Спосіб визначення функціональної активності синцитію

Спосіб визначення функціональної активності синцитію, що включає вимір діаметра ядра з наступним обчисленням ядерно-цитоплазматичного співвідношення, який відрізняється тим, що додатково вимірюють довжину і висоту синцитію, а Винахід відноситься до медицини, а саме до морфометрії, і може бути використаний для оцінки фізіологічного стану клітки ФІЗІОЛОГІЧНИЙ стан клітки обумовлює не тільки рівень обмінних процесів, але і відображає нормальний чи патологічний стан всього організму в цілому Тому оцінка фізіологічного стану клітки має величезне значення Ріст КОЖНОГО ЖИВОГО організму відбувається ритмічно й у геометричній прогресії шляхом клітинного розподілу і часто супроводжується ВІДПОВІДНИМ збільшенням загального обсягу Величина ядра може варіювати, але, загалом, вона у ВІДОМІЙ мірі зв'язана з розміром цитоплазми, що знайшло своє кількісне вираження в індексі NP, названому ядерно-плазменим відношенням (Гертвиг О Клетка и ткани Основы общей анатомии и физиологии - Т 2 - Спб, 1900 -342с) NP = Vn/(Vc-Vn) де Vn - обсяг ядра, Vc- обсяг цитоплазми Цей індекс указує на існування відомої залежності між обсягом цитоплазми й обсягом ядра, причому зі збільшенням першого другий також повинний збільшуватися Порушення цього співвідношення діє, очевидно, як стимул, викликаючи клітинний розподіл Існує кілька методик визначення ядерноцитоплазматичного співвідношення Карю- і цитометричне дослідження прискорюють застосуван ядерно-цитоплазматичне співвідношення обчислюється по формулі 2 2 2 = 2nl_B /(3hr -2LB ), " я д р а ' "цитоп. Де п - КІЛЬКІСТЬ ядер у синцитії, L - більший діаметр ядра синцитію, В - менший діаметр ядра синцитію, h - довжина синцитію, г - висота синцитію отримані значення порівнюють з нормою і при достовірному збільшенні значень стосовно неї оцінюють функціональну активність як високу і навпаки ням окулярних крапкових сіток (з великим числом крапок), що дозволяє оцінити відповідну тестовій крапці площу ГІСТОЛОГІЧНОГО препарату, а потім вести вимір площі по числу крапок, що приходяться на ядро і цитоплазму клітки За цими показниками відразу обчислюють ядерноцитоплазматичне співвідношення або переводять значення тест систем сітки, а також площі ядра і клітки в абсолютні величини Використовують також спеціальні шаблони і ЛІНІЙКИ, ЩО прискорюють дослідження (Автандилов Г Г Проблемы патогенеза и патологоанатомической диагностики болезней в аспектах морфометрии -М Медицина, 1984 -с 285) Майже всі клітки є одноядерними, однак, існують також двоядерні (деякі клітки печінки і хрящові клітки) І багатоядерні клітки В останньому випадку число ядер може бути дуже велике (до 100 у полікарюцитів чи остеокластів кісткового мозку) У синцитіях, що являють собою великі протоплазматичні маси, не розділені на КЛІТИННІ території, число ядер може бути надзвичайно великим Методика визначення функціональної активності кліток, загальноприйнята на СЬОГОДНІШНІЙ день, зв'язана з визначенням ядерноцитоплазматичного співвідношення (Ташке К Введение в количественную цито-ги стол о ги чес кую морфологию - Из-во Ак Соц Респ Румынии, 1980 - с 191) Складається вона в тім, що клітки і їхні ядра приймаються за правильні кулясті утво ю ю 55140 достовірному збільшенні значень стосовно неї оцінюють функціональну активність як високу і навпаки 3 3 3 Спосіб оцінки фізіологічного стану синцитію "ядра ' "цитоплазми d / (D -d ) виконується в такий спосіб де D - середній діаметр клітки, d - середній діаметр ядра Для дослідження беруть шматочки тканини досліджуваних органів, розмірами 2,0 х 2,0 х 1,0см У випадку обчислення обсягу ядер сфероїдаМатеріал фіксують в 10% водяному розчині нейтльної форми доцільно взяти до уваги коефіцієнт рального формаліну, після чого піддають парафіелонгації (подовженості) новій проводці Готують серійні зрізи, товщиною 5Е= L/B бмкм , що офарблюють гематоксилинеозіном де L - більший діаметр ядра, В - менший діаметр ядра Далі проводять мікроскопічне вивчення препаратів та необхідні виміри Вимірюють діаметр ядДаний коефіцієнт виражається також одним ра, висоту і довжину синцитію не менш чим у 25 числом Наприклад, якщо велика вісь у 2,3 рази полях зору методом випадкового добору за доподовше малої осі, то елонгація складає 2,3 могою окулярної сітки-вставки При необхідності У зв'язку з цим на практиці для визначення обдля визначення довжини синцитію можливий поділ сягу кулястих чи майже кулястих ядер, які мають його на окремі фрагменти, для яких можливе викоефіцієнт елонгації не більш 1,2, використовують значення ЛІНІЙНИХ розмірів, з наступним додаванформулу, зазначену вище, а для ядер з елонгаціням результатів і визначенням загальної довжини єю від 1,2 до 2, використовують формулу Отримані дані підставляють у приведену вище "ядра ' "цитоплазми — L B / ( U - d ) формулу й обчислюють ядерно-цитоплазматичне Ці формули в даний час достатньо широко заспіввідношення стосовуються для обчислення ядерноцитоплазматичного коефіцієнта для кліток, що Аналогічні виміри проводять також у групі конмають форму, наближену до кулястої тролю Приведений вище спосіб визначення функціоУсі цифрові дані обробляють за допомогою нальної активності кліток, що є найбільш близьким методів варіаційної статистики з обчисленням сепо технічній суті і результату, що досягається, торедньої арифметичної (М), середньоквадратичному він обраний нами як прототип го відхилення (а) і помилки середнього арифметичного (т) Однак синцитій не може бути зміряний з кулею, оскільки є, по суті, гігантською кліткою чи Отримані результати порівнюють з визначенсимпластом, що має витягнуту форму і велику ням вірогідності розходження та роблять висновок КІЛЬКІСТЬ ядер про функціональну активність синцитію У зв'язку з перерахованим вище, в основу виСпосіб ілюструє наступний приклад обчисленнаходу покладена задача розширення арсеналу ня ядерно-цитоплазматичного співвідношення в засобів для визначення функціональної активності синцитютрофобласті плаценти багатоядерних кліток і симпластів Для дослідження брали шматочки тканини плаценти контрольної та досліджуваних груп, розЗадача, покладена в основу винаходу зважумірами 2,0 х 2,0 х 1,0см , з яких після гістологічної ється тим, що у відомому способі визначення фунпроводки готували зрізи, товщиною 5-6мкм , які кціональної активності кліток, що включає вимір фарбували гематоксилинеозіном діаметра ядра з наступним обчисленням ядерноцитоплазматичного співвідношення, згідно винаДалі проводили мікроскопічне вивчення преходу, додатково вимірюють висоту і довжину синпаратів та необхідні виміри, після чого вираховуцитію, а ядерно-цитоплазматичне співвідношення вали ядерно-цитоплазматичне співвідношення по визначають по формулі формулі вказаної вище 2 2 2 В контрольній групі встановлено, що середні "ядра ' "цитоплазмы = 2nl_B /(3hr -2LB ) значення ядерно-цитоплазматичного співвідноде п - КІЛЬКІСТЬ ядер у синцитії, шення склали 0,52 ± 0,03, в досліджуваній групі L - більший діаметр ядра синцитію, 0,39 ± 0,08 Вірогідність розходження скала 95% В - менший діаметр ядра синцитію, h - довжина синцитію, Таким чином зроблено висновок, що в досліджуваній групі спостерігається зниження функціог - висота синцитію нальної активності синцитютрофобласту Отримані значення порівнюють з нормою і при рення При цьому формула для обчислення ядерно-цитоплазматичного співвідношення виглядає в такий спосіб Підписано до друку 03 04 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24