Спосіб отримання фракції мононуклеарних клітин кісткового мозку котів із високою проліферативною активністю

Спосіб отримання фракції мононуклеарних клітин кісткового мозку котів із високою проліфера 3 47783 Запропонований спосіб дає змогу відділити мононуклеарні клітини від еритроцитів; отримати фракцію мононуклеарних клітин з високою проліферативною активністю. Запропонований спосіб полягає в отриманні аспірату кісткового мозку. Після чого в умовах стерильного боксу потрібно відмити в фосфатнобуферному розчині жовтий кістковий мозок від червоного. Жовтий кістковий мозок перенести в пробірку об'ємом 15см3 та поставити на 12годинну холодну трипсинізацію (температура 24°С) в 0,25% р-ні трипсину у співвідношенні 1:3. Потім необхідно трипсинізований жовтий кістковий мозок розпіпетувати та профільтрувати через 2 шари стерильної марлевої серветки для видалення клітинних агрегатів. Отриману суспензію клітин відцентрифугувати при 300g протягом 5хв. Злити надосадову рідину (розчин трипсину), до осаду 3 клітин додати 1см фосфатно-буферного розчину, клітини розпіпетувати. До суспензії отриманих клітин додати фосфатно-буферний розчин або середовище для культивування клітин у співвідношенні 7:1 (6см3 фосфатно-буферного розчину чи культурального середовища +1см3 суспензії клітин). Потім обережно нашарувати 7см3 розведеної суспензії клітин на розчин фіколу (р=1,078) об'ємом 2см3, попере Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська 4 дньо внесеного в стерильну центрифужну пробірку 3 об'ємом 15см . Відцентрифугувати при 300g протягом 25хв. Після центрифугування зняти верхній шар надосадової рідини, не порушуючи цілісності розташованого нижче шару мононуклеарних клітин. Обережно перенести шар мононуклеарних клітин в нову стерильну пробірку, додавши до ньо3 го 10см фосфатно-буферного розчину. Клітини розпіпетувати та відцентрифугувати при 300g протягом 5хв. Для подальшого застосування ресуспендувати осад клітин у відповідній кількості поживного середовища. При проведенні досліду, було апробовано градієнти щільності q=0,078; q=0,076; q=1,074; q=0,072; q=0,070) при різній відцентровій силі центрифугування (300g; 1200g). Фракції мононуклеарних клітин, отриманих при різних параметрах центрифугування, культивували у живильному середовищі (DMEM - 80%, ембріональна сироватка теляти - 20%). Оцінку результату досліду здійснювали через 12 діб культивування на основі проліферативної активності отриманих фракцій клітин. Параметри центрифугування з градієнтом щільності q=0,078 та відцентровою силою 300g забезпечують отримання фракції клітин з найвищою проліферативною активністю. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601