Спосіб підготовки біологічного зразка до морфологічних досліджень

Спосіб підготовки біологічного зразка до морфологічних досліджень, що включає фіксацію цього зразка, його промивання, проведення через спирт, формалін, обробку розчином азотнокислого срібла в дистильованій воді, аміачним сріблом, аміачною водою, обезводнення та поміщення, який відрізняється тим, що м'язові тканини основних ВІДДІЛІВ серця плодів та новонароджених додатково поміщують в целоїдин та обробляють хлороформом і парафіном, при цьому фіксують зразок в 10% нейтральному формаліні протягом 12-24 годин при кімнатній температурі, проводять його через 70°, 80°, 96° спирти і спирт-ефір, в целоїдин поміщують на 24 години, після чого споліскують в спирті-ефірі, обробляють хлороформом в перебігу 12-18 годин, хлороформом парафіном при t = 37°С в перебігу 2-3 години, парафіном І при t 56°С -1-2 годин, парафіном II в тих же умовах, заливають зразок в парафін, поміщують на блок, роблять ГІСТОЛОГІЧНІ зрізи по 15-25 мкм, наклеюють зрізи на скло, поміщують їх в термостат при t = 37°С на 2 години, депарафінують зрізи до води і виконують обробку розчином азотнокислого срібла та ІНШІ етапи як звичайно Винахід відноситься до медицини, а саме до морфології і може бути використаним для підготовки біологічного зразку до морфологічних досліджень, наприклад, візуалізацм мікроциркуляторного русла міокарда серця плодів і новонароджених Для існування живого організму необхідна постійно діюча система - система циркуляції рідини Циркуляція - необхідна умова для обміну речовин Основним шляхом циркуляції рідин в організмі являються кровоносні і лімфатичні судини і капіляри З 1954 року (США) введено термін мікроциркуляторне русло (МЦР) і в сучасному уявленні система МЦР - це сполучення взаємодіючих компонентів артеріол, прекапілярів, капілярів, післякапілярів і венул, впорядкованих по своєму розташуванню у просторі Всі ВОНИ приймають участь в транспортуванні крові і обміні речовин - органне кровоносне русло Стає очевидним, що МЦР відіграє важливу роль в ЖИТТЄДІЯЛЬНОСТІ і функціональних відправленнях органів безперервний рух по судинам, зовні судин, поміж клітинами і навіть в цитоплазмі самих клітин Зупинка такого руху означає смерть, а загальне порушення цього руху - захворювання Тому оцінка особливостей мікроциркуляторно го русла органів і тканин людського організму набуває великого значення і особливе місце в цьому процесі посідають морфологічні дослідження, як найбільш точні та ті, що дають вичерпну інформацію ДЛЯ КЛІНІЦИСТІВ Особливої ваги набуває етап візуалізацм МЦР міокарда серця, як етап, точність і інформативність якого обумовлюють результативність і ефективність наступних етапів морфологічних досліджень Успіх В одержанні якісних препаратів залежить від дотримання ряду технологічних умов фіксації, обробки і підготовки біологічного матеріалу Одна із таких методик виділення та обробки біологічного об'єкту для вивчення судин була запропонована Є І Рассказовою (В В Куприянов Пути микроциркуляции - Кишинев Картя Малдовеняскэ, 1969258с) Так, наприклад, В В Купріянов і Б 3 Перлін (1958) вперше використали обробку тонких сполученотканинних оболонок аміачним розчином азотнокислого срібла для дослідження кровоносних і лімфатичних судин на фрагментах оболонок, товщина яких не перевищує ЮОмкм (В В Куприянов, Б 3 Перлин Обработка соединительнотканных оболочек аммиачным раствором азотнокислого О ю 54701 серебра для исследования кровеносных лимфатических сосудов //Тезисы Докл 16-й науч конференции кишиневского мединститута, Кишинев1958-С 37-39) Це дало змогу імпрегнувати кровоносні судини і капіляри, а також лімфатичні судини, легко диференціювати артеріоли, венули, прекапіляри, капіляри, лімфатичні судини з їх клапанами В основі розробленого В В Купріяновим модифікованого способу підготовки тотальних препаратів лежить їх обробка аміачним сріблом (В В Куприянов Пути микроциркуляции - Кишинев Картя Малдовеняскэ, 1969 -258с ) Технологічна схема згаданого способу включає такі основні етапи її виконання 1 Фіксація матеріалу в 12% нейтральному формаліні При цьому як додаткові фіксатори використовують мурашкову кислоту, або лимонну, або квасцеву кислоту, які додають до фіксуючого формалінового розчину, тривалість фіксації від 5 днів до 2 МІСЯЦІВ, 2 Промивання в проточній воді до 24 годин Термін промивання прямо пропорційно залежить від терміну фіксації, 3 Утримання біологічного зразка в 70% спирті в перебігу ЗО хвилин, 4 Споліскування шматочків в дистильованій воді, 5 Занурення в 20% розчин азотнокислого срібла в дистильованій воді до 60 хвилин, краще в темряві, 6 Споліскування водою, 7 Проводка через 2% розчин формаліну в 4 5 стаканчиках, 8 Проводка через дистильовану воду (швидко), 9 Занурення в аміачне срібло, в якому препарати тримають до пожовтіння, 10 Занурення препаратів в 0,5% розчин формаліну до появи коричневого відтінку, 11 Обробка аміачною водою, обезвожування, просвітлення і заключения препаратів як звичайно Даний спосіб є найбільш близьким до того, що заявляється по технічній суті та результату, який може бути одержаним, тому його обрано в якості прототипу Добрі результати при використанні цього способу одержують при обробці зразків різних оболонок тверда та м'яка оболонки головного та спинного мозку, черевики, перикарду, епікарду, фасцій, апоневрозів, синовіальних оболонок та інших оболонок внутрішніх органів Можуть бути використані і зразки органів, але при цьому не вдається одержати узагальнюючої уяви, наприклад, про констру кцію капілярів Виключення представляють зрізи головного мозку та стінки кишки, та й при цьому технологія підготовки таких зразків має свої особливості Обов'язковою умовою є СВІЖІСТЬ матеріалу Тому в основу винаходу покладено задачу покращення якості підготовки біологічного зрізку серця плодів та новонароджених для одержання цілісної уяви про МЦР міокарда цього органу Задача, яку покладено в основу винаходу, вирішується тим, що у відомому способі підготовки біологічного зразка до морфологічних досліджень, що включає фіксацію цього зразка, його промивання, проводку через спирт, формалін, обробку розчином азотнокислого срібла в дистильованій воді, аміачним сріблом, аміачною водою, обезвожування та заключения, згідно з винаходом, м'язові тканини основних ВІДДІЛІВ серця та його провідної системи плодів та новонароджених додатково помішують в целлоідин та обробляють хлороформом і парафіном, при цьому фіксують зразок в 10% нейтральному формаліні протягом 1 2 - 2 4 годин при кімнатній температурі, проводять його через 70°, 80°, 96° спирти і спирт-ефір, в целлоідин помішують на 24 години, після чого споліскують в спирті-ефірі, обробляють хлороформом в перебігу 12 - 18 годин, хлороформом - парафіном при t = 37°С в перебігу 2 - 3 години, парафіном І при t 56°С - 1 - 2 годин, парафіном II в тих же умовах, заливають зразок в парафін, помішують на блок, роблять ГІСТОЛОГІЧНІ зрізи по 15 - 25мкм, наклеюють зрізи на скло, помішують їх в термостат при t = 37°С на 2 години, депарафінують зрізи до води і виконують обробку розчином азотнокислого срібла та ІНШІ етапи як звичайно Спосіб підготовки зразків міокарда серця плодів та новонароджених для наступних морфологічних досліджень МЦР міокарда, що заявляється, дозволяє використовувати звичайні ГІСТОЛОГІЧНІ зрізи м'язової тканини Такі зрізи можуть бути товщиною 15 - 25мкм і більше, що особливо важливо при вивченні МЦР поперечносмугастих м'язів Товстий ГІСТОЛОГІЧНИЙ зріз дозволяє одержати не тільки поперечний або подовжній зріз судини, а практично більшу частину елементів МЦР за рахунок збільшення об'єму об'єкта Таким чином в міокарді можливо вивчення не тільки артеріол і венул, а і прекапілярів, капілярів і післякапілярів Спосіб, що заявляється, дозволяє одержати достатню інформацію про мікросудини, які розташовані в пери-1 -ендомізм, особливо про капіляри, які, як правило, у вигляді спіралі оточують практично кожне м'язове волокно (кардюмюцит) Підписано до друку 03 04 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24