Штам clostridium perfringens тип с, що використовується для виготовлення вакцини проти анаеробних інфекцій сільськогосподарських тварин

Винахід відноситься до ветеринарної мікробіології, зокрема, до біотехнології і може бути використаний для виготовлення вакцин проти анаеробних інфекцій сільськогосподарських тварин, які широко поширені на тваринницьких фермах і завдають значних економічних збитків [5]. Хіміотерапія анаеробних інфекцій мало ефективна і трудомістка. В зв'язку з цим, основним ефективним методом боротьби з цими хворобами є вакцинація тварин [5]. Штами анаеробних мікроорганізмів, що пропонуються для виробництва вакцин повинні мати стабільні морфологічні, культурально-біохімічні властивості, добре виражені патогенні властивості, бути нешкідливими та високо імуногенними. Аналогом винаходу є виробничий штам Clostridium perfringens тип С, на основі якого отримана концентрована гідроокис алюмінієва формолвакцина проти ентеротоксемії поросят, а також Clostridium perfringens тип С виробничий штам "ВТ" для виробництва асоційованої вакцини проти сибірки, анаеробної дизентерії та інфекційної ентеротоксемії овець [2,3]. Прототипом винаходу є штам Clostridium perfringens №3, який активно продукує В-токсин типу С і що використовується для виробництва асоційованої вакцини проти анаеробної ентеротоксемії та ешерихіозів поросят [4]. У вітчизняній ветеринарній практиці немає штаму Clostridium perfringens типу С, який би був запропонований для виробництва вакцин проти анаеробних інфекцій. Це затру днює розробку засобів специфічної профілактики проти таких економічно значимих захворювань, як анаеробна ентеротоксемія, анаеробна дизентерія молодняка та інших клостридіозів сільськогосподарських тварин. Метою даного винаходу є вакцинний штам Clostridium perfringens №132 тин С, який володіє стабільними морфологічними та культурально-біохімічними властивостями, добре вираженими патогенними властивостями і був виділений з матеріалу відібраного від поросяти з ознаками ентеротоксемії. Штам Clostridium perfringens тип С задепонований в колекції мікроорганізмів Державного науковоконтрольного інституту біоте хнології і штамів мікроорганізмів і має реєстраційний номер 132. Штам Clostridium perfringens тип С №132 може бути використаний як основа для виготовлення асоційованих концентрованих інактивованих вакцин: "Вельшисальм'' (вакцина проти анаеробної ентеротоксемії і сальмонельозу тварин), "Вельшіпаст" (вакцина проти анаеробної ентеротоксемії і пастерельозу тварин), "Вельшікол" (вакцина проти анаеробної ентеротоксемії і колібактеріозу тварин), "Вельшіколісальм" (вакцина проти анаеробної ентеротоксемії, колібактеріозу та сальмонельозу тварин) та входити до складу інши х асоційованих вакцин, таких як "Пневмомастисан" (вакцина проти пневмоентеритів і маститів тварин), "Некросан" (вакцина проти проти некротичного гепатиту, злоякісного набряку, інфекційної (анаеробної) ентеротоксемії), "Сердосан" (вакцина проти колібактеріозу, набрякової хвороби, пастерельозу, сальмонельозу і анаеробної ентеротоксемії свиней), '''Актиносан" (Бакїш.ііа проти актинобацильозу тварин), "Поліавісан" (вакцина проти бактеріозів птахів), а також до сладу вакцини проти брадзоту овець, злоякісного набряку, некротичного гепатиту. Штам Clostridium per/ringens №132 тип С характеризується наступними властивостям и. Морфологічні властивості. Грам позитивні товсті, нерухливі паличковидні бацили: із заокругленими кінцями. Найчастіше розташовані поодиноко. Мають спори овальної форми, що розташовані центрально чи прикінцево. Культуральні властивості. Факультативний анаероб. Оптимальна температура культивування 37°С. На середовищі Кітт-Тароцці спостерігається раннє помутніння (поява росту через 5-6 годин) з інтенсивним газоутворенням та утворенням осаду. Через 48-56 годин наступає просвітління середовища. На кров'яному агарі в анаеробних умовах утворює сірува то-зелені колонії округлої форми, випуклі з рівними краями та зоною гемолізу коричневого кольору. При доступі кисню колонії зеленіють. На середовищі Вільсон-Блера утворює колонії чорного кольору, при інтенсивному рості середовище чорніє з розривом стовпчика та утворенням газу через 1-3 години культивування. Молоко інтенсивно згортається з утворенням губчатого згустку, розріджує желатину. Ферментативні властивості. Штам Clostridium perfrmgens №132 тип С ферментує з утворенням кислоти і газу глюкозу, сахарозу, мальтозу, галактозу, не ферментує маніт, дульцит, не утворює сірководень. Таблиця 1 Біохімічні властивості вакцинного штаму Clostridium perfrmgens №132 тип С Глюкоза Мальтоза Галактоза Сахароза Маніт Дульцит Утворення сірководню + + + + + Патогенні властивості. Штам Clostridium perfringens №132 тип С патогенний для білих мишей та морських свинок. При внутрішньовенному введені білим мишам надосадової рідини 15-27-годинної бульйонної культури штаму Clostridium perfringens №132 тип С в об'ємі 0,5см та розведенні 1:1000 спостерігається швидка загибель мишей протягом 18-24 годин. А при підшкірному чи внутрішньом'язовому введенні морським свинокам в дозі 1,0см 3 спостерігається повільна загибель протягом, 36-48 годин. На місці ін'єкції шкіра відшаровується, м'язи мають вигляд вареного м'яса, сірувато-брудіного кольору. Кишечник переповнений газами. Визначення типу токсину визначається в реакції нейтралізації специфічними сироватками з послідуючим зараженням тварин живою культурою. Штам Clostridium perfringens №132 тип С утворює термолабільний токсин, максимальна концентрація якого при культивуванні в живильному середовищі, сягає на 18-24 годину. Таким чином, використання запропонованого штаму Clostridium perfringens №132 тип С, який володіє стабільними морфологічними, культуральними, вірулентними та добре вираженими імуногенними властивостями, в якості вакцинного, дозволяє підвищити ефективність вакцино профілактики анаеробних інфекцій сільськогосподарських тварин. Запропонований штам володіє високою патогенністю, придатний для виробництва вакцини проти анаеробної дизентерії, анаеробної ситеротоксемії некротичного ентериту, некробактеріозу. Виготовлена вакцина, до складу якої входить цей штам, захищає від 80% до 100% тварин. Літературні джерела. 1. Определитель бактерий Берджи /под. ред. Дж. Хоулта, Н Крига, П.Снита и др. Перевод с англ. акад. РАН Г.А. Заварзина. - 9-е изд. в 2-х томах . -1997. -800с. 2. Патент 2098127 RU, А 61 К 39/116, С12N1/20. Ассоциированная вакцина "НЕКОВАК" против некробактериоза крупного рогатого скота / Сидорчук А.А., Панасюк С.Д. и др.; №9611157/13. Заявлено 26.09.96; Опубликовано 10.12.97. Бюл. №34. -4с. 3. Патент 2141340 RU, А61К39/116 // А61К 39/07,39/08. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы, анаэробной дизентерии и инфекционной энтеротоксемии овец и способ профилактики этих болезней / Гаврилов В.А., Селиверстов В.В., Бакулов И.А. и др.; № 98107544/13; Заявлено 21.04.98; Опубликовано 20.11.99, Бюл. №32. -4с. 4. Патент 2129441 RU, A61К39/116 // А61К39/08,39/108. Вакцина, ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиоза поросят / Кириллов Л.В., Мала хов Ю.А., Пирожков М.К. и др.; №97120415/13; Заявлено 10.12.97; Опубликовано 27.04.99, Бюл. №12. -8с. 5. Риженко В.В., Марченко ОМ., Бондар Т.О., Галка І.В., Риженко І.В., Кравцова О.Л., Чертков О.О. Актуальні питання профілактики анаеробних інфекцій людини і тварини //Бюлетень "Ветеринарна біотехнологія" IBM УААІІ, Київ, 2002. -№2. -С.199-204.