Спосіб отримання хламідоспор гриба botrytis cinerea pers.

Винахід відноситься до області сільського господарства і може бути використаний у фітопатології для прогнозування розвитку хвороби та селекційному процесі для виявлення донорів стійкості рослин. Відомо, що збудник сірої гнилі гриб-космополіт Botrytis cinerea Pers. в циклі свого розвитку формує хламідоспори, які являють собою одну з найбільш стійких форм у циклі розвитку гриба до дії несприятливих факторів (Urbasch I. Uber Entstehung und Keimung der Chlamydosporen von Botrytis cinerea Pers. // Phytopath. Z. 1983. - Vol. 108, №1. - P.54-60). Для отримання хламідоспор у штучних умовах І. Urbasch (1983) пропонує культивувати гриб В. cinerea на 2%-му біомальц агарі при температурі понад 30°С. За таких умов процес формування даних структур відбувається після 30 діб культивування. Водночас, даний спосіб має ряд недоліків, серед яких досить тривалий період очікування для появи хламідоспор (30 діб) протягом котрого необхідно підтримувати температуру вищу 30°С. У кінцевому результаті на одній гіфі формується до 2-х хламідоспор. Винаходом ставиться завдання розробки способу отримання значно більшої кількості хламідоспор за менший відрізок часу. Поставлене винаходом завдання досягається тим, що у способі отримання хламідоспор гриба Botrytis cinerea Pers., що включає вирощування гриба на живильному середовищі в чашках Петрі, згідно винаходу культивування патогена здійснюють на живильному середовищі сусло-агар + 3г/л NaNО3 інокульованому культурою гриба 10-ти денного віку, протягом 4 діб при температурі 21-23°С з подальшим його розвитком в контрольованих умовах з відносною вологістю повітря 84-88%. Приклад. У чашки Петрі розливали по 20мл живильного середовища сусло-агар + 3г/л NaNO3 після загустіння якого здійснювали, мікологічною голкою, його інокуляцію конідіями Botrytis cinerea Pers. Культивування проводили в термостаті при температурі 21...23°С в темноті протягом 4-х днів, після чого подальше вирощування гриба відбувалося в умовах відносної вологості повітря 84-88%, створеної за допомогою розчинів солей NaCl, KCl, КNО3, оскільки умови вологості 78-82%, та вищої 90% не сприяли формуванню хламідоспор. Утворення хламідоспор спостерігали після 20-ої доби. Застосування даного способу дозволяє збільшити інтенсивність формування хламідоспор за рахунок міцеліально термінального типу їх формування у вигляді ланцюжків до 22 штук, тоді як у прототипі цей показник не перевищує 2 штук, а також скоротити час їх появи на 10 днів. Таблиця Порівняльна характеристика способів отримання хламідоспор Botrytis cinerea Pers Варіанти Початок з'явлення хламідоспор, день Прототип 30 Кількість хламідоспор, шт/гіфу до 2 Запропонований спосіб 20 до 22 Тип утворення хламідоспор міцеліальний термінальний, інтеркалярний міцеліальний термінальний у вигляді ланцюжків Запропонований нами спосіб дозволить in vitro збільшити кількість отриманих хламідоспор та зменшити тривалість процесу їх формування, що підвищить ефективність створення штучного інфекційного фону, котрий застосовується при виявленні стійких рослин, а також досліджувати роль цих утворень в епідеміології хвороби.