Спосіб визначення кількості т- та в-лімфоцитів у крові тварин

Спосіб визначення КІЛЬКОСТІ Т - та В лімфоцитів у крові тварин, що включає забір крові, гепаринізацію, виділення лейкоцитів, інкубацію в присутності індикаторних часток та підрахунок розеткоутворюючих клітин, який відрізняється тим, що для забору крові достатньо об'єму менше 10мл, а для виділення лейкоцитів застосовують метод відстоювання чає забір крові, гепаринізацію, виділення лейкоцитів, інкубацію в присутності індикаторних часток та підрахунок розеткоутворюючих клітин, при цьому для забору крові достатньо об'єму менше 10 мл, а для виділення лейкоцитів застосовують метод відстоювання замість використання градієнту ЩІЛЬНОСТІ (фіколл-верографін) Використання гепаринізованої крові, інкубація в присутності індикаторних часток, та підрахунок розеткоутворюючих клітин у прототипі є спільними ознаками зі способом, що заявляється Для здійснення запропонованого способу відбирають 1,5-2 мл крові, яку стабілізують антикоагулянтом Кров відстоюють протягом години або центрифугують при 1,5 тис об/хвилину 10-15 хвилин -для розшарування Пастеровською піпеткою відсмоктують середній шар (лейкоцити) в пробірку і додають 0,5 мл дистильованої води і 0,2 мл середовища 199 Отриману сумішь ресуспензують і центрифугують 5 хвил при 1000 об/хвил Осад відмивають 2 рази фізіологічним розчином В окрему пробірку вносять 3 краплі отриманої суспензії лейкоцитів, додають 3 краплі завісі відмитих еритроцитів барана Сумішь шкубують в термостаті 5 хвилин при 37°С, потім центрифугують 5 хвил при 1000 об/хвил , охолоджують в холодильнику, де витримують при +4°С 40 хвилин ( при необхідності час можна збільшити до 24 годин) Після ЦЬОГО В пробірку додають 1 краплю 0,6% розчину глутарового альдегіду, витримують 10 хвилин при кімнатній температурі, а потім відмивають фізіологічним розчином До осаду додають 0,2 мл середовища 199, ресуспензують і роблять О о (О ю 45600 мазок Мазок висушують, фіксують і фарбують по ли розчином глутарового альдегіду, робили мазки, Романовському-Гімза 10 хвилин фарбували їх по Романовському-Гімза і підраховували під мікроскопом КІЛЬКІСТЬ Е-РУК(ТПроводять підрахунок КІЛЬКОСТІ розеткоутволімфоцитів) рюючих лімфоцитів на 100 клітин 3 урахуванням лейкоформули і відсоткового вмісту лімфоцитів Приклад 2 встановлюють відсоток Е-РУК в 1 мкл крові У 20 свиней відбирали проби крові по 2 мл, стабілізували гепарином Отримували лейкомасу Для визначення КІЛЬКОСТІ В-лімфоцитів анало(як в прикладі 1) До відмитих лейкоцитів додавали гічно отримують суспензію лейкоцитів До 3 кразавісь відмитих еритроцитів білої миши, консервупель суспензії лейкоцитів додають з краплі завісі вали розчином глутарового альдегіду, робили мазвідмитих еритроцитів білих мишей Далі техніка ки, фарбували їх по Романовському-Гімза і підраметоду узгоджується з вищеописаною методикою ховували під мікроскопом КІЛЬКІСТЬ ЕА-РУК(Впідрахунку Т-лімфоцитів лімфоцитів) Приклад 1 У свиноматок учгоспу "Коммунар" СімфероСпосіб визначення КІЛЬКОСТІ Т- та В-лімфоцитів польського району АРК відбирали проби крові в в крові тварин дає можливість зменшити затрати КІЛЬКОСТІ 2 мл від кожної, стабілізували гепарином на придбання дорого коштуючих, дефіцитних реакКров центрифугували для розшарування і відсмоктивів, є більш доступним для широкого кола фахітували пастерівською піпеткою середній шар (лейвців ветеринарної медицини, знижує трудоємкість комасу) Лейкоцити відмивали середовищем 199, проведення досліджень додавали завісь еритроцитів барану, консервува ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71