Спосіб одержання імунної сироватки проти набрякової хвороби (коліентеротоксемії) поросят

Спосіб одержання імунної сироватки проти набрякової хвороби (коліентеротоксемії) поросят, призначеної для пасивної імунізації і імунотерапії набрякової хвороби у поросят, шляхом введення до складу антигенів для імунізації донорів сироватки крові полівалентного комплексу протективних антигенів збудників (гемолізинів, екзотоксинів, адгезивних антигенів), який відрізняється тим, що адгезивні антигени відокремлюють із суспензії бакмаси виробничих штамів за допомогою 10 М фосфатно-сечовинного буфера (рН 7,0-7,2) при 60°С протягом 20хв , ізольовані антигени шактивують формаліном, а як ад'ювант використовують 6% суспензію аеросилу на 0,9% розчині натрію хлориДУ Передбачуваний винахід відноситься до ветеринарної мікробіологи і біотехнологм, зокрема до способів виготовлення біологічних препаратів, а саме - до способів виготовлення сироватки для пасивної імунізації та імунотерапії набрякової хвороби у поросят Існують способи одержання „Полівалентної антитоксичної сироватки проти паратифу і колібацильозу телят, ягнят, овець, птахів" (Ветеринарные препараты Справочник Под ред Д Ф Осидзе - М , 1981г) та „Антиадгезивної та антитоксичної сироватки проти ешерихюзів молодняка" (ТУУ 46 15 178-96) Дані способи є близькими за технічним рішенням до об'єкту, що заявляється, але за допомогою біопрепаратів, що одержані вказаними способами, проводити ефективну пасивну імунопрофілактику та імунотерапію набрякової хвороби у поросят не представляється можливим Прототипом об'єкту, що заявляється, може бути "Способ получения антиадгезивной и антитоксической сыворотки против ешерихиоза сельскохозяйственных животных" Россия, "Бюллетень "Изобретения", 1996, №7, с 19, з №93009805) Але за допомогою вказаного способу неможливо одержати імунотропний лікувальнопрофілактичний препарат проти набрякової хвороби (коліентеротоксемії) поросят В основу винаходу, що передбачається, поставлено завдання розробити спосіб одержання імунної сироватки проти набрякової хвороби (колі ентеротоксемії) поросят шляхом введення до складу антигенів для імунізації донорів сироватки крові полівалентного комплексу протективних антигенів збудників (гемолізинів, екзотоксинів, адгезивних антигенів), причому адгезивні антигени відокремлюють із суспензії бакмаси виробничих штамів за допомогою 10 М фосфатно-сечовинного буфера (рН 7 0 - 7 2 ) при 60°С на протязі 20 хв , ізольовані антигени шактивують формаліном, а як ад'ювант використовують 6 % суспензію аеросилу на 0,9% розчині натрію хлориду, щоб забезпечити ефективне проведення імунопрофілактики та імунотерапії в сільськогосподарських господарствах при набряковій хворобі (коліентеротоксемії) поросят, при використанні способу одержання імунної сироватки проти набрякової хвороби поросят Спосіб виконують таким чином До складу комплексних антигенів для імунізації донорів вводять екзотоксини і гемолізини виробничих штамів ешерихій та відокремлені від бактеріальних клітин адгезивні антигени, причому адгезивні антигени відокремлюють шляхом прогрівання суспензії бакмаси в фосфатносечовинному буфері при 60°С-20 хвилин, ізольовані антигени шактивують формаліном , а як ад'ювант використовують 6% суспензію аеросилу на 0,9% розчині натрію хлориду Приклад 1 Відбір виробничих штамів ешерихій Для виготовлення вакцини відбирали штами ю 59914 ешерихій, збудників коліентеротоксемм поросят, яким властиво утворювати Р - гемолізини, екзотоксини та адгезивні антигени Приклад 2 Культивування виробничих штамів ешерихій Штами висівали в пробірки з бульйоном Хоттінгера і культивували при 37°С впродовж 16-18 годин Отриманою матричною культурою засівали ємності з бульйоном Хоттінгера Окремо проводять культивування штамів, що утворюють Р гемолізини, штамів, що утворюють екзотоксини та штамів, що експресують адгезивні антигени Культивування виробничих об'ємів культур вакцинних штамів проводили при 37-38,5°С -16-18 годин Приклад 3 Виготовлення комплексних антигенів для імунізації донорів Культуру виробничих штамів - продуцентів Ргемолізинів та екзотоксинів об'єднували і до них вносили 0,5% формаліну (40%) Інактивацію одержаної культури проводили при 37-38°С протягом 10-15 діб В бактеріальну суспензію виробничих штамівпродуцентів адгезивних антигенів, вносили фосфатно-сечовинний буфер (рН 7 0-7 2) виходячи з розрахунку 1л буфера на 10л бактеріальної суспензії Отриману суміш витримували 20 хвилин при 60°С В одержану суміш вносили 0,5% формаліну і шактивували при 37-38°С впродовж 10-15 діб Отримані шактивовані культури виробничих штамів об'єднували у співвідношенні 1 1, в одержану суміш вносили 20% зависі аеросилу (6%) в розчині 0,9% натрію хлориду Приклад 4 Визначення стерильності та нешкідливості Стерильність комплексного антигену визнача Комп'ютерна верстка Е Ярославцева ли за діючим ГОСТ 28085-89 Нешкідливість визначали загальноприйнятим методом на лабораторних тваринах Приклад 5 Імунізація донорів сироватки крові Імунізацію донорів сироватки крові комплексним антигеном проводять семикратно внутрішньом'язово з інтервалами між ІН'ЄКЦІЯМИ 5-7 днів в таких дозах 1-ша ІН'ЄКЦІЯ - 0,01-0,02см3/кг ваги, 2-га ІН'ЄКЦІЯ - 0,03-0,04см3/кг ваги 3-тя ІН'ЄКЦІЯ 0,05-0 06см3/кг ваги, 4-та ІН'ЄКЦІЯ - 0,07-0,08см3/кг ваги, 5-та ІН'ЄКЦІЯ - 0,09-0,1см3/кг ваги, 6-та ІН'ЄКЦІЯ - 0,11-0,12см3/кг ваги, 7-ма ІН'ЄКЦІЯ - 0,11-0,12см3/кг ваги Приклад 4 Визначення превентивної активності сироватки На сьомий день після останнього введення антигену від донорів, імунізованих комплексним антигеном, відбирають проби крові, одержують сироватку і визначають и превентивну активність Для цього 20 білим мишам масою 18-20г внутрішньочеревне вводять по 0,4см3 сироватки Через добу пасивно імунізованих тварин заражають летальною дозою бульйонної культури гемолітичного штаму Е соїі - збудника набрякової хвороби поросят Сироватку вважають активною в тому разі, коли із заражених (і імунізованих сироваткою) тварин виживають не менше 60%, а в групі контролю (не імунізовані тварини) загибель становить не менше 90% заражених тварин Спосіб одержання імунної сироватки проти набрякові хвороби поросят Препарат сироватки знайде застосування для пасивної специфічної профілактики та імунотерапії набрякової хвороби (коліентеротоксемії) поросят в тваринницьких господарствах громадського і приватного сектора власності, які спеціалізуються на свинарстві Підписано до друку 06 10 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна