Спосіб визначення імуногенної активності антирабічних вакцин

Спосіб визначення імуногенної активності антирабічних вакцин, що включає імунізацію з подальшим зараженням білих мишей, який відрізняється тим, що проводять однократну внутрішньом'язову імунізацію та подальше внутрішньошкірне зараження. (19) (21) u200908606 (22) 14.08.2009 (24) 25.02.2010 (46) 25.02.2010, Бюл.№ 4, 2010 р. (72) НЕДОСЄКОВ ВІТАЛІЙ ВОЛОДИМИРОВИЧ, ПОЛУПАН ІВАН МИКОЛАЙОВИЧ, ІВАНОВ МИКОЛА ЮРІЙОВИЧ 3 47782 сах в природі і умов контролю імуногенності інактивованих антирабічних вакцин (імунізація мишей проводиться інтраперитоніально, а зараження інтрацеребрально). Крім того, традиційний метод передбачає використання 2-х ін'єкцій, на 0 і 7 добу, при чому друга є бустер-ін'єкцією і маскує результати досліду, в результаті чого слабкі по активності вакцини будуть відповідати сильним. Все перелічене призводить до суттєвих помилок в оцінці імуногенної активності антирабічних вакцин. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб визначення імуногенної активності антирабічних вакцин, який би відтворював умови застосування вакцинного препарату та шлях поширення вірусу при укусах в природі. Поставлена мета досягається тим, що у способі визначення імуногенної активності антирабічних вакцин, що включає імунізацію з подальшим зараженням білих мишей, згідно корисної моделі, проводять однократну внутрішньом'язову імунізацію та подальше внутрішньошкірне зараження. Спосіб включає наступні суттєві ознаки: 1. Приготування п'ятикратних розведень 1:5, 1:25, 1:125, 1:625 дослідної і референтної вакцин. 2. Внутрішньом'язове введення усіх чотирьох розведень вакцин білим мишам, масою 12-14 грам, в об'ємі - 0,15см3, використовуючи 16 голів на одне розведення. 3. Зараження на 21 добу після вакцинації мишей в підшкірну клітковину верхньої губи фіксова 4 ним вірусом сказу, штам CVS, в дозі 103 50ЛД50/0,15см . 4. Проведення спостереження протягом 14 днів після зараження. Специфічна загибель мишей вважається з 5 доби після зараження при наявності специфічної клінічної картини паралітичної форми сказу. 5. Розрахунок для дослідної та референтної вакцин ЭД50 (50% ефективна доза) методом Sperman-Karber або Reed-Mench. Потім, обраховують антилогарифм і визначають імуногенну активність дослідної вакцини в МО прирівнюючи її до імуногенної активності референтної вакцини. Результати порівняльної оцінки найближчого аналога і запропонованого тесту, представлені в таблиці та показують, що імуногенність 3-ої серії вакцини, провіреної «периферичним» тестом, складала 0,89МО/см3, в той час як при тестуванні 3 імуногенної активності методом NIH - 1,52МО/см . Це вказує на те, що при використанні тесту за найближчим аналогом за рахунок другої імунізації проходить завищення реальної імуногенної активності антирабічних вакцин, в зв'язку з чим низькоімуногенні серії препаратів можуть бути дозволені до застосування. Імуногенність 1-ої і 2-ої серій практично не відрізнялась. При цьому коефіцієнт кореляції між результатами отриманими «периферичним» тестом і традиційним методом NIH склав 0,90. Приклад Таблиця Результати порівняльної оцінки прототипу і запропонованого тесту Серія вакцини 1 серія 2 серія 3 серія стандарт тест NIH* (найближчий аналог) Активність lg ЭД50 (МО/см3) 2,71 1,82 2,12 0,47 2,63 1,52 2,45 1 «периферичний» тест* (запропонований) Активність lg ЭД50 (МО/см3) 2,25 1,4 1,87 0,58 2,05 0,89 2,1 1 Примітка: * - середні значення трьох визначень Порівняльний аналіз отриманих результатів показав, що найкращі результати отримані при використанні «периферичного» тесту, що забезпечує високий рівень кореляції з традиційним тестом NIH (0,90). Таким чином, показана теоретична мо Комп’ютерна верстка М. Ломалова жливість заміни традиційного тесту NIH запропонованою методикою, яка має теоретичну основу і може бути використана в практиці після проведення широкомасштабних досліджень. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601