Спосіб підвищення чутливості ізольованого нативного м’яза до ацетилхоліну

Винахід стосується медицина зокрема експериментальної патології, нейрофізіології, фармакології, і може бути використаний при експериментальному дослідженні медіаторних систем нервово-м'язової передачі імпульсів. Відомий спосіб підвищення чутливості ізольованого нативного м‘яза до ацетилхоліну, який включає інкубацію ізольованого м'яза, лабораторної тварини, зокрема жаби, в розчині суміші ацетилхоліну і біологічно-активної речовини - підсилювача чутливості м'яза до ацетилхоліну, і наступн у реєстрацію реакції у вигляді кімограми [1]. За відомим способом, чутливість м‘яза підвищують шляхом внесення в камеру з ізольованим м язом та розчином ацетилхоліну речовини-індуктора чутливості м'яза, а саме ацетону. Недоліком відомого способу є недостатня ефективність підвищення чутливості ізольованого м‘яза до ацетилхоліну, що випливає з того, що за умов незначного вмісту цього медіатора є інкубаті м'яз буде недостатньо чутливим до нього. До недоліків слід також віднести неспецифічний характер впливу такого індуктора, як ацетон, дія якого пов'язана, значною мірою, з зміною фізико-хімічного стану біомембран. Крім того, кінцевий результат визначення .залежить від вмісту в ацетоні побічних домішок, що також суттєво знижує точність, а отже інформативність дослідження. В основу винаходу поставлено завдання вдосконалити відомий спосіб, в якому шляхом зміни чутливості ізольованого м'яза, до медіаторних систем на рівні цілісного організму за рахунок попереднього введення специфічного фармакологічного чинника досягають підвищення точності, інформативності, а отже ефективності дослідження. При вирішенні технічного завдання було взято до увага те, що, відповідно до закону денервації Кеннона, позбавлені ендогенного холінергічного впливу денервовані м'язи реагують на зовнішній ацетилхолін сильніше, ніж у нормі. Виходячи з цього, для чутливості ізольованого м'яза є використання препарату цисапу, фармакологічно-активним компонентом якого є селективний холіноміметик цисаприту моногідрат. На відміну від ацетону, дія якого спрямована на фізико-хімічний стан біомембран, вплив цисапу на холінергічні рецептори ізольованого м'яза є більш фізіологічним і специфічним, порівняно з дією ацетону. Препарат цисап стимулює виділення ацитилxoліну з нервових закінчень, що призводить до зменшення депо медіатора в синаптосомах і зниження концентрації ацетилхоліну в зоні контакту з холінорецепторами [2]. Виснаження синаптосом і зменшення концентрації ацетилхоліну в зоні його контакту з холінорецепторами зумовлює підвищення чутливості їх до ацетилхоліну. Виходячи з наведеного, поставлене завдання вирішують тим, що у відомому способі підвищення чутливості ізольованого нативного м‘яза до ацетилхоліну, який включає інкубацію ізольованого м'яза лабораторної тварини, зокрема жаби, в розчині суміші ацетилхоліну і біологічно-активної речовини - підсилювача чутливості м'яза до ацетилхоліну, і наступну реєстрацію реакції у вигляді кімограми, відповідно до винаходу підсилювачем чутливості м'яза беруть фармакологічний препарат цисап, який вводять в організм лабораторної тварини попередньо, перед виділенням м'яза з тіла тварини:, причому препарат цисап вводять внутрішньом‘язово з розрахунку 80мг цисаприту моногідрату на 1кг маси тварини один раз на добу впродовж 3 днів. Спосіб здійснюють таким чином. Лабораторній тварині - жабі внутрішньом‘язово вводять цисап - підсилювач чутливості м'яза до ацетілхоліну з розрахунку 80мг цисаприту моногідрату на 1кг маси тварини один раз на добу впродовж 3 днів. Після цього відокремлюють прямий м'яз 1 (фіг.) живота тварини і занурюють його в інкубаційну камеру 2 для визначення вмісту ацетилхоліну, куди почергово, користуючись канюлею 3, доливають розчини ацетилхоліну в концентраціях. Готують наступні розведення 1×10-8, 1×10-9, 1×10-10, 1×10-11, 1×10-12, 1×10-13. Забезпечення ізольованого м'яза киснем здійснюють від додаткового джерела (на фігурі не позначено) через повітропровідну трубку 4. Чутливість до розчинів ацетилхоліну у зазначених концентраціях визначають за висотою підйому рівня пера 5 кімографа 6. До уваги беруть висоту підйому 0,5 мм і більше. При наявності скорочення м'яза з записом на кімограмі роблять висновок про його чутливість до ацетилхоліну в даній для конкретного досліду концентрації. Приклад 1. Лабораторній жабі масою 50г протягом 3 діб один раз на добу внутрішньом‘язово вводили 1мл цисапу, що відповідає дозі 80мг/кг цисаприту моногідрату. Після цього відокремили прямий м'яз живота тварини і занурили в інкубаційну камеру, куди доливали розчини ацетилхоліну в певних концентраціях. Готували наступні концентрації ацетилхоліну 1×10-8, 1×10-9, 1×10-10, 1×10-11, 1×10-12, 1×10-13. Cхема експерименту зображена на фігурі. Реакцію ізольованого нативного м'яза реєстрували у вигляді кімограми. Про рівень чутливості ізольованого нативного м'яза робили висновок за рівнем тугому пера кімографа. До уваги брали висоту підйому пера 0,5мм і більше. За даних умов м'яз був чутливим до вказаних концентрацій ацетилхоліну, причому чим вищою була концентрація медіатора в розчині, тим вищим був рівень підйому пера кімографа. Приклад 2. При допомозі запропонованого способу провели дослідження чутливості 24 ізольованих нативннх прямих м'язів живота жаб до розчинів ацетилхоліну в наступних концентраціях 1×10-8, 1×10-9, 1×10-10, 1×10-11, 1×10-12, 1×10-13. Контролем були досліди на чутливість до ацетилхоліну з використанням ацетону за методикою способупрототипу. Результати дослідження чутливості ізольованих м'язів живота до ацетилхоліну в таблиці. Таблиця Чутливість м'яза живота до ацетилхоліну, визначена за способом-прототипом і запропонованим способом № п/п 1 2 3 4 Максимальна чутливість Контроль (ацетон як № Дослід (цисап) підсилювач чутливості) п/п -8 1 1×10 1×10-11 -9 2 1×10 1×10-11 -9 3 1×10 1×10-11 -9 4 1×10 1×10-11 5 6 7 8 9 10 11 12 1×10-10 1×10-8 1×10-9 1×10-10 1×10-9 1×10-9 1×10-9 1×10-9 5 6 7 8 9 10 11 12 1×10-12 1×10-11 1×10-11 1×10-11 1×10-10 1×10-12 1×10-13 1×10-11 Як видно з таблиці, в умовах контролю ізольований прямий м'яз живота жаби б присутності ацетону реагував на концентрацію ацетилхоліну 1×10-8, 1×10-9, 1×10-10, тоді як після використання писану чутливість м'яза збільшилася: скорочений м'яза спостерігали при нижчих концентраціях медіатора, а саме 1×10-11, 1×10-12, 1×10-13. Таким чином, запропонований спосіб забезпечує більш точне, ніж за способом-прототипом, вмісту медіатора ацетилхоліну, тобто в концентраціях нижчих, ніж за відомим способом, що підтверджує: більш високу точність і інформативність, а отже ефективність дослідження. Джерела інформації, які слід взяти до уваги: 1. Zeleny A., Ko zak J. Action of acetone on the tonic muscle of the frog // Nature.-1958. - V. 181, № 4619. - P. 13401341. 2. Инструкция по медицинскому применению препарата цисап (cisap). Регистрационный номер - Цисап таблетки - № 3422 от 26.06.98г. Цисап – ампулы № 3258 от 03.06.98г. Торговое название - Цисап. Международное запатентованное - Цизаприд- АО ХФЗ «Здравле» Лесковац, Влайкова 199, СР Югославия.