Спосіб отримання фракції мононуклеарних клітин кісткового мозку кролів із високою проліферативною активністю

Спосіб отримання фракції мононуклеарних клітин кісткового мозку кролів із високою проліферативною активністю, що включає отримання фракції мононуклеарних клітин кісткового мозку, який відрізняється тим, що проводять попередню 12годинну холодну трипсинізацію аспірату кісткового мозку, а центрифугування здійснюють у градієнті щільності 1,072 та відцентровій силі 300 g. (19) (21) u200907829 (22) 24.07.2009 (24) 25.12.2009 (46) 25.12.2009, Бюл.№ 24, 2009 р. (72) МАЗУРКЕВИЧ АНАТОЛІЙ ЙОСИПОВИЧ, МАЛЮК МИКОЛА ОЛЕКСІЙОВИЧ, КОВПАК ВІТАЛІЙ ВАСИЛЬОВИЧ, ХАРКЕВИЧ ЮРІЙ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, СУШКО МИКОЛА ІВАНОВИЧ (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ БІОРЕСУРСІВ І ПРИРОДОКОРИСТУВАННЯ УКРАЇНИ 3 46600 шари стерильної марлевої серветки для видалення клітинних агрегатів. Отриману суспензію клітин відцентрифугувати при 300g протягом 5 хв. Злити надосадову рідину (розчин трипсину), до осаду клітин додати 1 мл фосфатно-буферного розчину, клітини розпіпетувати. До суспензії отриманих клітин додати фосфатно-буферний розчин або середовище для культи3 вування клітин у співвідношенні 7:1 (6 см фосфатно-буферного розчину чи культурального середовища + 1 см3 суспензії клітин). Потім обе3 режно нашарувати 7 см розведеної суспензії клі3 тин на розчин фіколу (р = 1,072) об'ємом 2 см , попередньо внесеного в стерильну центрифужну 3 пробірку об'ємом 15 см . Відцентрифугувати при 300g протягом 25 хв. Після центрифугування зняти верхній шар надосадової рідини, не порушуючи цілісності розташованого нижче шару мононуклеарних клітин. Обережно перенести шар мононуклеарних клітин в нову стерильну пробірку, додавши Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко 4 3 до нього 10 см фосфатно-буферного розчину. Клітини розпіпетувати та відцентрифугувати при 300 g протягом 5 хв. Для подальшого застосування ресуспензувати осад клітин у відповідній кількості поживного середовища. При проведенні досліду, було апробовано градієнти щільності 1,080; 1,078; 1,076; 1,074; 1,072; 1,070; 1,068, при різній відцентровій силі центрифугування (300g; 1200g). Фракції мононуклеарних клітин, отриманих при різних параметрах центрифугування, культивували у живильному середовищі (DMEM - 80 %, ембріональна сироватка теляти - 20%). Оцінку результату досліду здійснювали через 9 діб культивування на основі проліферативної активності отриманих фракцій клітин. Параметри центрифугування з градієнтом щільності 1,072 та відцентровою силою 300g забезпечують отримання фракції клітин з найвищою проліферативною активністю. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601