Спосіб оцінки функціонального стану т-лімфоцитів

Спосіб оцінки функціонального стану Тлімфоцитів, що включає забір крові, її стимуляцію Винахід відноситься до медицини, а саме до клінічної імунологи і може бути використаний в будь-якій галузі медицини Відомо спосіб вивчення КІЛЬКОСТІ Т-лімфоцитів в реакції розеткоутворення та за допомогою моноклональних антитіл СДЗ (1,2) Проте спосіб має ряд недоліків 1 Вивчається кількісна характеристика Тлімфоцитів 2 Не оцінюється функціональний стан Тклітин, від якого залежить ефективність імунної ВІДПОВІДІ 3 Використовуються іноземні реактиви, що дорого коштують — філол , середовище 199, сироватка ВРХ Найближчим аналогом-прототипом до заявленого способу є спосіб оцінки функціонального стану Т-лімфоцитів в реакції бласттрансформацм лімфоцитів (3) Спосіб здійснюють таким чином кров хворого шкубується в середовищі 199 з додаванням сироватки великої рогатої худоби (ВРХ) в стерильних умовах Стимуляцію Т-лімфоцитів для оцінки їх функціонального стану проводять за допомогою фітогемагглютиншу (ФГА) Підраховують КІЛЬКІСТЬ КЛІ тин-бластів в контролі (без ФГА) та ДОСЛІДНІЙ крові і по їх рівню в досліджуваній крові оцінюють функціональний стан Т-лімфоцитів Проте даний спосіб має ряд недоліків 1 Використовують ФГА виробництва різних фірм, що потребує визначення дози реактиву для кожного препарату окремо 2 Необхідно використовувати реактиви, що та інкубацію, який відрізняється тим, що як стимулятор використовують електромагнітне поле надвисокої частоти з низьким рівнем випромінювання, довжиною хвилі 5 мм, частотою 37-78ГГц, 18 19 2 ЩІЛЬНІСТЮ потоку — 10 — 10 ВТ/см , і за 72 години підраховують КІЛЬКІСТЬ бласттрансформованих клітин та за їх КІЛЬКІСТЮ В досліджуваній крові, опроміненій електромагнітним полем, оцінюють функціональний стан Т-лімфоцитів дорого коштують фірм "Difco", "Wellcome", "Reanai" 3 Терміни використання цих препаратів обмежені 4 ФГА вітчизняного виробництва не існує Завданням винаходу є стандартизація та уніфікація способу оцінки функціонального стану Тлімфоцитів Поставлене завдання згідно винаходу досягається тим, що в якості стимулятора використовують електромагнітне поле (ЕМП) надзвичайно високої частоти з низьким рівнем випромінювання (Довжина хвилі = 5мм частота 37 - 78ГГц, ЩІЛЬНІСТЬ потоку 10 1 8 - 10 Вт/см2) Спосіб здійснюють таким чином кров з пальця хворого в КІЛЬКОСТІ 0,1 - 0,2мм вносять стерильно у 2 пробірки з розчином гепарину (20од/м) Після цього першу пробірку (дослідну) опромінюють низько інтенсивним полем ЕМП КХЧ діапазону на протязі 4 - 5 хв На відстані 2 - Зсм Друга пробірка (контроль) не опромінюється Після ЦЬОГО у пробірки вносять 4мл поживного середовища 199 та 1мл сироватки великої рогатої худоби з додаванням ЮОод пеніциліну, їх шкубують в термостаті при 37°С 72 години, після чого роблять мазки і підраховують КІЛЬКІСТЬ бласттрансформованих під впливом ЕМП клітин По їх рівню в ДОСЛІДНІЙ (опроміненій) пробі оцінюють функціональний стан Т-клітин Неопромшена проба з кров'ю служить контролем В попередніх дослідженнях було встановлено, що оптимальна тривалість опромінювання крові 4 - 5 хв Цього часу достатньо для того, щоб прос 00 (О о 44068 18 тимулювати лімфоцити 3 цього часу опромінювання їх рівень залишається незмінним (дослід до Юхв) Спосіб, що заявляється, вирішує завдання підвищення точності діагностики шляхом стандартизації та уніфікації стимулюючого впливу на Тлімфоцити За цим способом було обстежено 53 хворих Спосіб ілюструється наступними прикладами Приклад 1 Дитина С , 12 років Проведено вивчення функціонального стану Т-лімфоцитів З цією метою кров з пальця дитини в КІЛЬКОСТІ 0,2МГ вносять в дослідну і контрольну пробірки Дослідну опромінюють 4 хвилини низько інтенсивним (10 2 Вт/см ) ЕМП КХЧ діапазону Контрольну пробу не опромінюють Інкубують в поживному середовищі 72 години та підраховують КІЛЬКІСТЬ бласттрансформованих клітин, їх КІЛЬКІСТЬ В контрольній пробі 4%, в ДОСЛІДНІЙ - 76% Таким чином КІЛЬКІСТЬ бла сттрансформованих лімфоцитів складає 76%, що відповідає рівню у здорових дітей (70 - 75%) Приклад 2 Хворий К, 9 років Проведено вивчення бласттрансформацм Т-клітин для оцінки їх функціонального стану за вище наведеною методикою Рівень бластів в ДОСЛІДНІЙ пробі 45%, в контрольній - 2% КІЛЬКІСТЬ 45% відповідає зниженому функціональному стану Т-клітин Переваги способу подано у табл 1 Таблиця 1 Відомий метод Метод, що пропонується 0>rA"Difco", 'Wellcome", "Reanai" Низько інтенсивне ЕМП КХЧ діапазону 1 Стимулятори, що використовуються 2 Стандартизація способу Неможлива у зв'язку з тим, що Можлива Використовуактивність різних препаратів ється ЕМП із стандартиФГА різна зованими показниками Необхідність набору при використанні стимуляторів контрольних груп Для кожного препарату ФГА необхідна своя контрольна група і вибір оптимальної сти- Контрольна група набирається один раз мулюючої дози для кожного виду препарату = реактиву Простота способу Необхідно вводити в стерильКров опромінюється них умовах в пробірки ФГА крізь пробірку, що не Можлива бактеріальна заплід- порушує стерильні умоненість ви постановки реакції 3 4 5 Стимулятори, що використовуються Іноземні, що дорого коштують Таким чином, низько інтенсивне ЕМП КХЧ діапазону можливо використовувати в якості стимулятора Т-клітин, що дає можливість оцінити функціональний стан Т-клітин, а також стандартизувати, спростити і зробити ці дослідження більш дешевими Метод стимуляції Тлімфоцитів та оцінка їх функціонального стану може широко використовуватися в лабораторних умовах в будь-якій галузі медицини та біологи Список літератури 1 Bach J F Evaluation of T-cell and thymic Стандартний прилад "Політон", виготовляється серійно за стандартною технологією serum factors in man assign the rosette technique — Transplant & Rev, 1973 — 1 6 — p 196 2 Parks R R , Zamer Z Z , Herrenberg Z A Flow cytometry and fluorescence antivated cell sorting (FACS) Experimental Immunology, 1986 Chapter 29, p 513-518 3 Копеллян И И , Григорьева М П Разработка микромодификаций культивирования клеток крови человека // Биол экспер биол и мед — 1972№8 — с 119-122 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90