Спосіб лікування хворих на прогресуючу м’язову дистрофію трансплантацією міобластів ембріона людини

Спосіб лікування хворих на прогресуючу м'язову дистрофію трансплантацією міобластів ембріона людини, що є методом клітинної терапії, який відрізняється тим, що шляхом механічної дезагрегації з м'язів ембріона людини 8-9 тижня гестації отримується суспензія клітин-міобластів заданої концентрації (10 млн./мл), ін'єкційно вводиться в уражені м'язи у обсязі 0,5 мл (5-6 ін'єкцій на один м'яз) 3-4 рази на один курс лікування. (19) (21) u200912423 (22) 01.12.2009 (24) 25.06.2010 (46) 25.06.2010, Бюл.№ 12, 2010 р. (72) ЦИМБАЛЮК ВІТАЛІЙ ІВАНОВИЧ, ПІЧКУР ЛЕОНІД ДМИТРОВИЧ, МАРКОВА ОЛЬГА ВОЛОДИМИРІВНА (73) ІНСТИТУТ НЕЙРОХІРУРГІЇ ІМ. А.П. РОМОДАНОВА АМН УКРАЇНИ 3 50725 дистрофії трансплантацією ембріональних міобластів з застосуванням трансфекції генів дистрофіну за допомогою мутантних ретро-або аденовірусів [ 3 ]. Даний метод дозволяє досягнути лікувального ефекту у частини пацієнтів, що було підтверджено аналізом моторної активності хворих згідно загальновизнаних шкал. Даний метод не дозволяє досягати довготривалого ефекта, бо трансфіковані мутантним аденовірусом клітини експресують на мембрані антигени віруса, які стають ціллю для цитотоксичних Т-лімфоцитів відповідної специфічності. Таке лікування вимагає застосування імуносупресорів. Крім того, ці технології ускладнюються необхідністю створення генних конструкцій, в яких великі розміри гена дистрофіна мають комбінуватися з вірусом, наявністю «затухання» експресії трансгена, існуванням великої кількості ізоформ білка та ін.)· Важливо, що методи трансфекції генів належать до фінансово затратних технологій і вони малодоступні для медичних закладів нашої країни. Завданням запропонованого винаходу є розробка способу удосконалення методу лікування хворих на прогресуючу м'язову дистрофію трансплантацією міобластів ембріонів людини з застосуванням трансфекції генів дистрофіну за допомогою мутантних ретро- або аденовірусів з метою досягнення лікувального ефекту більш простим та доступним методом, який зберігає якісно відмінні характеристики донорських клітин (здатність продукувати дистрофін), що можуть бути використані для лікування. У якості відмінних характеристик донорських клітин ми використовуємо здатність алогенних ембріональних міобластів продукувати дистрофін, який є структурним елементом м'язових філаментів. Ембріональні міобласти, що трансплантуються у м'язи хворих, не несуть на поверхні антигени вірусу, самі мають низьку експресію антигенів HLA 1-го класу гістосумісності. Поставлене завдання вирішується тим, що шляхом механічної дезагрегації з м'язів ембріону Комп’ютерна верстка І.Скворцова 4 людини 8-9 тижня гестації отримується суспензія клітин-міобластів заданої концентрації (10 млн./мл), ін'єкційно вводиться в уражені м'язи у обсязі 0,5 мл (5-6 ін'єкцій на один м'яз) 3-4 рази на один курс лікування. Спосіб, що заявляється, здійснюється наступним чином. Дитину, хвору на прогресуючу м'язову дистрофію, попередні методи лікування якої були не ефективні, готують для трансплантації фетальних міобластів. М'язову тканину ембріону людини 8-9 тижня гестації подрібнюють ножицями, супернатант переносять у іншу пробірку, центрифугують, отримують суспензію клітин-міобластів заданої концентрації (10 млн./мл), ін'єкційно вводять в уражені м'язи у обсязі 0,5 мл (5-6 ін'єкцій на один м'яз). Таких введень може бути 3-4 на один курс лікування. В порівнянні із прототипом, запропонований спосіб має ряд переваг : - клітини донора не переносять процедуру трансфекції гену дистрофіну і вірусів, зберігають свої біологічні властивості; - алогенні міобласти не експресують антигенів вірусів і не викликають на себе антигенспецифічну відповідь з боку імунної системи; - запропонований метод є менш фінансово затратний. Література. 1. Dubowitz V., Kinali M., Main Μ., Mercuri Ε., Muntoni F. Remission of clinical signs in early Duchenne muscular dystrophy on intermittent lowdosage prednisolone therapy // Europ.J.PediatricNeurology.-2002.-6.-p.l53-159. 2. Voisin V., de la Porte S. Therapeutic strategies for Duchenne and Becker dystrophies // Int.Rev.Cytol.-2004.- 240.- p. 1-30. 3. Huard J., Ascadi G., Jani Α., Massie В., Korpati G. Gene transfer into skeletal muscles by isogenic myoblasts // Human Gene Therapy.-1994.5.- p.949-958. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601