% ETC (Біолот, Росія), висівають в культуральні флакони 75см2 (Nuclon, США) щільністю 1-210см2 і інкубують при 37°С на протязі 3-х днів. Через 3 дні клітини, що не прикріпляються, видаляють при зміні середовища, далі середовище міняють кожні 2 дні. Для приготування трансплантата використовують колагеновий гель 1 типу, стромальні стовбурові клітини 2-3 пасажів і м'які контактні лінзи. Перед приготуванням трансплантата м'яку контактну лінзу промивають розчином Хенкса. Стромальні стовбурові клітини після пасивування розчином трипсин-версена (1:5) центрифугують. Клітинну суспензію обережно піпетірують в пенфлаконі, що містить середовище 199, глутамін, Hepes, середовище Ігла («Біолот», Росія), колаген і обережно наносять на внутрішню поверхню м'якої контактної лінзи. При цьому всі операції по приготуванню колагенового гелю проводять на холоді (на льоду) в асептичних умовах. Приготований трансплантат поміщають в термостат при температурі 37°С і протягом 2 годин м'яку контактну лінзу поміщають на рогівку. Тривалість носіння м'якої контактної лінзи складає до двох діб. При необхідності лінзу із стромальними стовбуровими клітинами замінюють кожні 2 доби. Було проліковано 10 пацієнтів з різноманітною патологією рогівки. У всіх випадках був зафіксований позитивний ефект. Конкретний приклад реалізації способу: Комп’ютерна верстка Н. Лиcенко 4 Хворий М., 44р. Поступив з діагнозом: рубець рогівки, кератопатія правого ока, через 1міс. після травми. На час вступу зір правого ока 0,01н/к. Скарги на світлобоязнь, сльозотечу, блефароспазм. Об'єктивно: дифузний набряк рогівки, в оптичній зоні рубець з рихлими краями, 2 шви, передня камера задовільної глибини, катаракта, рефлекс з очного дна блідо-рожевий. Протягом подальших 7 днів активного консервативного лікування позитивної динаміки немає. У зв'язку з цим хворому пропонують трансплантацію стромальних стовбурових клітин в колагеновому гелі на м'якій контактній лінзі. Через 2 доби контактна лінза була видалена з поверхні рогівки. За цей час рубець рогівки став щільнішим, краї адаптовані, що дозволило зняти шви, набряк рогівки регресував, відновилася глибина передньої камери. Гострота зору підвищилася до 0.05. Суб'єктивно хворий відзначав покращення. За допомогою даного способу одержують матеріал високого проліфераційного потенціалу, який має високу здібність до міграції, адгезії і легко індукованого диференціювання, трансдифференціювання, секреції численних цитокинів, ростових чинників, і створюють необхідне мікрооточення для прогеніторних клітин. Ці переваги, характерні для стромальних стовбурових клітин, дозволяють скоротити терміни носіння м'якої контактної лінзи до 2 діб, що веде до зниження ризику виникнення ускладнень. Т.ч., спосіб застосування стромальних стовбурових клітин в колагеновому гелі на поверхні м'якої контактної лінзи при ушкодженнях рогівки є високоефективним і рекомендованим для клінічного застосування. Джерела інформації: 1.Застосування фетальних клітин рогівки людини для лікування різноманітної патології органа зору «Офтальмохірургія» 1999 №4, С.2-9 Е.В.Ченцова, Г.Г.Петріашвілі, И.А.Фоміна и др. 2. Патент №2189206, RU, МКИ A61F9/00. Опубліковано 20.09.2002. База Internet. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601