Спосіб визначення функціональної активності нейтрофілів у ротовій порожнині

Спосіб визначення функціональної активності нейтрофілів у ротовій порожнині шляхом використання НСТ-тесту, який відрізняється тим, що досліджуваний промиває ротову порожнину стабілізованим розчином хлориду натрію осмолярністю 300 мосм/л та рН=7,2, після чого одержаний змив центрифугують, визначають КІЛЬКІСТЬ формазанпозитивних лейкоцитів за показниками спонтанного і активованого НСТ-тесту і за показниками інтенсивності еміграції лейкоцитів за 1 хвилину визначають загальну КІЛЬКІСТЬ спонтанних і активованих лейкоцитів, які відображають функціональну ознаку активності лейкоцитів Винахід відноситься до галузі медицини, а саме до патофізіології і стоматологи, лабораторної діагностики, і може бути застосований для визначення загальної окислювально - відновної та функціональної активності нейтрофілів ротової порожнини Найбільш близьким до запропонованого є спосіб визначення функціональної активності нейтрофілів (ФАН) у слині за допомогою НСТ - тесту (1) Спосіб полягає в тому, що отримують 5мл нестимульованої слини шляхом спльовування після полоскання рота 1% розчином алюмокалієвих квасців (для зменшення КІЛЬКОСТІ злущених епітеліальних клітин), слину зразу ж кладуть на лід Потім слину очищують, промиваючи кілька разів фізіологічним розчином у центрифузі при 1500 об/хв на протязі 15 хвилин, надосадкову рідину зливають До 0,1мл концентрованих лейкоцитів добавляють 0,5мл фізіологічного розчину(ФР), який далі використовують для постановки спонтанного і активованого латексом НСТ- тесту Для цього беруть 0,1мл розчинах з лейкоцитами, 0,5мл 0 2% розчину НСТ і 0 05мл ФР, а для стимульованого - у другу пробірку використовують ті ж інгредієнти, тільки замість ФР, як активуючу суспензію використовують 0,05 мл латексу Пробірки поміщають для інкубації в термостат при 37°С на ЗО хвил, після цього роблять мазок, висушують, фіксують 96% етиловим спиртом 25хвил і красять 0,1% розчином нейтрального червоного на протязі 2 хвил ональна здатність нейтрофілів оцінюється на 100 нейтрофілів і визначається у відсотках (%) Однак, у вказаного способу є той недолік, що у слині, крім лейкоцитів у великій КІЛЬКОСТІ знаходяться різні включення у вигляді мікроорганізмів, клітин злущеного епітелію, залишки їжа і т і Тому виникає необхідність у проведенні очистки слини від цих компонентів До того ж, вміст нейтрофілів є незначним і потребує тривалого концентрування, крім того, в умовах, в яких знаходяться лейкоцити у ротовій порожнині, тобто у слині, вони можуть швидко руйнуватися Це залежить від того, що слина має різну осмолярність, яка у разі ппоосмолярності спричиняє лізис лейкоцитів Цьому сприяють і коливання рН Вказані фактори суттєво зменшують відрізок часу існування лейкоцитів та їх функціональну спроможність Крім того, недоліками способу - прототипу є обмеженість застосування, бо оцінюється лише один показник фагоцитозу - відновлення нітросинього тетразолю, трудомісткість, а також вірогідність отримання зовсім незначного числа лейкоцитів із-за можливого їх лізису Для оцінки і підрахунку використовують клітини, які мають у плазмі гранули формазану Функці В основу винаходу поставлена задача визначення функціональної активності нейтрофілів ротової порожнини за НСТ - тестом спонтанним і активованим латексом, а також паралельно у цих же змивах визначення еміграції лейкоцитів на слизову ротової порожнини за 1 хвилину, і загальної їх КІЛЬКОСТІ за спонтанним і активованим НСТ - тестом, що дає можливість визначити більш широкі порушення у неспецифічній ланці імунітету Поставлена задача вирішується тим, що, зпд ю СО 47351 того промивання, центрифугують на протязі но винаходу, досліджуваний промиває ротову поЮхвил при 1500 об/хвил Надосадковий розчин рожнину стабілізованим розчином хлориду натрію зливають, а готовий концентрат, який містить доосмолярністю 300мосм/л та рН=7,2, після чого статню КІЛЬКІСТЬ нейтрофілів, використовують для одержаний змив центрифугують, визначають КІЛЬпроведення НСТ -тесту Визначають спонтанний КІСТЬ формазан - позитивних лейкоцитів за показта активований НСТ - тест, у відсотках від загальниками спонтанного і активованого НСТ - тесту і за ної КІЛЬКОСТІ нейтрофілів Паралельно у цих же показниками інтенсивності еміграції лейкоцитів за змивах у камері Ясиновського М А проводять під1 хвилину визначають загальну КІЛЬКІСТЬ спонтанрахунок інтенсивності еміграції лейкоцитів за 1 них і активованих лейкоцитів, які відображають хвилину Вираховували загальну КІЛЬКІСТЬ лейкофункціональну ознаку активності лейкоцитів цитів спонтанних та активованих по НСТ - тесту у Спосіб здійснюється наступним чином тис/хвил Досліджуваному спочатку без перерви проводять 4 промивання ротової порожнини по 10 мл Було обстежено 13 здорових людей у ВІЦІ 20 хлориду натрію з рН = 7,2 та осмолярністю 23 років В таблиці 1 приведені дані дослідження 1 300мосм/л на протязі /г хвилини кожне При цьому Вони свідчать про те, що у здорових людей, з одвидаляються всі раніше накопичені в наковими показниками НСТ - тесту активованого ній компоненти - слиз, залишки їжа і т п за допоабо спонтанного -загальна КІЛЬКІСТЬ активованих могою послідуючих промивань, починаючи з 5-го, або спонтанних лейкоцитів була різною які проводяться з п'ятихвилинними перервами, Визначити більш точно загальну КІЛЬКІСТЬ лейвимиваються із слизової оболонки і десневої борікоцитів є можливим, отримуючи точні показники здки ті лейкоцити, які встигли поступити із крові за інтенсивності еміграції, використовуючи стабілізоп'ятихвилинний відрізок часу [2] Далі розчин із ваний розчин свіжими лейкоцитами, який отримали під час п'яТаблиця 1 № п/п (здорові люди) Спонтанний НСТ - тест, % 1 2 3 4 5 6 7 8 Активований НСТ - тест, % Інтенсивність еміграції, тис/хвил 7 7 5 10 5 7 4 9 Загальна КІЛЬКІСТЬ лей Загальна КІЛЬКІСТЬ коцитів активованих за спонтанним НСТ-тестом, тис лейкоцитів за активованим НСТтестом,тис 8 174 122 139 9 232 162 20 9 5 208 104 104 12 214 214 25 7 7 186 93 13 02 9 224 157 20 2 6 244 98 146 14 302 27 2 42 3 9 8 15 284 22 7 42 6 10 10 12 320 32 0 38 4 11 3 5 264 79 132 12 6 9 282 169 25 4 13 9 11 324 29 2 35 6 Таким чином, у порівнянні із прототипом занейтрофилах слюны// Лабор дело -1989-№7 -С пропонований спосіб дозволяє у більш короткий 41-42 термін та з більшою вірогідністю визначати функ2 Лещинский А Ф Итенсивность эмиграции ціональну активність нейтрофілів та їх загальну лейкоцитов как показатель реакции организма при ревматизме, поражениях суставов и других воспаКІЛЬКІСТЬ лительных процессах // В сб Ревматизм - Киев Література Здоровье, 1974-Вып 7 - С 3-9 1 Темирбаев М А , Хасенова Б Д Методика теста восстановления нитросинего тетразолия в ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71