Спосіб корекції апоптозу мононуклеарних клітин периферійної крові

Номер патенту: 35668

Опубліковано: 25.09.2008

Автори: Левченко Лілія Юріївна, Ястремська Ірина Анатоліївна

Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Спосіб корекції апоптозу мононуклеарних клітин периферійної крові, що включає їх виділення, корекцію апоптозу та його оцінку, який відрізняється тим, що корекція апоптозу проводиться селективним блокатором НЗ-гістамінових рецепторів тіоперамідом, а його оцінка здійснюється методом проточної лазерної цитофлюорометрії.

Текст

Спосіб корекції апоптозу мононуклеарних клітин периферійної крові, що включає їх виділення, корекцію апоптозу та його оцінку, який відрізняється тим, що корекція апоптозу проводиться селективним блокатором НЗ-гістамінових рецепторів тіоперамідом, а його оцінка здійснюється методом проточної лазерної цитофлюорометрії. (19) (21) u200806689 (22) 15.05.2008 (24) 25.09.2008 (46) 25.09.2008, Бюл.№ 18, 2008 р. (72) ЯСТРЕМСЬКА ІРИН А АН АТОЛІЇВН А, UA, ЛЕВЧЕНКО ЛІЛІЯ ЮРІЇВНА, U A (73) ЯСТРЕМСЬКА ІРИНА АН АТОЛІЇВН А, UA 3 35668 10% сироватки донорів. Культивування здійснювали 24 год. при 37°С. З метою комплексної оцінки процесів апоптозу використовували забарвлення за методом МайГрюнвальд-Романовський-Гімза (цитологічний барвник) та Hoecfast 33342 (флюоресцентний барвник). Підраховували МНПК, які мали морфологічні ознаки апоптозу: конденсація та фрагментація хроматину. Флюоресценцію реєстрували за допомогою мікроскопа Люмам Р-8 (Ломо, Росія). Загальними ознаками способу, що заявляється, і найближчого аналогу є: 1. виділення мононуклеарних клітин периферійної крові; 2. корекція апоптозу мононуклеарних клітин периферійної крові; 3. оцінка апоптозу. Недоліком відомого способу є 1. відсутність можливості доведення залучення НЗ-рецепторів гістаміну в регулюванні процесів апоптозу імунокомпетентних клітин; 2. недосконалість оцінки апоптозу. В основу корисної моделі поставлено завдання створити такий спосіб корекції апоптозу мононуклеарних клітин периферійної крові шляхом удосконалення відомого, який дозволяє здійснювати корекцію апоптозу мононуклеарних клітин периферійної крові селективним блокатором НЗгістамінових рецепторів тіоперамідом, доводить залучення НЗ-рецепторів гістаміну в регулюванні процесів апоптозу імунокомпетентних клітин, забезпечує більш достовірну оцінку процесів апоптозу на ранніх та пізніх стадіях методом проточної лазерної цитофлюорометрії з метою модулювання функціонального стану імунної системи людини. Ця задача вирппується наступним чином: у способі корекції апоптозу мононуклеарних клітин периферійної крові, що включає їх виділення, корекцію апоптозу та його оцінку, згідно корисної моделі, корекція апоптозу проводиться селективним блокатором НЗ-гістамінових рецепторів тіоперамідом а його оцінка здійснюється методом проточної лазерної цитофлвдорометрії. Відрізняльною ознакою є те, що корекція апоптозу проводиться селективним блокатором НЗгістамінових рецепторів тіоперамідом а його оцінка здійснюється методом проточної лазерної цитофлтоорометрії, Спосіб пояснюється конкретним прикладом його здійснення. Корекція апоптозу здійснюється in vitro з попереднім виділенням мононуклеарів периферійної крові людини та подальшою комплексною оцінкою 4 апоптозу цитофлюорометричним методами. Цитофлюорометричний аналіз здійснюють з використанням флюорисцентних барвників аннексину VFITC та пропідіуму йодиду. Дію селективного блокатора HR3 визначали шляхом застосування тіопераміду (”Thioperamide maleate”, Sigma-RBI, Germany). Для експерименту in vitro використовували суспензію мононуклеарних клітин периферійної крові, яку отримували з периферійної гепаринізованої венозної крові здорової людини шляхом центрифугування в одноступеневому градієнті щільності фікол-верографіні (1,077г/мл). Лімфоцити у кінцевій концентрації 106мл інкубували у середовищі Ігла з глютаміном (Sigma, США), 10% інактивованою телячою сироваткою („Віо Mark Inc”, Львів, Україна), 100мкг/мл гентаміцином сульфат (ГНЦЛС, Україна) при 37°C з тіоперамідом в концентраціях 1mМ, 10mМ та 100mМ в дво х паралелях 24, 48 та 72год. Апоптоз мононуклеарів периферійної крові оцінювали методом проточної лазерної цитофлюорометрії з використанням аннексину V-FITC (виробництва Caltag, США) (Ан V+) та пропідіум йодиду (ПЙ+). Статистичну оцінку отриманих результатів експерименту проводили за допомогою параметричних та непараметричних методів статистичного аналізу програм "STATISTIC A", „MedStat", надаючи перевагу критерію Вількінсона-Манна-Уїтні (U). Причинно-наслідковий зв'язок суттєви х ознак з технічним результатом, що заявляється, підтверджується. Інкубації клітин з тіоперамідом в трьох дозах призвела до значних змін показників апоптозу. Так, через 24 години інкубації клітин з тіоперамідом препарат призвів до дозозалежного ймовірного зменшення відсотку клітин як початкової, так і кінцевої стадії апоптозу. При дослідженні через 48 годин інкубації було з'ясовано, що тіоперамід призвів до дозозалежного ймовірного зменшення відсотку клітин кінцевої стадії апоптозу. Відсоток апоптотичних клітин при застосуванні тіопераміду в дозі 1mМ зменшився, при застосуванні тіопераміду в дозі 10mМ збільшувався, а при застосуванні тіопераміду в дозі 100mМ знову зменшувався. Через 72 години інкубації клітин з тіоперамідом препарат призвів до дозозалежного ймовірного збільшення відсотку клітин на початковій стадії апоптозу, та зменшення відсотку клітин на кінцевій стадії апоптозу (Таблиця 1). 5 35668 6 Таблиця 1 Дослідження впливу селективного блокатора НЗ-гістамінових рецепторів тіопераміду на апоптоз мононуклеарів периферійної крові в експерименті in vitro Контрольна серія Час інкубації Стадія апоптозу 24год. початкова, % кінцева, % початкова, % кінцева, % початкова, % кінцева, % 48год. 72 год. Фіз. р-н 1mМ 17 10 10,8 5,3* 8,8 3,4* 20,8 12,5 15,3 7 10,8 4,2 Дослідна серія Тіоперамід (концентраці) 10mМ 100mМ 10* 9* 10* 5,5* 19,5* 11,1* 3,7* 2,9* 11* 17* 3* 2,4* * p£0,05- вірогідність відмін з апоптозом в контрольній серії при порівнянні суми рангів за допомогою критерію Вількоксона -Манна - Уїтні (U). Отримані результати дозволяють довести, що блокада НЗ-гістамінових рецепторів задіяна в регуляції апоптотичних процесів лімфоцитів, що відкриває нам ще один шлях для дослідження склад Комп’ютерна в ерстка М. Ломалова них механізмів програмованой загибелі імунокомпетентних клітин та нових можливостей терапевтичних втр учань. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Method for correcting apoptosis of mononuclears of peripheral blood

Автори англійською

Yastremska Iryna Anatoliivna, Levchenko Liliia Yuriivna

Назва патенту російською

Способ коррекции апоптоза мононуклеарных клеток периферической крови

Автори російською

Ястремская Ирина Анатольевна, Левченко Лилия Юрьевна

МПК / Мітки

МПК: A61B 10/02, A61K 38/00

Мітки: апоптозу, крові, мононуклеарних, корекції, периферійної, спосіб, клітин

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/3-35668-sposib-korekci-apoptozu-mononuklearnikh-klitin-periferijjno-krovi.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб корекції апоптозу мононуклеарних клітин периферійної крові</a>

Подібні патенти