Спосіб поєднаного виявлення гемомікроциркуляторного русла та паренхіми тканин шляхом ін’єкції судин та фарбування гематоксиліном і еозином

Спосіб поєднаного виявлення гемомікроциркуляторного русла та паренхіми тканин, який полягає у ін'єктуванні кровоносних судин із наступним зафарбовуванням виготовлених зрізів тканин, який відрізняється тим, що проводиться тонка ін'єкція кровоносних судин хлороформною сумішшю дрібнодисперсної фарби "Парижская синяя" з наступним зафарбовуванням виготовлених зрізів тканин універсальними барвниками гематоксиліном і еозином, що дозволяє на гістологічному препараті вивчати топографію і архітектоніку гемомікроциркуляторного русла, клітинну будову досліджуваної тканини та їх співвідношення. Винахід відноситься до експериментальної медицини, а саме до гістоморфологічних методів досліджень і може бути використаний для дослідження паренхімо-стромально-вазальних співвідношень в різноманітних органах. Створення зазначеного винаходу зумовлене тим, що на сьогоднішній день в сучасній морфології практично відсутні методики, при використанні яких в достатній мірі можна б було вивчати гістота ангіоструктуру одночасно. Використання даної методики дозволить не тільки паралельно вивчати будову гемомікроциркуляторного русла (ГМЦР) та структурних компонентів органів і тканин, а й паренхімо-стромально-вазальні співвідношення. Прототипами до заявленого винаходу є широковідома методика зафарбування тканин гематоксиліном і еозином (Э. Пирс. Гистохимия // М: Издательство иностранной литературы. - 1962. - с.944), а також метод ін'єкції кровоносного русла (Мельман Е.П., Долишний Н.В. Метод сочетанного выявления нервных волокон и кровеносных сосудов в нервных проводниках // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1977. - №4. - С.102-105). Недоліками обох методик є окреме забарвлення або тканини, або ГМЦР, що не дає можливості вивчення їх співвідношень і зон кровопостачання. Було поставлене завдання створити методику, за допомогою якої стало би можливим одночасне виявлення ГМЦР та гістоструктури тканин і зміну їх співвідношення при різноманітних впливах. Для виконання даного завдання пропонуються «Спосіб поєднаного виявлення гемомікроциркуляторного русла та паренхіми тканин шляхом ін'єкції судин та фарбування гематоксилін-еозином, суть якого полягає у тому, що обробка матеріалу проходить у два етапи: перший - посмертна ін'єкція судин піддослідної тварини; другий - фарбування зрізу гематоксиліном і еозином. Принцип дії та хід процесу Після умертвіння піддослідної тварини проводять тонку ін'єкцію судин. Даний метод можна застосовувати не пізніше 6 годин після смерті тварини через грудну аорту чи інші магістральні судини ізольованих органів. Ін'єкування проводиться хлороформною суспензією художньої дрібнодисперсної ескізної фарби «Парижской синей» в співвідношенні 5-10г на 100г розчину. Суспензія вводиться в кров'яне русло протягом 10-15хв. за допомогою шприца одноразово під тиском. Ін'єкцію (19) UA (11) 91377 (13) C2 (21) a200804032 (22) 31.03.2008 (24) 26.07.2010 (46) 26.07.2010, Бюл.№ 14, 2010 р. (72) ЛЕВИЦЬКИЙ ВОЛОДИМИР АНДРІЙОВИЧ, ПОПАДИНЕЦЬ ОКСАНА ГРИГОРІВНА, КНЯЗЕВИЧ-ЧОРНА ТЕТЯНА ВОЛОДИМИРІВНА, КОЛІНКО ЯРОСЛАВ ОРЕСТОВИЧ (73) ЛЕВИЦЬКИЙ ВОЛОДИМИР АНДРІЙОВИЧ, ПОПАДИНЕЦЬ ОКСАНА ГРИГОРІВНА, КНЯЗЕВИЧ-ЧОРНА ТЕТЯНА ВОЛОДИМИРІВНА, КОЛІНКО ЯРОСЛАВ ОРЕСТОВИЧ (56) RU 2319132 C2 10.03.2008 UA a200501741 15.06.2005 Мельман Е.П., Долишний Н.В. Метод сочетанного выявления нервных волокон и кровеносных сосу 3 91377 зупиняють при інтенсивному посинінні шкіряних покривів та слизових оболонок. Труп тварини накривають зволоженою марлею і залишають на добу для того, щоб дати можливість хлороформу випаруватися. Матеріал фіксують шляхом занурення його в 12% розчин нейтрального формаліну не менше як на 3-5 діб. Після фіксації матеріал проводять до парафінових блоків по загальноприйнятій методи Комп’ютерна верстка М. Ломалова 4 ці. На мікротомі отримують зрізи 5-8мкм, з наступним зафарбуванням їх гематоксиліном і еозином. На гістологічних зрізах досліджуваної тканини чітко контуруються фіолетові ядра клітин, рожева цитоплазма та яскраво-сині контури ГМЦР. Таким чином, запропонований спосіб дозволяє не тільки одночасно вивчати структуру паренхіми органа та його ГМЦР, але й паренхіматозностромально-вазальне співвідношення і зміну його під впливом дії різних пошкоджуючих факторів. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601