Спосіб визначення антивірусної активності препаратів інтерферону в організмі великої рогатої худоби

Спосіб визначення антивірусної активності 3 50703 4 Таблиця Тривалість антивірусного стану МПК після одноразового прийому інтерферону (титр вірусу, log ТЦД 50/мл) До введення ІФН In vitro Ex vivo Контроль 4,2 4,4 4,4 Отримані результати показали, що МПК телят проявляли антивірусну активність протягом 48 год. У подальшому антивірусна активність клітин зменшувалась, але тенденція в умовах in vitro і ex vivo була однаковою, відмінності у показниках відсутні. У контрольних тварин, які не отримували інтерферон, антивірусна активність МПК була низькою і не змінювався протягом досліду. Ознаки винаходу Ознаками, які відрізняють спосіб визначення антивірусної активності препаратів ІФН в організмі великої рогатої худоби, є визначення антивірусного стану МПК після їх контакту з ІФН. Захисна дія ІФН на МПК має однакову протяжність, як in vivo та ex vivo. Це дозволяє тестувати антивірусний стан МПК шляхом подвійного тестування (до і через 8 годин після введення ІФН). Усі подальші дослідження проводяться в умовах in vitro. За літературними даними такий підхід до визначення антивірусної активності препаратів ІФН в організмі великої рогатої худоби ще невідомий. Спосіб здійснюється слідуючим чином. МПК отримують з гепаризованої крові центрифугуванням на градієнті щільності загальноприйнятими методами [3]. Ізольовані клітини ресуспензуються у середовищі RPMI - 1640 з 5% сироваткою крові телят і 50мкг/мл гентаміцину до кінцевої концентрації 4x106кл/мл. Інкубування клі Комп’ютерна верстка А. Крулевський 8 0 0 4,2 Після введення ІФН, годин 24 48 72 96 0 0 1,8 2,3 0 0 2,0 2,4 4,8 4,5 4,8 5,0 120 3,2 3,4 4,8 тин проводились при 37 C в атмосфері 5% CO2. Перед інфікуванням МПК центрифугують при 150q протягом 10хв, культуральну рідину замінюють на середовище RPMI, ресуспензують і інфікують вірусом везикулярного стоматиту (штам Індіана, інфекційна активність 104 ЦПД) неадсорбовані віріони видаляються центрифугуванням при 150q протягом 10хв. МПК, що осіли ресуспензуються у середовищі RPMI - 1640 і інкубуються 18 годин. Після чого проводиться титрування вірусу мікрометодом, у культурі L929. Відсутність вірогідної різниці між показниками, що порівнюються, вказує на відсутність антивірусної активності інтерферону. Джерела інформації 1. Baglioni С., Maroni Р.А., West D.K/ 2 5 oligo (A) polymerase activity and inhibition of viral RNA synthesis sn snterferon treated HeIa cells // Biochemistry. - 1979. - Vol.18. - P. 1765-1770. 2. Методические рекомендации по определению интерфероносинтезирующей способности лейкоцитов крупного рогатого скота /Симонян Г.А., Бархударян В.А., Кондрічева Н.Н. и др. - Калуга, 1983. - 15 с. 3. Новые подходы к оценке функциональной активности крови крупного рогатого скота /Полевщиков А.В., Кучевская Е.В., Зайкова Я.С. и соавт.// Ветеринария. - 1993. - №2. - С.47-49. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601