Спосіб визначення концентрації еуфіліну в сироватці крові

Використання способу визначення вмісту теофіліну у водному розчині як способу визначення концентрації еуфіліну в сироватці крові Винахід відноситься до досліджень або аналізу матеріалів шляхом розділення на складові частини, здебільшого до рідинної колоночної хроматографії, та досліджень медичних препаратів, й може бути використаним в медицині Рівень техніки, який досліджений заявником, інформує про відсутність об'єктів щодо визначення концентрації еуфіліну в сироватці крові, відомого також як амінокардол, амінофілін, аммофілін, діафілін, гемофілін, метафілін, неофілін [1] Відсутність засобів того ж призначення дає можливість стверджувати про те, що винахід не має аналогів У основу винаходу поставлена задача розробити спосіб визначення концентрації еуфіліну в сироватці крові, який шляхом рідинної хроматографії забезпечує технологічно сприйнятливу чутливість і ступінь екстракції, та поширити межі його використання Поставлена задача вирішується використанням способу визначення вмісту теофіліну у водному розчині, як способу визначення концентрації еуфіліну в сироватці крові Спосіб визначення концентрації еуфіліну у водному розчині містить кислотну обробку проби, и екстрагування сумішшю хлороформу з ізопропанолом, взятих у співвідношенні 95 5, відділення органічного шару, фільтрацію, випаровування, розчинення сухого залишку 0,03Н розчином соляної кислоти та хроматографування, з використанням як елюенту суміші ацетонітрила з водою при технологічно сприйнятливому співвідношенні їх масових частин [2] На думку заявника відоме технічне рішення може забезпечити визначення концентрації шуканого агента в сироватці крові у відомому вигляді Використання як екстрагента суміші хлороформу з ізопропанолом у співвідношенні 95 5 зумовлює поляризацію сироватки крові в пробі та забезпечення необхідної ступіні екстракції еуфіліну при екстрагуванні, а суміш ацетонітрила з водою забезпечує спорідненість сироватки крові з елюентом, утворює між періодами утримання виділених фракцій інтервали, достатні для визначення концентрації аналізату в сироватці, а від так - забезпечує чутливість, необхідну для повного визначення еуфіліну в крові Змінюючи співвідношення компонентів вмісту в елюенті в допустимих межах можливо впливати на селективність, а від того - вийти на більш високий поріг чутливості при визначенні концентрації шуканого агенту в сироватці крові ніж у водному розчині Доопрацювання кислотного впливу на початкову пробу надає змогу не тільки нейтралізувати дію складових елементів сироватки крові, але й оптимізувати и кислотність та пригнітити водночас кислотну агресію ВІДОМОСТІ, ЩО підтверджують можливість від творення способу полягають в наступному Для визначення концентрації еуфіліну в сироватці крові використовували хроматограф «МІЛЛІхром-1», колонку з повернутонофазним сорбентом «Діасорб-130» або іншого типу, що забезпечує довжину хвилі 270нм і швидкість потоку 100мкл/хв, а також елюент, виготовлений у вигляді суміші ацетонітрила з водою при технологічно сприйнятливих співвідношеннях масових частин, водний 2,4% розчин еуфіліну (ПО «Дарниця», Україна), 1 00 ю 45287 хлорна 6% чи соляна 5% кислота та екстрагент, виготовлений у вигляді суміші хлороформу з ізопропанолом при взаємному співвідношенні частин 95 5 Для визначення концентрації еуфіліну в сироватці крові пробу спочатку змішують з заданою КІЛЬКІСТЮ кислоти До отриманої суміші додають екстрагент - хлороформ з ізопропанолом, які беруть у співвідношенні 95 5, з подальшим екстрагуванням шляхом примусового струшування Піпеткою відокремлюють органічний шар і фільтрують залишок У подальшому відібраний екстракт випаровують насухо, а суху остачу обробляють 0,03Н розчином соляної кислоти та проводять хроматографування з використанням як елюенту суміші ацетонітрила з водою, взятих у технологічно сприйнятливому співвідношенні Приклад №1 До 0,5мл сироватки крові додали 0,5мл 0,05Н розчину соляної кислоти та перемішали У отриману суміш ввели 5мл екстрагента, виготовленого на основі хлороформу з ізопропанолом, взятих у співвідношенні 95 5 Екстракцію здійснили протягом 25хв шляхом струшування маси, органічний залишок ВІДДІЛИЛИ піпеткою, а аналізат піддали фільтрації з подальшим промиванням фільтрувального паперу 2мл порцією хлороформу Відфільтрований екстракт насухо випарили у скляній пробірці на роторному випарнику, а сухий залишок розчинили у 200мкл 0,03Н соляної кислоти, після чого провели хроматографування з використанням як елюенту суміші ацетонітрила з водою, взятих у співвідношенні 15 85 Приклад №2 До 0,5мл сироватки крові додали 0,5мл хлорної кислоти та перемішали, до суміші додали 5мл екстрагента - хлороформ з ізопропанолом, у співвідношенні їхніх масових частин 95 5 Екстракцію здійснили протягом 25хв шляхом струшування суміші, органічний залишок ВІДДІЛИЛИ піпеткою, а аналізат піддали фільтрації Відфільтрований екстракт насухо випарили у скляній пробірці на роторному випарнику, а сухий залишок розчинили у 200мкл 0,03Н соляної кислоти, після чого провели хроматографування з використанням як елюенту суміші ацетонітрила з водою, взятих у співвідношенні 20 80 Тож, шляхом рідинного хроматографування доведена можливість забезпечення технологічно сприйнятливої чутливості та ступіні екстракції еуфіліну в сироватці крові, здебільшого за рахунок повного розділення інгредієнтів фракції, а також поширення первинних меж використання способу Використання способу в лабораторіях медичних підприємств, має переважливе значення, бо допомагає підвищити вірогідність визначення шуканого агента, з можливостями високоточної оцінки імовірностей виникнення неадекватних явищ та проведення ВІДПОВІДНИХ терапевтичних заходів Важливою ознакою використання відомого способу за новим призначенням є відтворення процесу розділення фракції на складові частини, з можливістю визначення її концентрації в сироватці крові Таблиця №1 Технічна характеристика способу визначення концентрації еуфіліну в сироватці крові При співвідношенні ацетоніПри співвідношенні Ацетонітрил вода = 20 80 та обробці проби хлорною кисло- трил вода =15 85 та обробці проби соляною кислотою тою Показники Чутливість визначення еуфіліну в пробі, нг/мл Джерела інформації 1 Машковский М Д Лекарственные средства В двухтомах Т 1 Изд 10-е, стереотипное М «Медицина», 1987, с 457 2 http //ilch vsmu edu ua/hplc/drug/1-0002 htm 100 0,95 Ступінь екстракції еуфіліну, од 80 0,85 Сайт совместной медикобиологической лаборатории Винницкого государственного университета им Н И Пирогова и Института поверхности НАН Украины Теофиллин (Updated 10 09 2001) ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90