Спосіб отримання інокулюма для створення інфекційного фону збудника церкоспорозу – гриба cercospora beticola

Спосіб отримання інокулюма для створення інфекційного фону збудника церкоспорозу - гриба Cercospora beticoia, який включає вирощування чистої культури гриба, отримання інокулюма у вигляді конідій, приготування робочої суспензії інокулюма та нанесення інокулюма на рослини, який відрізняється тим, що інокулюм отримують у вигляді міцеліальноГ маси чистої культури гриба, яку вирощують на рідкому живильному середовищі. Корисна модель відноситься до галузі сільського господарства, зокрема, створення штучного Інфекційного фону, а саме дослідження патогенних властивостей гриба Cercospora beticoia - збудника церкоспорозу та визначення стійкості буряків до церкоспорозу. Відомий спосіб отримання інокулюму для створення інфекційного фону збудника церкоспорозу шляхом зараження конідіями гриба Cercospora beticoia, які отримують змиваючи їх водою безпосередньо з поверхні листків буряків уражених церкоспорозом. Зараження проводять шляхом обприскування листя буряків суспензією конідій (Изучение и поддержание мировой коллекции корнеплодов (свекла, репа, турнепс, брюква). Методические указания /Под ред. Буренина В.И. Л.. ВИР, 1989.-165 с ) . Відомий спосіб не забезпечує отримання однорідного і но кул я ці иного матеріалу, тому що не дозволяє уникнути потрапляння до Інокулюму спор та конідій інших патогенів, а також не дає змоги провести розмежування конідій ізолятів гриба Cercospora beticoia на рослині, що не дозволить провести дослідження диференціації' вірулентності ізолятів збудника та визначити специфічність стійкості тестерних ліній буряків до різних ізолятів патогену. Крім того строки отримання Інокулюму будуть залежати від часу появи на рослинах проявів захворювання або потребувати попередньої обробки інокулюмом, отриманим в лабораторних умовах. Найбільш близьким за сукупністю ознак до пропонованої корисної" моделі є спосіб створення інфекційного фону з використанням в якості іноку люму суспензії конідій яку готують змиваючи стерильною дистильованою водою конідії з поверхні колонії культури ІЗОЛЯТІВ збудника, який росте на поверхні агаризованого живильного середовища з екстракту листя цукрових буряків Отриману суспензію конідій доводять водою до встановлених норм та використовують як робочий інокуляційний розчин. Нанесення відбувається шляхом обприскування суспензією листя буряків (Ruppel E.G. Variation among isolates of Cercospora beticoia from sugar beet //Phytopathology, 1972. - Vol. 62. - №1. P. 134-136). Відомий і пропонований способи мають спільні суттєві ознаки, а саме вирощування чистої культури гриба на живильному середовищі, виділення інокулюму, приготування робочої суспензії інокулюму та нанесення інокулюму на рослини. Проте, незважаючи на це, відомий спосіб не забезпечує отримання необхідної кількості інокулюму тому що процес отримання конідій гриба Cercospora beticoia шляхом мікробіологічного культивування має певні технологічні складності, процес утворення КОНІДІЙ ("спороношення") відбувається лише на агаризованому середовищі з екстрактом листя цукрових буряків, яке за поживною та енергетичною цінністю є збідненим і тому ріст грибної колонії та утворення конідій відбувається дуже повільно. Кількість отриманого в такий спосіб інокулюму (суспензії конідій) являє собою значно меншу частину від отриманої біологічної маси. Інтенсивному росту та процесу спороношення культури сприяє введення в середовище набору макро- та мікроелементів, гормонів і вітамінів, а їх застосування в свою чергу підвищує вартість отриманого іноку 00 4598 люму, що при масових дослідженнях знижує рентабельність цього способу. Крім того, збуднику властива значна генетична мінливість, яка зумовлена передусім соматичними мутаціями; які можуть бути легко індуковані дією ультрафіолетового світла на протязі кількох хвилин на конідії Cercospora beticola Тому визначення расової специфічності ізолятів гриба може бути необ'єктивним через генетичну неоднорідність інокулюму. В основу корисної моделі поставлено задачу вдосконалити спосіб отримання інокулюму для створення інфекційного фону збудника церкоспорозу - гриба Cercospora beticola шляхом використання в якості інокулюму міцеліальної маси гриба, з підбором оптимальних умов його культивування, та підготовки інокулюму перед зараженням рослин, що забезпечить отримання однорідного інокуляційного матеріалу ізолятів гриба Cercospora beticola з високою інокуляційною здатністю та скоротить час його отримання. Поставлена задача досягається тим, що у відомому способі отримання Інокулюму для створення інфекційного фону збудника церкоспорозу гриба Cercospora beticola, який включає вирощування чистої культури гриба на агаризованому середовищі, отримання інокулюму у вигляді конідій, приготування робочої суспензії інокулюму та нанесення інокулюму на рослини, згідно з корисною моделлю, інокулюм отримують у вигляді міцеліальної маси чистої культури гриба, яку вирощують на рідкому живильному середовищі. Використання корисної моделі дозволить отримувати в необхідному об'ємі генетично однорідний інокуляційний матеріал гриба Cercospora Комп'ютерна верстка А. Крулевский beticola з високою вірулентною здатністю для створення інфекційного фону збудника церкоспорозу при проведенні досліджень в лабораторних та в польових умовах. Пропонований тип інокулюму має високу інфекційну здатність та забезпечує стабільне та достовірне зараження рослинтестерів для визначення стійкості буряків до церкоспорозу. Спосіб здійснюють наступним чином. Міцеліальну масу збудника церкоспорозу отримують шляхом засіву чистої культури гриба Cercospora beticola в культиваційні ємності з рідким живильним середовищем. Культури грибів інкубують при температурі 25±1°С, 16-ти годинному освітленні флуоресцентними лампами денного світла та з перемішуванням протягом 25-ти денного періоду По закінченню строку культивації міцеліальну масу відокремлюють від культуральної рідини та додають стерильну водогінну воду у об'ємному співвідношенні 1:2. Отриману суміш перемішують подрібнюючи міцелій за допомогою гомогенізатора до стану суспензії. В такому вигляді концентрат інокулюму переливають в стерильні флакони потрібної ємності де він може зберігатися до моменту використання при температурі +4°С протягом одного місяця. Перед проведенням інокуляції рослин буряків концентрат інокулюму ізолятів гриба Cercospora beticola переводять у робочу суспензію шляхом розведення в водою у співвідношенні 1:5. Суспензія міцелію наноситься обприскуванням листя буряків Інкубаційний період залежить від погодних умов та властивостей дослідних рослин і дорівнює 7-14 діб. Підписне Тираж 37 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601