Спосіб інактивації лептоспірозного антигену

Спосіб інактивації лептоспірозного антигену, який включає внесення інактиватора в лептоспіровмісну суспензію з наступною її витримкою, який відрізняється тим, що як шактиватор використовують кристалвюлет в концентрації 0,05 % від об'єму лептоспіровмісної суспензії, а витримку здійснюють протягом 24 годин при температурі 2830°СтарН7,0-7,4 Винахід відноситься до мікробіологічної, медичної, ветеринарної промисловості, зокрема, може бути використаний при виготовленні інактивованих бактеріальних вакцин та концентратів інактивованих бактеріальних вакцин Відомий спосіб інактивації лептоспіровмісної рідини, призначеної для виробництва вакцини, шляхом обробки його ХІМІЧНИМИ реагентами, наприклад формаліном, розчином трихлоруксусної кислоти з наступним додаванням амміаку з метою доведення рН до значення 70-7,2 Але недоліком цього методу є подвійна дія шактиваторів на агнтиген, що спричинює порушення структури та властивостей ліпопротеїдної мембрани лептоспір та значно знижує його імуногенні властивості (Инструкция по изготовлению и контролю поливалентной вакцины "ВГНКИ" против лептоспироза животных Утв Нач Глав упр Вет МСХ СССР от 6 03 84) Відомий спосіб інактивації вірусовмісної рідини шляхом обробки його розчином кристалвюлету Недоліками цього методу є те, що інактивація віруса кристалвюлетом відбувається при високій концентрації инактиватора (0,5%) в вірусмісткій культуральній рідини та проходить при низькій швидкості інактивації (14 діб) Висока концентрація інактиватора спричиняє руйнування четвертинної та третинної структури білка, що в свою чергу веде до зменьшення КІЛЬКОСТІ антигенних детермінант, і приводить до зниженої імунологічної ВІДПОВІДІ (Прискока В А , Собко Ю А , Аранчій С В Класична чума свиней (проблеми та перспективи) Київ - 2000, с 84-85) Одним із основних методів боротьби з лептоспірозом є вакцинопрофілактика Вакцина проти лептоспірозу використовується для активної імунізації тварин Вона профілактує гострий перебіг хвороби, загибель тварин від лептоспірозу, аборти лептоспірозної етіології, лептоспіроносійство Важливим напрямком в виробництві високоякісних протилептоспірозних вакцин є вдосконалення методів їх інактивації В основу винаходу поставлена задача знайти спосіб інактивації лептоспірозного антигена, зберігти його імунологічні властивості і забезпечити нечасомісткий процес інактивації лептоспірозної суспензії з отриманням високоімуногенного продукту Для вирішення поставленої задачі, у способі інактивації лептоспірозного антигену, що передбачає внесення в лептоспірозну суспензію інактиватора з наступною витримкою, в якості інактиватора використовують кристалвюлет в концентрації 0,05%, а витримку проводять на протязі 2 діб при температурі 28-32°С Спосіб здійснювали наступним чином Кристалвюлет (С25Н30Н3СІ) розчиняли в певній КІЛЬКОСТІ дистильованої води та додавали його до певної КІЛЬКОСТІ лептоспірозної суспензії Витримка лептоспірозного антигену з внесеним до його об'єму шативатором проходила при температурі 28-30° С Тривалість інактивації складала 24 години Процес проходив при значенні рН7,0-7,4 Використання заявленого способу інактивації лептоспірозої суспензії в порівнянні з відомими способами, забезпечує наступні переваги використовування кристалвюлету дає можливість знизити концентрацію інактиватора приблизно в 10 разів, за рахунок зниження концентрації Інактиватора збільшується КІЛЬКІСТЬ шактивованої біомаси, що 00 ю 52982 збільшує антигенні та імуногенні властивості біопрепаратів, для виготовлення яких напрацьовувався лептоспірозний антиген Даний спосіб дозволяє проводити інактивацію лептоспірозного антигена при температурі 28-32° С Час інактивації 24 години при рН7 0-7,4 Приклад 1 Інактивація лептоспірозного антигену проводили кристалвюлетом (С25Н30Н3СІ) Інактиватор, який знаходився в кристалічній формі, розчиняли в дистильованій воді до концентрації 1% Водний розчин зберігали в темному, герметично закритому посуді при кімнатній температурі В отриману після культивування лептоспірозну суспензію (матрову розплодку), додавали 1% розчин кристалвіолету до кінцевої концентрації 0,05% Тривалість інактивації складала 24 години при температурі 28-30°С при рН7,0-7,4 Отриманий препарат контролювали на повноту інактивації шляхом контрольних пасажів на специфічних середовищах При повній інактивації ріст лептоспір не спостерігався Порівняльна динаміка інактивації лептоспіромісткої суспензії при різних концентраціях кристалвюлетута різних температурних умовах предстатвлені втабл Таблиця Дослід, № 1 2 3 4 5 6 7 Температура інактивації, °С 28 28 28 28 28 20 40 Концентрація інактиватора, % 0,1 0,05 0,02 0,01 0,005 0,05 0,05 - остаточних живих лептоспір при додатковому пасажуванні не виявлено, + - по закінченні періоду інактивації виявлено 6 ± + + + + + + 12 ± + + + + ± Експозиція, Ч 18 24 ± ± + ± + + ± 36 ± + живі лептоспіри, ± - живі лептоспіри виявлено після 2-3 пасажу на селективних середовищах, ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24