Спосіб визначення концентрації sн-груп у плазмі крові

Спосіб визначення концентрації SH-груп у плазмі крові шляхом проведення реакції з реакти вом Елмана (5,5'-дитюбіснітробензойна кислота) в лужному середовищі, який відрізняється тим, що для розширення функціональних можливостей та підвищення точності діагностики з виявленням прихованих чи повільно реагуючих SH-груп проводять осадження білків розчином трихлороцтової кислоти із подальшим розчиненням відмитого осаду в розчині сечовини Винахід належить до галузі медицини, а саме до біохімії і може бути використаний для діагностики концентрації сульфгідрильних груп у плазмі крові, які входять до складу багатьох біологічних сполук білків, пептидів, ферментів, відновленого глутатюну, цистеїну, ліпоєвої кислоти, гомоцистеїнутощо і є важливими для прояву функціональної активності білків каталітичної, зокрема аденілатциклазної, рецепторної, функціонування мембранних структур, взаємодії із ЗОВНІШНІМ середовищем клітини (ефекти гормонів, токсинів), різноманітних видів активного транспорту, ДІЯЛЬНОСТІ цитоскелету, поділу клітин Для дослідження концентрації сульфгідрильних груп у плазмі крові застосовують спосіб діагностики, який полягає в тому, що при взаємодії сполук з вільними SH-групами з реактивом Елмана (5,5'-дітюбіснітро-бензойною кислотою) при рН 8,0 проходить утворення тюнітрофенільного аніона, концентрація якого прямопропорційна КІЛЬКОСТІ SH-груп Визначення концентрації SH-груп проводять спектрофотометрично з врахуванням коефіцієнту молярної екстинцм тюнітрофенільного аніону, який при 412 нм рівний 1,14 х 104 М 1 х см" 1 [Мещишен І Ф , Григор'єва Н П Метод КІЛЬКІСНОГО визначення SH-груп у крові// Бук мед вісник2002-Т 6, N 2 - С 190-192] Водночас, застосування даного способу має ІСТОТНІ недоліки, які полягають у тому, що даний спосіб не дає можливості визначати приховані та повільнореагуючі SHгрупи, що знижує точність та функціональні можливості діагностики бити спосіб оцінки концентрації SH-груп у плазмі крові шляхом розширення можливостей методу із визначенням прихованих та повільнореагуючих SH-груп в плазмі крові, який відрізняється тим, що для підвищення точності діагностики проводять осадження білків розчином трихлорооцтової кислоти із подальшим розчиненням відмитого осаду в розчині сечовини За рахунок осадження білків розчином трихлорооцтової кислоти із подальшим розчиненням відмитого осаду в розчині сечовини забезпечується точність діагностики щодо визначення концентрації SH-груп в плазмі крові й усунення вищевказаних недоліків БІОХІМІЧНІ дослідження проводять шляхом додавання до 0,2 мл плазми крові 1,0 мл трихлороцтової кислоти і 1,0 мл Тріс-НСІ буферу (рН-8,0) Ретельно перемішують скляною паличкою, центрифугують впродовж 10 хв при 3000 об/хв Зливають супернатант і до осаду, що залишився додають 4 мл Тріс-НСІ буферу (рН-8,0) Знову центрифугують при 3000 об/хв 10 хв Після видалення супернатанту до денатурованого осаду білка додають 2,5 мл 8М розчину сечовини і ретельно перемішують скляною паличкою до повного розчинення осаду До цього розчину додають 0,1 мл реактиву Елмана Через 10 хв вимірюють на спекрофотометрі СФ-46 інтенсивність поглинання утвореного жовтого розчину при 412 нм Таким чином, запропонований спосіб розширює можливості методу із визначенням прихованих та повільнореагуючих SH-груп у плазмі крові, що підтверджує ефективність запропонованого способу В основу винаходу поставлено задачу розро (О (О 62126 діагностики До істотних ознак, що характеризують винахід відноситься оцінка концентрації SH-rpyn у плазмі крові шляхом розширення можливостей методу із визначенням прихованих та повільнореагуючих SH-rpyn у плазмі крові, який відрізняється тим, що для підвищення точності діагностики проводять осадження білків розчином трихлорооцтової кис лоти із подальшим розчиненням відмитого осаду в розчині сечовини, за допомогою чого досягається усунення вищевказаних недоліків, на відміну від прототипу, за яким дані позитивні ефекти не спостерігаються Технічний результат, якого можна досягти при здійсненні винаходу, полягає у підвищенні ефективності визначення концентрації SHrpyn у плазмі крові, результати наведені в таблиці Таблиця Порівняльна характеристика ефективності визначення концентрації SH-rpyn у плазмі крові відомим і запропонованим способом Способи діагностики Прототип Запропонований спосіб КІЛЬКІСТЬ хворих 20 20 Діагностовано приховані та Точність діагностики % повільно реагуючі SH-групи 2 10,0 20 100,0 Таким чином, застосування даного способу забезпечує підвищення ефективності діагностики з 10,0% до 100,0%, що вказує на ВІДПОВІДНІСТЬ даного винаходу критерію "позитивний ефект" Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак і технічним результатом полягає в тому, що для діагностики концентрації SH-rpyn у плазмі крові враховується можливість визначення прихованих та повільнореагуючих SH-rpyn, за допомогою чого вперше досягнуто високі критерії діагностики вищевказаних змін на відміну від прототипу, що забезпечує виявлення нових технічних властивостей винаходу з підвищенням ефективності діагностики концентрації SH-rpyn у плазмі крові Комп'ютерна верстка М Клюкш Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119