Спосіб експрес-діагностики дисбактеріозу ротової порожнини

Заявляється винахід, який відноситься до медицини, а саме до мікробіологічних методів дослідження, і може бути використаний для оцінки ступеня дисбактеріозу ротової порожнини. Існує спосіб, який грунтується на кількісному і якісному визначенні складу мікроорганізмів, що виросли на поживних середовищах (Микробиологическая диагностика дисбактериозов: Методические рекомендации - Киев, 1986. - С.19-20.). Досліджуваний матеріал (слина, змиви з слизових оболонок) засівається в різних розведеннях на стерильні агарові середовища в чашках Петрі, які витримують в термостаті при 37° протягом певного часу, після чого підраховується кількість колоній, що виросли, і вивчаються їх властивості (гемоліз на кров'яному агарі, розщеплення лактози на середовищі Ендо тощо). Спосіб трудомісткий, вимагає великої затрати часу (3-5 діб і більше), економічно не вигідний. Для його здійснення потрібна спеціальна апаратура (стерилізатори, термостати), поживні середовища, лабораторний посуд, що можливе тільки в умовах бактеріологічної лабораторії. Спосіб не дає можливості охопити одномоментно багато людей, тому мало придатний при масових обстеженнях. Крім того, кількісний склад мікроорганізмів у слині і змивах зі слизових оболонок порожнини рота значною мірою залежить від гігієни рота, часу забору матеріалу від моменту чи щення зубів, полоскання рота, приймання їжі тощо, що зумовлює розбіжності в трактуванні одержаних результатів. Найближчим за суттю до винаходу, що заявляється, є спосіб, що може бути використаний для діагностики дисбактеріозу ротової порожнини, який грунтується на визначенні кількісного і якісного складу колоній на мазкахвідбитках, виготовлених за допомогою предметних скелець, на які попередньо нанесені агарові середовища (Микробиологическая диагностика дисбактериозов: Методические рекомендации - Киев, 1986. - С.18). На поверхню стерильних предметних скелець стерильною піпеткою наносять розплавлені на водяній бані стерильні агарові середовища. Після застигання середовищ предметними скельцями роблять мазки-відбитки з поверхні слизових оболонок і ставлять в термостат ( в умовах вологої камери) при 37° на 24 години, після чого підраховують кількість колоній, що виросли та вивчають їхні властивості. Підрахунок колоній проводиться з усієї площі предметного скла. Наявність і ступінь дисбактеріозу визначається за кількістю колоній і їхнім характером. При застосуванні цього способу не беруться до уваги колонізовані на поверхні слизових оболонок ротової порожнини облігатно-анаеробні бактерії, не здатні рости в аеробних умовах. Спосіб потребує порівняно великої затрати часу (більше однієї доби), спеціальної апаратури, стерильних поживних середовищ, є придатним для виконання тільки в умовах бактеріологічної лабораторії, що обмежує його застосування при масових обстеженнях. В основу винаходу, що заявляється, покладено завдання створити спосіб експрес-діагностики дисбактеріозу ротової порожнини, в якому за рахунок введення нових дій досягається швидкість виконання, економічна вигода (відсутність у потребі спеціальної апаратури, поживних середовищ),можливість здійснення поза межами бактеріологічної лабораторії, врахування всіх колонізованих на поверхні слизової оболонки ротової порожнини мікроорганізмів, підвищення точності та інформативності способу. Суть винаходу полягає в тому, що в способі експрес-діагностики дисбактеріозу ротової порожнини шляхом оцінки ступеня дисбактеріозу за підрахунком кількості колонізованих на поверхні слизової оболонки грампозитивних (Г+) та грамнегативних (Г-) мікроорганізмів і встановлення їхнього співвідношення, готують мазоквідбиток слизової оболонки порожнини рота, фіксують, зафарбовують за методом Грама, підраховують кількість грампозитивних і грамнегативних бактерій та встановлюють їхнє співвідношення (Г+/Г-), а оцінку рівня дисбактеріозу ротової порожнини здійснюють таким чином: при значенні 4 ³ Г + / Г- ³ -2 дисбактеріоз відсутній, при 2 ³ Г + / Г- ³ -1 та 6 ³ Г + / Г- ³ 4 - дисбактеріоз 1 ступеня, при 1 ³ Г + / Г- ³ 0,5 та 8 ³ Г + / Г- ³ 6 дисбактеріоз 2 ступеня, при 0,5 ³ Г + / Г- ³ 8 - дисбактеріоз 3 ступеня. Суттєвими відмінними ознаками винаходу є те, що в способі експрес-діагностики дисбактеріозу ротової порожнини мазки-відбитки готуються за допомогою знежирених, оброблених хромово-сірчаною сумішшю предметних скелець без попередньої стерилізації та нанесення на них агарових середовищ, фіксуються, зафарбовуються за методом Грама, підраховується кількість грампозитивних і грамнегативних мікроорганізмів, а рівень дисбактеріозу оцінюють за їх співвідношенням (Г+/Г-). При значенні 4 ³ Г + / Г- ³ 2 дисбактеріоз відсутній, при 2 ³ Г + / Г- ³ -1 та 6 ³ Г + / Г- ³ 4 - дисбактеріоз 1 ступеня, при 1 ³ Г + / Г- ³ 0,5 та 8 ³ Г + / Г- ³ 6 дисбактеріоз 2 ступеня, при 0,5 ³ Г + / Г- ³ 8 - дисбактеріоз 3 ступеня. Спосіб здійснюється таким чином. Попередньо для звільнення слизової оболонки ротової порожнини від нефіксованих мікроорганізмів проводиться старанне полоскання рота теплою водою, після чого готують мазок-відбиток слизової оболонки (ясна, губи, щоки, піднебіння). Для цього знежирене , оброблене хромово-сірчаною сумішшю (біхромат калію 20г, сірчана кислота 20г, вода до 200мл) предметне скельце з відшліфованими краями тісно притискається до поверхні слизової оболонки на 10-15сек. Свіжевисушений мазок - відбиток фіксується (метанол, етанол, суміш Никифорова) і зафарбовується за методом Грама. У полі зору підраховується кількість грампозитивних і грамнегативних мікроорганізмів і встановлюється їх співвідношення, де в чисельнику кількість грампозитивних, а в знаменнику - кількість грамнегативних мікроорганізмів (Г+/Г-). Рівень дисбактеріозу ротової порожнини оцінюється таким чином: при значенні 4 ³ Г + / Г- ³ 2 дисбактеріоз відсутній, при 2 ³ Г + / Г- ³ -1 та 6 ³ Г + / Г- ³ 4 - дисбактеріоз 1 ступеня, при 1 ³ Г + / Г- ³ 0,5 та 8 ³ Г + / Г- ³ 6 - дисбактеріоз 2 ступеня, при 0,5 ³ Г + / Г- ³ 8 дисбактеріоз 3 ступеня. Застосування способу дає можливість досягнути те хнічного результату винаходу: прискореної діагностики, врахування всіх колонізованих на поверхні слизової оболонки мікроорганізмів, підвищення точності та інформативності способу. Спосіб простий у виконанні, економічно вигідний, дозволяє протягом короткого часу провести аналіз великої кількості мазків-відбитків, доступний для виконання у клінічних, наукових і навчальних лабораторіях, де є мікроскопи з імерсійною системою і можливе фарбування мікропрепаратів. Спосіб може бути використаний як один з методів діагностики інфекційно-запальних процесів у ротовій порожнині, при оцінці стану місцевого імунітету ротової порожнини, виборі тактики лікування і профілактики та контролю за їх ефективністю в стоматології, терапії, педіатрії, онкології, клінічній імунології, а також при екоімунологічному моніторингу.