Спосіб визначення концентрації загального білка в сечі

Изобретение относится к области клинической медицины, конкретно к способам определения концентрации общего белка в моче. Ближайшим по сущности заявляемого решения является способ определения общего белка в моче (А.с. СССР №1624323, опубл. 30.01.91) путем добавления к пробе мочи раствора трихлоруксусной кислоты, содержащего краситель ПК-144 при соотношении проба-реагент 1 : 10, центрифугирования полученной смеси, добавлении к осадку раствора едкого натра, определении на длине волны 540нм оптической плотности полученного раствора и определении по нему концентрации общего белка. Способ принят в качестве прототипа Недостатками способа являются: невысокая точность способа в области низких концентраций белка 20 - 120мг/л характерных для здорового человека и низкая чувствительность способа. Задачей предлагаемого изобретения является повышение точности и чувствительности способа в области низких концентраций белка мочи характерных для здорового человека. Для решения задачи предложен новый способ который осуществляется следующим образом. В центрифужную пробирку емкостью 5 - 10мл вносят пробу мочи в объеме 1 - 2мл. Далее добавляют в пробирку реагент содержащий 2мл 3% раствора трихлоруксусной кислоты и 0,01% красителя ПК-144. Смесь центрифугир уется 10 - 15 минут при 2000 - 4000об/мин, супернатант сливают и к оставшемуся осадку добавляют 4мл 0,2N раствора NaOH и перемешивают до его полного растворения. Далее на спектрофотометре или фотоколориметре измеряют оптическую плотность раствора (Д) на длине волны 540нм в 1см кювете против контроля. В качестве контроля используют 1 - 2мл физиологического раствора. Значение концентрации общего белка C мг/л определяют по калибровочному графику или рассчитывают из регрессионного уравнения (см. чертеж). Для построения калибровочного графика используют растворы человеческого сывороточного альбумина с концентрацией 20мг/л, 40мг/л, 80мг/л, 120мг/л, 160мг/л, 200мг/л. Регрессионное уравнение: C = 309,6Д - 0,9; г = 0,999; Sxy = 2,4; n = 6. Технический результат может быть достигнут только в диапазоне соотношения проба - реагент 1 : 2 - 1 : 1. При изменении данного соотношения в сторону увеличения реагента будет происходить падение чувствительности способа, а при увеличении соотношения в сторону пробы будет уменьшаться точность способа за счет возникающего недостатка красителя и разбавления кислотной части реагента. Пример 1. Указанным способом при соотношении проба - реагент определяют концентрацию белка в моче здорового человека. Для 5 параллельных анализов среднее арифметическое значение концентрации общего белка в моче составило 19мг/л. Чувствительности способа-прототипа недостаточно, чтобы определить такую низкую концентрацию белка в моче. Данные представлены в таблице. Пример 2. Указанным способом при соотношении проба - реагент 1 : 1 определяют концентрации белка в моче здорового человека. Для 5 параллельных анализов среднее значение концентрации белка в моче составило 50мг/л. Полученные результаты статически обработаны известным методом. Из данных таблицы видно, что общая дисперсия S и коэффициент вариации (RD), отражающие точность измерений ниже для предлагаемого способа, чем для способа-прототипа. Пример 3. Указанным способом при соотношении проба : реагент 1 : 2 определяют концентрацию общего белка в моче здорового человека. Для 5 параллельных анализов среднее значение концентрации белка составило 120мг/л. Из данных таблицы видно, что коэффициент вариации и общая дисперсия ниже для предлагаемого способа, чем для способа-прототипа.