Спосіб оцінки ступеня атрофії тимуса плодів та новонароджених

Спосіб оцінки атрофії тимуса плодів та новонароджених, що включає визначення відносних обсягів стромального, лімфоїдного, епітеліального компонентів та незрілих пре-Тлімфоцитів органа, який відрізняється тим, що 3 визначення відносних обсягів стромального, лімфоїдного, епітеліального компонентів та незрілих пре-Т-лімфоцитів. В залежності від структурних зрушень атрофію тимуса ділять на три фази-ступеня (Ивановская Т.Е., Зайратьянц О.В., Леонова Л.В., Волощук И.Н. Патология тимуса у детей. - СПб.: СОТИС, 1996. - 270с.). Даний спосіб оцінки ступеня атрофії плодів та новонароджених є найбільш близьким до того, що заявляється, по технічній суті та результату, який може бути досягнутим, тому його обрано в якості прототипу. Основним недоліком способу-прототипу є його недостатня точність, так як ступінь атрофії оцінюють, використовуючи тільки структурні зрушення шляхом врахування відносних обсягів компонентів не враховуючи при цьому співвідношення цих обсягів. У зв'язку з вищевикладеним, в основу корисної моделі покладено задачу підвищення точності оцінки ступеня атрофії тимуса плодів та новонароджених. Задачу, яку покладено в основу корисної моделі, вирішують тим, що у відомому способі оцінки атрофії тимуса плодів та новонароджених, що включає визначення відносних обсягів стромального, лімфоідного, епітеліального компонентів та незрілих пре-Т-лімфоцитів органу, згідно з корисною моделлю, додатково враховують співвідношення цих обсягів та розраховують величину цього співвідношення за формулою Vs xVthy -1 Vl + Ve , де V - відносний обсяг строми, s Vl+Ve - відносний обсяг лімфоїдного та епітеліального компонентів, Vthy-1 - відносний обсяг незрілих пре-Т-лімфоцитів і якщо вона знаходиться в границях 1,5-3,0% - атрофію оцінюють як І ступеня, якщо в границях 3,1-4,5% як II ступеня, якщо величина співвідношення 4,6 та більше - атрофію оцінюють як III ступеня. Технічний ефект корисної моделі, а саме підвищення точності оцінки ступеня атрофії тимуса плодів та новонароджених, полягає в тому, що визначають не тільки відносні обсяги компонентів органу, а й їх співвідношення, що дає змогу практично повністю виключити такий суб'єктивний фактор, як кваліфікація дослідника. Спосіб виконують наступним чином: Тимуси досліджують макроскопічно. Виявляють та підраховують відносні обсяги строми, лімфоїдного, епітеліального компонентів та незрілих пре-Т-лімфоцитів. Враховують співвідношення відносного обсягу строми та пре-Тлімфоцитів до відносних обсягів лімфоїдного та епітеліального компонентів разом взятих. Вираховують кількісне значення цього співвідношення за формулою: Vs xVthy -1 Vl + Ve , де Vs - відносний обсяг строми, Vl+Ve відносний обсяг лімфоїдного та епітеліального компонентів, V thy-1 - відносний обсяг незрілих преТ-лімфоцитів. І якщо вона знаходиться в границях 1,5-3,0% - атрофію оцінюють як І ступеня, якщо в 30186 4 границях 3,1-4,5% - як II ступеня, якщо величина співвідношення 4,6 та більше - атрофію оцінюють як III ступеня. Кількісні значення структурних зрушень, які відповідають різним ступеням атрофії тимуса, встановлені експериментально. Результати експериментальних досліджень були сформовані за ступенем атрофії. При цьому атрофія І ступеня представлена тимусами, які макроскопічно мають трикутну форму і представлені двома дольками і перешийком. Зовні тимуси покриті сполучнотканинною капсулою, сірого кольору із синюшним відтінком. Паренхіма тимусів сполучнотканинними перегородками розділена на дольки. На розрізі тимус сірувато-синюшного кольору, дрібнозернистий. Маса тимусів знаходиться в межах від 0,018кг до 0,028кг, у середньому складає 0,025±0,0025кг, а відношення маси тимуса до маси тіла померлих дітей дорівнює 0,00261. Внутрішня структура тимуса представлена дрібними дольками, оточеними широкими сполучнотканинними перегородками і жировою клітковиною. Краї дольок у більшості випадків фестончасті, рідше округлі. Кортико-медулярна диференційовка змазана. Субкапсулярна зона складається з трьох рядів епітеліальних клітин. В осередках, утворених тілами і відростками цих клітин, розташовані нечисленні тимоцити і макрофаги. Щільність епітеліальних кліток цього шару дорівнює 510,0±6,2екз. у 1мм2. Відносний обсяг кори складає 39,51±2,16% (V1). Коркова речовина виглядає гіперхромно у порівнянні з мозковою речовиною. Це зв'язано з більш високою щільністю епітеліоцитів і тимоцитів кори, у порівнянні з мозковою речовиною. Епітеліоцити кори розташовані дифузно, щільність їх складає 450,0±2,7екз. у 1мм2. Тимоцити цієї зони дрібні, з гіперхромними округлими ядрами і дуже вузькими ободками помірно еозинофільної цитоплазми. Розташовані вони в мережному епітеліальному кістяку. Щільність кортикальних тимоцитів дорівнює 11405,0±306,0 у мм2. Мозкова речовина трохи вужче, ніж коркова. Відносний обсяг її складає 36,36±1,71% (Ve). Тимоцити медулярної зони виглядають більш світлими, чим тимоцити кори, за рахунок більшого обсягу цитоплазми. Щільність тимоцитів мозкової речовини дорівнює 7347,0±185,0 у 1мм2. Епітеліоцити мозкової речовини мають більш світлі веретеноподібні ядра і помірно еозинофільну цитоплазму. Щільність епітеліоцитів цієї зони дорівнює 320,0±3,2екз. у 1мм2. У мозковій речовині визначається безліч великих, кістовидозмінених тимічних тілець. Відносний обсяг їх складає 5,37±0,61%. Внутрішньодолькові периваскулярні простори розширені, містять пухку сполучну тканину й одиничні дрібні тимоцити і макрофаги. Відносний обсяг стромально-судинного компонента тимусів, які ввійшли у дану групу, складає 18,05±l,21%(Vs). Імуногістохімічне дослідження тимусів даної групи дозволило визначити відносні обсягу 5 основних структурних компонентів, які експресують різні антигени. Відносний обсяг епітеліальних клітин, які експресують HLA-Drантиген, склав 0,7±0,04%. Інтенсивність світіння ендотеліна-1 (мка) у венах і артеріях дорівнює 30,27±1,88 і 33,66±1,99 відповідно. Зрілі тимоцити містяться в наступних обсягах: CD3 - 29,2±4,0%, CD4+ - 25,0±3,0% і CD8+ - 11,0±2,5%. Імунорегуляторний індекс тимусів цієї групи (CD4+/CD8+) відповідає 3,18±0,4. Відносний обсяг незрілих тимоцитів, які експресують Thy-1 антиген складає - 11,0±1,5% (Vthy-l). Тимоцити, що знаходяться на різних стадіях дозрівання, мають відносні обсяги: CD7 - 75,0±5,0%, CD38 72,0±4,0%. Відносний обсяг клітин продуцентів ІЛ-7 і ІЛ-4 дорівнює 2,8±0,1% і 0,9±0,01% відповідно. Апоптозний індекс склав 48,3±4,78%. Кількісне значення структурних зрушень: 18,05 = x11 2,31 39,51+ 36,36 , щo відповідає атрофії 1-го ступеня. Атрофія II ступеня представлена тимусами, що макроскопічно частіше представлені двома дольками і перешийком, а в 3 випадках мають три дольки. Зовні вони покриті сполучнотканинною капсулою сірого кольору. Паренхіма на розрізі дрібнозерниста, сіруватого кольору, щільної консистенції. Маса тимусів коливається від 0,0200кг до 0,0250кг, у середньому складає 0,0227±0,0012кг, а відношення маси тимуса до маси тіла померлих дітей дорівнює 0,007264. Мікроскопічно тимуси представлені дуже дрібними дольками з фестончастими краями і масивними розростаннями сполучної тканини. У субкапсулярній зоні між двома рядами епітеліальних клітин розташовані одиничні тимоцити, з овальним гіперхромним ядром і вузьким ободком помірно еозинофільної цитоплазми, щільність яких складає 387,0±6,3екз. у 1мм2. Внутрішня кортикальна зона є вузької і більш гіперхромною у порівнянні з мозковою речовиною. Відносний обсяг її складає 28,74±0,7% (V1). Епітеліоцити кори розташовані як групами, так і дифузно, щільність їх складає 345,0±3,2екз. у 1мм2. Тимоцити кори розташовані рівномірно, але представлені дуже скудно. Щільність їх дорівнює 6580,0±230,0 у 1мм2. Медулярна зона ширше, ніж внутрішня кортикальна, відносний обсяг її складає 37,93±2,04% (Ve). Щільність медулярних тимоцитів дорівнює 4592,0±200,0 у 1мм2. Епітеліальний компонент у цій зоні виражений слабко. Щільність епітеліоцитів мозкової речовини дорівнює 190,0±3,7екз. у 1мм2. У мозковій речовині безліч великих, шаруватих, кістовидозмінених тимічних тілець, відносний обсяг яких, складає 4,33±0,66%. Внутрішньодолькові периваскулярні простори розширені. У них міститься пухка сполучна тканина, дрібні тимоцити і макрофаги. Відносний обсяг стромально-судинного компонента складає 28,95±2,15% (Vs). Показник відносного обсягу епітеліальних кліток, які експресують HLA-Dr - антиген дорівнює 30186 6 0,45±0,02%. Апоптозний індекс склав 40,2±3,35%. Відносний обсяг зрілих тимоцитів дорівнює - CD3 19,5±4,0%, CD4+ - 13,0±3,5% і CD8+ - 6,0±1,7%. Імунорегуляторний індекс CD4+/CD8+ відповідає 2,16±0,2. Незрілі тимоцити (Тhу-1) у тимусі складають - 8,5±2,5% (Vthy-1). Відносний обсяг тимоцитів різного ступеня зрілості дорівнює: CD7 - 90,0±8,0%, CD38 - 86,0±6,0%. Відносний обсяг ІЛ-7 і ІЛ-4 - продуцентів складає 0,49±0,01% і 0,15±0,01% відповідно. Інтенсивність світіння ендотеліна-1 (мка) у венах і артеріях дорівнює 22,22±2,10 і 23,11±2,66 відповідно. 28 35 Кількісне значення структурних зрушень 28,35 = x8,5 3,7 28,74 + 37,93 , що відповідає атрофії II-го ступеня. Атрофія III ступеня представлена тимусами, форма яких частіше наближається до трикутної, рідше має вид неправильного квадрата. Зовні він покритий сполучнотканинною капсулою, сіруваторожевого кольору. Тканина залози щільної консистенції, розділена на дольки, на розрізі дрібнозерниста, сіруватого кольору. Маса тимусів знаходиться в межах від 0,0180кг до 0,0200кг, у середньому складала 0,0189±0,0011кг, а відношення маси тимуса до маси тіла померлих дітей дорівнює 0,006048. Мікроскопічно капсула, що покриває паренхіму органа, представлена пухкою сполучною тканиною. Септи, що відходять від капсули, розділяють тимус на дрібні дольки з фестончастими краями. Субкапсулярна зона має два ряди епітеліальних клітин, між якими знаходяться одиничні тимоцити і макрофаги. У перикапілярних просторах цієї зони розташовані тимоцити і макрофаги, оточені пухкою сполучною тканиною. Епітеліальні клітки субкапсулярної зони середнього і дрібного розміру з округлими світлими ядрами і вузьким ободком цитоплазми. Щільність їх складає 270,0±3,6екз. у 1мм2. Місце переходу кори в мозкову речовину визначити практично неможливо внаслідок лімфоїдного спустошення цих зон. Внутрішня кортикальна зона складає 25,33±1,44% (V1) від загального обсягу тимуса. Кількість епітеліальних кліток кори, дорівнює 295,0±2,8екз. у 1мм2. Тимоцити, розташовані між епітеліальними клітинами, гіперхромні. Щільність їх дорівнює - 4900,0±316,0 у 1мм2. У мозковій речовині тимічні тільця не визначаються. Епітеліоцити медулярної зони більш світлі в порівнянні з корою, їхня щільність дорівнює 180,0±1,8екз. у 1мм2. Відносний обсяг мозкової речовини дорівнює -38,05±0,37% (Ve). Тимоцити цієї зони, щільність яких складає 3362,0±322,0 у 1мм2, мають темне округле ядро і вузький ободок світлої цитоплазми. Внутрішньодолькові периваскулярні простори цієї групи містять одиничні тимоцити, оточені пухкою сполучною тканиною. Відносний обсяг стромально-судинного компонента тимусів складає 36,6±1,28% (Vs). 7 Імуногістохімічно виявлено, що зрілі тимоцити містяться в тимусі в наступних обсягах: CD3 16,0±1,5%, CD4+ - 11,0±2,4% і CD8+ - 0,8±0,1%. Інтенсивність світіння ендотеліна-1 (мка) у венах і артерія склала 23,76±2,87 і 24,34±2,43 відповідно. Імунорегуляторний індекс CD4+/CD8+ дорівнює 13,75±1,05. Незрілі тимоцити, які експресують на своїй поверхні маркер Thy-1, складають 9,5±0,7% (V thy-1), від загального обсягу імунних клітин тимусів даної групи. Клітини, які експресують рецептори до CD7 і CD38, що знаходяться на різних стадіях диференціювання, складають 81,0±5,0% і 72,0±3,0% відповідно. Відносний обсяг ІЛ-7-продуцентів дорівнює 0,05±0,001%, ІЛ-4-продукуючих клітин 0,025±0,001%. Відносний обсяг епітеліальних клітин які експресують HLA-Dr - антиген складає 0,25±0,01%. Апоптозний індекс дорівнює 42,6±4,06%. Кількісне значення структурних зрушень 36,6 = x9,5 5,5 25,33 + 38,05 , що відповідає атрофії III-го ступеня. 30186 8