Спосіб визначення канабіноїдів у сечі людини

Спосіб визначення канабшоїдів у сечі людини шляхом екстракції їх після лужного гідролізу з хроматографічним визначенням, який відрізняється тим, що додатково перед проведенням лужного гідролізу здійснюють очищення екстракту сечі Винахід відноситься до медицини, зокрема до визначення канабшоїдів у сечі людини Відомим Є імуноферментний метод визначення канабшоїдів у сечі (Human-drug Cannabmoids Visual Immiinoassays for the Qualitative Detection of Drugs of Abuse (DAU) and Metabolites in Human Urine Human Gesellschaft fur Biochemica und Diagnostics mbH), в якому метаболіти канабіноідів, які знаходяться в сечі людини, що вживала (курила) препарати коноплі беруть участь в конкурентній реакції з кон'югатом, що містить мічені антитіла, по закінченню якої виникає специфічне забарвлення Але, цей метод недостатньо селективний - він дає позитивні результати і з іншими речовинами, зокрема з медикаментами (D E Rollins, TAJenmson and G Jones, "Investigation of interference by nonsteroidal anti-inflammatory drugs in urine tests for abused drugs", Clinical Chemistry, vol 36, 1990, pp 602 - 606) Тому позитивні результати повинні бути підтверджені другим методом пальні препарати) в умовах методу, який описується, мають близькі величини Rf з 9-ТГКСООН і забарвлення плям, що виникають після проявлення Це не дає можливості запобігти хибно позитивних результатів В основу винаходу поставлена задача удосконалення способу визначення канабшоїдів в сечі людини, в якому за рахунок введення додаткового етапу в пробопідготовці біологічного матеріалу (сечі) досягається можливість позбутися речовин, які можуть бути в сечі як результат прийому ЛІКІВ, що підвищує селективність визначення канабшоїдів у сечі Поставлена задача вирішується в способі визначення канабшоїдів у сечі людини шляхом екстракції їх після лужного гідролізу з хроматографічним визначенням, згідно з винаходом, додатково перед проведенням лужного гідролізу проводять очищення сечі Додаткове очищення біологічного матеріалу дозволяє видалити з нього не-стероідні протизапальні препарати у випадку їх вживання людиною, що дає можливість уникнути хибно позитивних результатів Спосіб, що заявляється проводиться таким чином Юмл сечі пацієнта підкислюють хлороводнневою кислотою до рН = 1 - 2 і проводять екстракцію 20мл диетилового ефіру Верхній ефірний шар відокремлюють і при необхідності досліджують на наявність нестероідннх протизапальних засобів Водну фазу підлужують І ОМ розчином гідроксиду натрію до лужного середовища по універсальному індикатору і термостатують 20 хвилин при 50°С Після охолодження гідролізату од Відомим Є спосіб, який може бути обраним за прототип, по визначенню канабшоїдів у сечі людини після лужного гідролізу шляхом екстракції їх метаболітів (зокрема, - Д 9 - тетрапдроканабшоловоі кислоти (далі - 9-ТГКСООН) після чого екстракт розподіляють методом хроматографії у тонкому шарі сорбенту і виявляють за допомогою проявника - тривкого синього Б (Recommended Methods for the Detection and Assay of Heroin, Cannabmoids, Cocaine, Amphetamine, Methamphetamme and RingSubstituted Amphetamine Derivatives in Biological Specimens United Nations New York, 1995) Недоліком цього способу є те, що деякі сполуки кислої природи (зокрема, нестероідні протиза О (О 46440 норазово екстрагують сумішшю гексан-етилацетат (7 1) Після розподілу рідин органічна частина відкидається Водна підкислюється хлороводневою кислотою до рН = 1 - 2 і тричі екстрагується сумішшю гексан-етил ацетат (14 2) по 5мл Отриманий органічний екстракт випарюють потоком холодного повітря до сухого залишку, який розчиняють у метанолі і 50мкл розчину наносять на лі 4 нію старту хроматографічної платівки Після закінчення хроматографування платівку витягають, висушують і проявляють тривким синім Б При застосуванні цього способу удається запобігти хибно позитивних результатів, що виникають в разі наявності в сечі нестероідних протизапальних препаратів див табл Таблиця Забарвлення з реактивом-забарвником та значення Rf Речовина 9-ТГК-СООН Індометацин Напроксин Мефенамінова кислота вольтарен Забарвлення з тривким синім Б фіолетово-червона фіолетова с в ітл о-ф і ол ето ва жовто-помаранчова жовто-помаранчова Система 1 - хлороформ, метанол, 25% аміак ( 7 3 2) Система 2 - етилацетат, метанол, 25% аміак, вода (12 5 1 0,5) Приклад 1 Хворий X, історія хвороби № 2612, 1955 р н , наркоман з канабі-ноідноюзалежністю, приймає напроксин для лікування ревматоїдного Rf Система 1 0,42 0,26 0,39 0,44 0,44 Rf Система 2 0,67 0,7 0,8 0,66 0,66 артриту в дозі 0,5 - 1,0 Проведення аналізу дало можливість диференціювати присутність 9ТГКСООНусечі Приклад 2 Хворий У, історія хвороби № 1356, 1949 р н , страждає ревматизмом, приймає мефенамшову кислоту в дозі Зг Проведення аналізу не дало позитивного результату на канабшоїди ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71