Спосіб кількісного визначення вмісту диклофенаку натрію методом рідинної хроматографії

Спосіб КІЛЬКІСНОГО визначення вмісту диклофенаку натрію методом рідинної хроматографії, який відрізняється тим, що проводять ефективну підготовку проб зразка шляхом обробки його етиловим спиртом з наступним кип'ятінням і фільтруванням Винахід належить до методів КІЛЬКІСНОГО визначення активної речовини з використанням хроматографії, наприклад високоефективної рідинної і може бути використаний в дослідженнях медичних пеєю США має такі етапи Таблетки, що вміщують диклофенак натрію у КІЛЬКОСТІ 20 переносять до мірної колби об'ємом 2000мл, заповнюють її приблизно на 70% сумішшю метанолу з водою у співвідношенні 70 ЗО і механічно струшують не менше, ніж ЗО хвилин до повного розпаду таблеток Одержану суміш охолоджують до кімнатної температури, додають той же розчинник до мітки і ретельно перемішують Порцію отриманого розчину фільтрують через фільтр, пористістю 0,5мкм і фільтрат хроматографують Хроматограму отриманого тестового розчину порівнюють з ВІДПОВІДНОЮ хроматограмою аналогічного стандартного розчину і, таким чином, визначають концентрацію диклофенаку натрію в розчині, що тестується До недоліків прототипу відносяться і ХІМІЧНИХ лабораторій Диклофенак натрію (Diclofenac sodium) є нестероідним протизапальним засобом (НПЗЗ), що викликає переважно протизапальну, аналгезуючу та жарознижуючу дію (синоніми Ортофен, Вольтарен, Диклонак, Диклобене, Ревмавек, Реводина, Фелоран, тощо [1] ВІДОМІ способи визначення вмісту диклофенаку натрію методом неводного титрування в льодяній оцтовій кислоті перхлорною кислотою [2] та шляхом УФ-спектроскопм буферних розчинів [3] Існує також декілька методів рідинної хроматографії, що рекомендуються до використання у національній Фармакопеї Великобританії (ВБ) [2], Сполучених Штатів Америки (США) [3] та ш країн Зазначені методи використовують в фармації при аналізі якості та вмісту субстанцій в сировині та в готових лікарських формах Основним недоліком наведених методів є те, що речовина яка визначається повинна бути достатньої чистоти і не повинна містити інших домішок у вигляді сполук з аналогічними функціональними групами, що не завжди можна дотримати при визначені диклофенаку натрію в комбінованих препаратах [1] та в різних сумішах, в біологічних об'єктах Найбільш близьким, прийнятим за прототип, є відомий спосіб визначення вмісту диклофенаку натрію методом рідинної хроматографії [3] Згідно цього методу, процедура визначення за Фармако 1 Тривалий (не менше ЗОхв) період екстрагування субстанції, 2 Використання легко летючого і токсичного розчинника -метанолу, 3 Небезпечність отруєння співробітників і оточуючого середовища метанолом В основу винаходу поставлена задача розробити такий спосіб КІЛЬКІСНОГО визначення диклофенаку натрію, який дає можливість значно скоротити тривалість аналізу і зробити його безпечнішим Означений технічний результат при здійсненні винаходу досягається ВІДПОВІДНОЮ ПІДГОТОВКОЮ проби зразка, яка здійснюється наступним чином Приклад 1 В колбу зі зворотним холодильником переносять 20 таблеток з прогнозованим вмістом диклофенаку натрію і заливають спиртом етиловим 1 ю 59297 (етанол) у КІЛЬКОСТІ біля 70% від потрібної Суміш кип'ятять 5 хвилин до повного розпаду таблеток і вивільнення субстанції диклофенаку натрію Одержану суміш охолоджують до кімнатної температури і переливають в мірну колбу Етанолом змивають залишки в колбі для кип'ятіння і одержаною сумішшю доводять до мітки в мірній колбі Подальші дії є аналогічними до прототипу, тобто порцію отриманого розчину фільтрують через фільтр, пористістю 0,5мкм і фільтрат хроматографують Хроматограму отриманого тестового розчину порівнюють з ВІДПОВІДНОЮ хроматограмою аналогічного стандартного розчину і, таким чином, визначають концентрацію диклофенаку натрію в розчині, що тестується Приклад 2 Умови проведення хроматографування - колонка X Terra RPis Зх250мм CJ=5MKM - елюент суміш фосфатного буферного розчину (рН2,5) і ацетонітрилу у співвідношенні 43 57 за об'ємом - швидкість потоку 0,4мл/хв , - час утримання диклофенаку натрію 9,37хв , - загальний час хроматографування 15хв , - довжина хвилі детектора 276нм, -температура колонки 35°С, - об'єм ін'єкції 5МКЛ Здійснення зазначеної підготовки проб рідин для визначення вмісту диклофенаку натрію дозволяє ефективно екстрагувати диклофенак натрію із сумішей допоміжних речовин в готових-лікарських засобах, зокрема таблетках, драже, сиропах і т п До переваг цього методу слід віднести 1 Технічну простоту виконання, 2 Використання ПОМІЖНИХ реагентів, мінімальної КІЛЬКОСТІ ДО 3 Скорочення часу екстрагування в 6 разів, 4 Виведення із застосування токсичного спирту метилового (метанолу) і заміну його на спирт етиловий (етанол), який є значно менш токсичним, 5 Спирт етиловий екологічно більш безпечний, ніж спирт метиловий, 6 Усувається необхідність придбання додаткового устаткування - струшувача, 7 Ретельно підібраний склад елюенту дозволяє краще і чіткіше відокремити хроматографічний пік диклофенаку натрію від ПІКІВ ІНШИХ речовин, що входять до складу сумішей Приклад 3 Конкретне виконання визначення Для експериментального підтвердження технічного результату був проведений експеримент по кількісному визначення диклофенаку натрію в таблетках методом, що заявляється в порівнянні з визначенням диклофенаку натрію методом, зазначеним у прототипі (див табл 1) Таким чином, запропонований спосіб визначення вмісту диклофенаку натрію методом рідинної хроматографії у сумішах дозволяє ефективно екстрагувати диклофенак натрію із готових лікарських форм та сумішей у спиртовий розчин До переваг цього методу слід віднести його технічну простоту, використання невеликої КІЛЬКОСТІ допоміжних реагентів та значне скорочення часу на його проведення Ретельно підібраний склад елюенту дозволяє чітко відокремити хроматографічний пік диклофенаку натрію від ПІКІВ ІНШИХ речовин, що входять до складу сумішей Джерела інформації 1 Машковский М Д Лекарственные средства В двух томах Т 1 Изд 14-е, стереотипное М ООО «Издательство Новая волна», -2000, с 170 2 British Pharmacopoeia -2001 -P 559-560 3 U S Pharmacopeia 24 NF 19 - 2000 -P 546547 Таблиця 1 Порівняльне визначення диклофенаку натрію (ДФН) різними методами КІЛЬКІСТЬ таб леток(шт) 20 20 20 Прогнозована КІЛЬКІСТЬ ДФН в кожній таблетці мг 50 50 50 Комп'ютерна верстка Н Лисенко КІЛЬКІСТЬ ДФН, Визначе- КІЛЬКІСТЬ ДФН, визначеного ного методом прототипу запропонованим методом 49,1±2,5 47,6±2,0 48,8±2,9 49,5±2,1 48,7±2,7 48,1±2,3 Підписано до друку 05 09 2003 Розбіжність у відсотках (%) +8 1 +2 3 -1 4 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна