Спосіб визначення часу тромбоутворення у плазмі крові

Спосіб визначення часу згортання крові шляхом вимірювання часу тромбоутворення після до Винахід відноситься до медицини і може бути використаний у гематологи, практичній медицині для визначення часу тромбоутворення та дослідження динаміки згортання крові Аналогом винаходу є спосіб визначення часу згортання крові, який грунтується на визначенні часу утворення згустку у плазмі крові із фібріногену внаслідок його активації тромбіном, або іонами Са2+, в результаті чого у плазмі крові виникають нерозчинні у воді нитки фібріну (тромб) Визначають час рекальцифікацм при відсутності у плазмі крові тромбоцитів і час рекальцифікацм тромбоцитарної плазми Цей спосіб базується на визначенні часу згортання, під яким розуміють проміжок часу, протягом якого плазма крові, розміщена у пробірці при температурі 37°С, утворює згусток До Імл плазми крові добавляють 0,20мл розчину СаСЬ, фіксують час утворення згустка, який у нормі становить 70 - 110с [1] Недолік цього способу заключається в тому, що час утворення згустка сіро-білого кольору оцінюють візуально Прототипом винаходу є спосіб вимірювання часу згортання крові в процесі тромбоутворення У цьому способі на 1мл тромбоцитарної плазми крові добавляють 0,1мл розчину тромбіну (100g NiH) і фіксують час утворення згустка, який у нормі становить 9 - 15с [2] Недоліками прототипу є те, що він не дозво давання тромбіну до плазми крові, який відрізняється тим, що час тромбоутворення автоматично вимірюється за графіком динаміки протікання тромбінової реакції, який отримується при пропусканні лазерного випромінювання через кювету з плазмою крові, його реєстрації фотодюдом, проходження електричного сигналу через електронний блок з операційним підсилювачем, автоматичний аналогово-цифровий перетворювач і персональний комп'ютер ляє точно визначати час початку і кінця згортання крові, не представляється можливим автоматизувати вимірювання часу в різні стадії тромбоутворення та досліджувати динаміку протікання тромбінової реакції В основу винаходу поставлена задача удосконалення способу визначення часу тромбоутворення для забезпечення об'єктивної оцінки Поставлена задача здійснюється наступним чином У способі визначення часу згортання крові шляхом вимірювання тромбоутворення після додавання тромбіну до плазми крові, згідно винаходу, час тромбоутворення вимірюється на графіку Запропонований спосіб базується на дослідженні зміни розсіюючих властивостей плазми крові при добавленні до неї розчину СаСЬ, або розчину тромбіну людини, згідно норми На фіг 1 представлено схему приладу для автоматичного визначення часу тромбоутворення у плазмі крові Винахід здійснюється наступним чином Світло довжиною хвилі X = бЗЗнм від лазера 1 направляється перпендикулярно до стінок кювети з досліджуваною плазмою крові 2, промінь лазерного світла направляється у телескопічну трубку, фокусується об'єктивом 3, фокусна відстань якого становить 400мм, потім проходить через діафрагму 4 діаметром 2мм Це забезпечує кут зору 2ш = 20', що дає можливість проводити вимірювання у при со 00 ю 58370 міщенні без спеціального затемнення, оскільки в об'єктив 3 падає лише пряме світло, яке пройшло через кювету 2 Для реєстрації лазерного випромінювання служить кремнієвий фотодюд 5, який має достатньо високу чутливість у області спектра при X = бЗЗнм Електричний сигнал від кремнієвого фотодюда 5 подається в електронний блок з операційним підсилювачем 6, ввімкненого за схемою "перетворювач струм-напруга" Підсилений електричний сигнал надходить на 16-ти розрядний дельта-сигма аналогово-цифровий перетворювач "АЦП" 7 Цифровий сигнал, який відповідає інтенсивності лазерного випромінювання, що пройшло через досліджувану плазму крові, з виходу АЦП 7 надходить у персональний комп'ютер (PC) 8 По осі ординат відкладається значення інтенсивності сигналу у відносних одиницях, а по осі абцис - цифри, що відповідають часовому інтервалу тромбоутворення у плазмі крові в секундах У PC 8 дані візуалізуються у вигляді графіків, які можна обробляти, зберігати та друкувати на принтері Загальна КІЛЬКІСТЬ точок по ВІСІ абцис визначає час тром боутворення У наших дослідженнях дані фіксуються з частотою 10Гц, тобто часовий інтервал функції сигналу становить 0,1с Для отримання динаміки зміни сигналу протягом 20с необхідно задати 200 точок, а протягом 30с, ВІДПОВІДНО - 300 точок Результати випробування способу визначення часу тромбоутворення у плазмі крові Порядок вимірювання наступний включаємо лазер й електронну частину приладу, направляємо лазерне випромінювання на кювету з досліджуваною плазмою крові У початковий момент часу (t = 0) плазма крові має максимальне пропускання світла для X = бЗЗнм Добавляємо до плазми крові розчин тромбіну, або СаСЬ Підсилений електричний сигнал надходить у АЦП, а потім у PC, в якому починається ВІДЛІК часу і реєстрація величини сигналу через кожні 0,1с Як приклади, результати вимірювання приведені на фіг 2 для часу розгортки 20с, а на фіг 3 для часу розгортки 30с З графіків видно, що тромб починає зароджуватися через 1 - 2с після добавлення у плазму крові розчину тромбіну Криві з багатьма мінімумами та максимумами ілюструють картину фібріногену - динаміку утворення тромбу в той час, коли із фібріногену у плазму крові починають утворюватися нерозчинні у воді світлорозсіюючі центри - нитки фібрину Запропонований спосіб визначення часу тромбоутворення є об'єктивним і дозволяє в автоматичному режимі досліджувати та віазуалізувати динаміку тромбоутворення, проводити кількісну оцінку часу на різних стадіях зародження й утворення тромбу Спільними ознаками прототипу та способу, що заявляється є те, що вимірюється час утворення тромбу Порівняння способу, що заявляється як винахід та способу-прототипу, подано утабл 1 Таблиця 1 Ознака Спосіб вимірювання Спосіб реєстрації часу утво- тромбоутворення рення тромв плазмі крові бу в плазмі (спосіб, що заявкрові (протоляється) тип) точність вимірювання при 1,0-2,0с тромбіновій реакції автоматизація вимірювання часу в різні ста- Не можливо дії тромбоутворення візуалізація динаміки тромбо- Не можливо утворення 0,1с Так Так При дослідженні динаміки згортання крові використовувались три типи реакцій реакція рекальтифікацм плазми крові без тромбоцитів, реакція рекальтифікацм плазми крові з тромбоцитами, тробшова реакція у плазмі крові з тромбоцитами У табл 2 приведені часові процеси згортання крові для вказаних реакцій Таблиця 2 Плазма крові без тромбоцитів 3 тромбоцитами тромбінова реакція Час почат- Час закін- Час тромку утвочення фобоутрення тро- рмування ворення tkмбу to, С тромбу tk, с tb, С 90-120 210-270 120-150 60-120 110-195 50-75 1 -2 10-15 9-13 Література 1 Маркосян А А Физиология свертывания крови - М Москва, 1966 - 307 с 2 Кудряшов Б А Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови и ее свертывания - М Москва, 1975 -233 с 58370 5 гч 4 3 7 1 2 8 г 6 Фіг. І. Функціональна схема приладу для визначення часу тромбоутворення у плазмі крові 1 .0 , h О I 0 8 t S o і О о го .о 10 t, с e к IS Фіг 2 Диламіка протікання тромбшової реакші (перший варіант) О і ,о о .в г 0,2 t, с е к ФігЗ. Динаміка протіканкя тромбіновоТ реакції (другий варіант) Комп'ютерна верстка М Клюкш Підписано до друку 05 08 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна