Спосіб оцінки відповідності зрілості імунної системи плодів та новонароджених терміну гестації

Спосіб оцінки відповідності зрілості імунної системи плодів та новонароджених терміну геста 3 62110 них терміну гестації досягають за рахунок одночасної оцінки зрілості органів клітинної та гуморальної ланки імунітету. Спосіб виконують наступним чином: Під час розтину з грудини вирізують шматочок з кістковим мозком; матеріал фіксують в 10,0 % нейтральному формаліні, після спиртової проводки і заливання в целоїдин-парафін виготовляють серійні зрізи, товщиною 5-6 мкм; зрізи забарвлюють гематоксиліном і еозином, а також за прямим методом Кунса в модифікації Brosmann (1979), імунні клітини диференціюють за допомогою моноклональних антитіл (МКА) до CD22 (зрілі Влімфоцити) і IgM (пре-В-лімфоцити), як люмінесцентну мітку використовують F(аb)-2-фрагменти кролячих антитіл проти імуноглобулінів миші, мічених ФІТЦ; на зрізах, забарвлених гематоксиліном і еозином, на мікроскопі Olympus BX-41 при збільшенні 400 у 10 полях зору за допомогою сітки і лінійки Г.Г. Автанділова підраховують кількість всіх клітин (екземплярів) у полі зору; на зрізах, оброблених МКА до CD22, на люмінесцентному мікроскопі "Axioscop 40" при збільшенні 400 у 10 полях зору за допомогою сітки і лінійки Г.Г. Автанділова підраховують кількість клітин, які експресують рецептори до CD22; обчислюють відносний обсяг клітин з рецепторами до CD22 (%): кількість клітин (екземплярів) з рецепторами до CD22 (підрахованих на зрізах, оброблених МКА до CD22) збільшують на 100 % і ділять на кількість усіх клітин (екземплярів) у полі зору (підрахованих на зрізах, забарвлених гематоксиліном і еозином); на зрізах, оброблених МКА до IgM, на люмінесцентному мікроскопі "Axioscop 40" при збільшенні 400 у 10 полях зору за допомогою сітки і лінійки Г.Г. Автанділова підраховують кількість клітин, які експресують рецептори до IgM; обчислюють відносний обсяг клітин з рецепторами до IgM (%): кількість клітин (екземплярів) з рецепторами до IgM (підрахованих на зрізах, оброблених МКЛ до IgM) збільшують на 100 % і ділять на кількість усіх клітин (екземплярів) у полі зору (підрахованих на зрізах, забарвлених гематоксиліном і еозином); обчислюють співвідношення пре-В-лімфоцитів до зрілих В-лімфоцитів за формулою: n IgM : n CD22, де n - відносний обсяг клітин (%); отримані дані порівнюють з нормою (показник співвідношення пре-В-лімфоцити/зрілі В-лімфоцити у плодів і немовлят від матерів з фізіологічною вагітністю), яка у доношених плодів і немовлят відповідає значенням до 0,09, при достовірному перевищенні цих значень діагностують незрілість лімфоїдного компонента кісткового мозку, так, збільшення показника понад 0,1 свідчить про виражену незрілість лі Комп’ютерна верстка М. Мацело 4 мфоїдного компонента кісткового мозку і відповідає доношеним плодам і немовлятам від матерів із прееклампсією тяжкого ступеня. Ефективність способу ілюструють наступні приклади. Приклад 1. Плід строком гестації 36 тижнів від матері, вагітність якої протікала фізіологічно, загинув інтранатально. За допомогою стандартної програми «Statgraphics» на серійному зрізі тимуса встановлено, що кількість зрілих Т-лімфоцитів досягає 50, а незрілих 2. КЗ=(2:50)=0,040. При цьому на серійному зрізі кісткового мозку встановлено, то кількість зрілих В-лімфоцитів досягає 72, а незрілих - 3. КЗ=(3:72)=0,041. Порівнюючи отримані результати із середнім значенням КЗ для середньовагових плодів від матерів із фізіологічним перебігом вагітності (тимус та кістковий мозок до ОД), встановлюють, що тимус та кістковий мозок зрілі, тому нейтральна ланка системи імуногенезу в цілому відповідає терміну гестації. Приклад 2. Плід строком гестаціі 36 тижнів від матері, вагітність якої була ускладнена прееклампсією тяжкого ступеня, загинув інтранатально. За допомогою стандартної програми «Statgraphics» на серійному зрізі тимуса встановлено, що кількість зрілих Т-лімфоцитів досягає 43, а незрілих 6. К3=(6:43)=0,139. При цьому на серійному зрізі кісткового мозку встановлено, що кількість зрілих Влімфоцитів досягає 67, а незрілих - 7. К3=(7:67)=0,104. Порівнюючи отримані результати із середнім значенням КЗ для середньовагових плодів від матерів із фізіологічним перебігом вагітності (тимус та кістковий мозок до 0,1), прийшли до висновку, що тимус та кістковий мозок незрілі, тому центральна ланка системи імуногенезу в цілому не відповідає терміну гестації. Приклад 3. Плід строком гестації 36 тижнів від матері, вагітність якої була ускладнена прееклампсією середнього ступеня, загинув інтранатально. За допомогою стандартної програми «Statgraphics» на серійному зрізі тимуса встановлено, що кількість зрілих Т-лімфоцитів досягає 49, а незрілих - 3. К3=(3:49)=0,061. При цьому на серійному зрізі кісткового мозку встановлено, що кількість зрілих В-лімфоцитів досягає 66, а незрілих - 8. К3=(8:66)=0,121. Порівнюючи отримані результати із середнім значенням КЗ для середньовагових плодів від матерів із фізіологічним перебігом вагітності (тимус та кістковий мозок до 0,1), прийшли до висновку, що хоча тимус є зрілим, кістковий мозок - незрілий, тому нейтральна ланка системи імуногенезу в цілому не відповідає терміну гестації. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601