Імуногенна композиція

1. Імуногенна композиція, що містить капсульні полісахариди N. mеnіngіtіdіs з принаймні одної з серогруп А, С, W135 та Y, яка містить капсульний полісахарид з серогрупи С N. mеnіngіtіdіs, що має середній розмір більше 100 кДа, кон'югований з білком-носієм з утворенням кон'югату капсульного полісахариду N. mеnіngіtіdіs, де середній розмір кожного полісахариду N. mеnіngіtіdіs є вище 50 кДа. 2. Імуногенна композиція за п. 1, яка містить капсульні полісахариди N. mеnіngіtіdіs з принаймні одної з серогруп А, С, W135 та Y, кон'юговані з 2 (19) 1 3 95075 4 кДа, або 90-160 кДа, або 100-150 кДа, або 110-145 кДа, або 120-140 кДа. 13. Імуногенна композиція за будь-яким з пп. 1-12, яка містить капсульний полісахарид МеnW, який має середній розмір вище 50 кДа, 75 кДа, 100 кДа або між 60-190 кДа, або 70-180 кДа, або 80-170 кДа, або 90-160 кДа, або 100-150 кДа, 140-180 кДа, 150-170 кДа, або 110-140 кДа. 14. Імуногенна композиція за будь-яким з попередніх пунктів, де кожний капсульний полісахарид N. mеnіngіtіdіs є кон'югованим з білком-носієм, незалежно вибраним з групи, яка складається з нижченаведеного: правцевий анатоксин, дифтерійний анатоксин, СRМ197, фрагмент С від правцевого анатоксину та білку D. 15. Імуногенна композиція за будь-яким з попередніх пунктів, де кожний капсульний полісахарид N. mеnіngіtіdіs є кон'югованим з тим же самим білкомносієм, вибраним з групи, яка складається з нижченаведеного: правцевий анатоксин, дифтерійний анатоксин, СRМ197, фрагмент С від правцевого анатоксину та білок D. 16. Імуногенна композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка крім того містить капсульний сахарид Н. іnfluеnzае b, кон'югований з білкомносієм. 17. Імуногенна композиція за п. 16, де капсульний сахарид Н. іnfluеnzае b є кон’югованим з білкомносієм, вибраним з групи, яка складається з нижченаведеного: правцевий анатоксин, дифтерійний анатоксин, СRМ197, фрагмент С від правцевого анатоксину та білок D. 18. Імуногенна композиція за будь-яким з пп. 1617, яка містить кон'югат сахариду Ніb та принаймні два додаткові кон'югати бактеріальних сахаридів, де Ніb-кон'югат є наявним у нижчій дозі, ніж середня доза принаймні двох додаткових кон’югатів бактеріальних сахаридів. 19. Імуногенна композиція за п. 18, де Ніb-кон'югат є наявним у нижчій дозі, ніж доза кожного принаймні з двох додаткових кон'югатів бактеріальних сахаридів. 20. Імуногенна композиція за будь-яким з пп. 1619, де у Ніb-кон'югаті є застосованими той же самий білок-носій та два або більше принаймні з двох додаткових кон'югатів бактеріальних сахаридів. 21. Імуногенна композиція за будь-яким з пп. 1-20, яка містить зовнішньомембранний везикулярний препарат або капсульний сахарид серогрупи В N. mеnіngіtіdіs. 22. Вакцина, яка містить імуногенну композицію за будь-яким з пп. 1-21 та фармацевтично прийнятний носій. 23. Комплект вакцини для сумісного або послідовного призначення, який містить дві полівалентні імуногенні композиції для надання хазяїну захисту проти захворювань, викликаних Воrdеtеllа реrtussіs, Сlоstrіdіum tеtаnі, Соrуnеbасtеrіum dірhthеrіае, Наеmорhіlus іnfluеnzае та Nеіssеrіа mеnіngіtіdіs, вказаний комплект містить першу ємність, яка містить: правцевий анатоксин (ТТ), дифтерійний анатоксин (DТ), та цілоклітинні або безклітинні коклюшні компоненти, та другу ємність, яка містить: імуногенну композицію за будь-яким з пп. 1-21. 24. Застосування імуногенної композиції за будьяким з пп. 1-21 у виробництві медикаменту для лікування або запобігання захворювання, викликаного інфекцією Nеіssеrіа mеnіngіtіdіs. Заявлений винахід стосується імуногенних композицій, які містять капсульні полісахариди N. meningitidis, кон'юговані з білком-носієм. Він крім того стосується вакцин та комплектів вакцин, які містять кон'югати полісахаридів N. meningitidis, способів створення імуногенних композицій та вакцин та застосування вакцин та імуногенних композицій винаходу у терапії. Він також стосується способів імунізації проти інфекції Neisserial, застосовуючи кон'югати полісахаридів N. meningitidis та застосування кон'югатів полісахаридів N. meningitidis у виробництві медикаменту. Neisseria meningitidis є грам-негативним патогеном людини, котрий викликає бактеріальний менінгіт. На основі капсульних полісахаридів організмів ідентифіковані дванадцять серогруп N. meningitidis (А, В, С, Н, І, K, L, 29Е, W135, Χ, Υ та Ζ). Серогрупа А (MenА) є найбільш звичайним чинником епідемічних хвороб в Африці південніше Сахари. Серогрупи В та С є відповідними за більшість випадків у країнах, що розвиваються, із рештою випадків, викликаних W135 та Υ). Імуногенні композиції, які містять сахариди N. meningitidis, кон'юговані з білками-носіями, є відомими у попередньому рівні техніки. Наприклад, WO 02/58737 розкриває вакцину, яка містить очи щені капсульні полісахариди з серогруп N. meningitidis A, C, W135 та Y, кон'юговані з білкомносієм. Однак, ця заявка повідомляє про те, що екстраговані капсульні полісахариди N. meningitidis слід було б деполімеризувати нагріванням у розчині гідроген пероксиду перед кон'югацією. WO 03/07985 розкриває вакцини з кон'югатами, які містять сахарид N. meningitidis, вибраний з серогруп А, С, W135 та Y. Менінгококові капсульні полісахариди екстрагують та тоді гідролізують так, щоб внаслідок відбору олігосахаридів, похідні від капсульних полісахаридів були застосованими для кон'югації з білком-носієм. WO 04/103400 також розкриває багатовалентний похідний від менінгококу кон'югат полісахаридбілок, що містить капсульні полісахариди, похідні від серогруп N. meningitidis A, C, W135 та Y. Ця заявка повідомляє про те, що замість застосування великого природного капсульного полісахариду застосування менінгококових полісахаридів меншого розміру є кращим. Це свідчить, що капсульні полісахариди є частково деполімеризованими при застосуванні м'яких умов окиснення з отриманням середнього розміру менше, ніж 100000 Да, переважно 12000-25000 Да. 5 Залишається необхідність у розробці поліпшеної вакцини з кон'югатом проти Neisseria meningitidis. Заявлений винахід стосується забезпечення вакцини з кон'югатом менінгококового полісахариду, у котрій розмір полісахаридів є більшим ніж той, про який повідомлено у літературі. Осереддя попереднього рівня техніки полягало у застосуванні олігосахаридів для полегшення вироблення кон'югату. Винахідниками виявлено, що застосуванням природних кон'югатів або кон'югатів полісахаридів зі слабко зміненим розміром можуть бути реалізованими одна або більше з наступних переваг: 1) кон'югат, що має високу імуногенність, котра є здатною проходити через фільтр; 2) імунна пам'ять може бути підсиленою (як у прикладі три); 3) зміна співвідношення полісахариду до білку у кон'югаті так, щоб масспіввідношення полісахариду до білку у кон'югаті могло б бути збільшеним (це може призводити до зменшення ефекту пригнічення носієм); 4) імуногенні кон'югати, схильні до гідролізу (як-то кон'югати MenА) можуть бути стабілізованими застосуванням більших полісахаридів для кон'югації. Застосування більших полісахаридів може призводити до більшого перехресного зв'язування з носієм кон'югату та тому менше відщеплення вільного сахариду від кон'югату. Вакцини з кон'югатами, описані у попередньому рівні техніки, мають тенденцію до деполімеризації полісахаридів перед кон'югацією для поліпшення кон'югації. Заявлений винахід є спрямованим на відмінну стратегію та несподівано показує, що менінгококові вакцини з кон'югатами, що зберігають більший розмір полісахариду, забезпечують гарну імунну реакцію проти менінгококової хвороби. Відповідно, згідно з наступним аспектом заявленого винаходу запропоновано імуногенну композицію, яка містить капсульні полісахариди N. meningitidis з принаймні одної, двох, трьох або чотирьох з серогруп А, С, W та Y, кон'юговані з білком-носієм, де середній розмір кожного полісахариду N. meningitidis є вище 50 кДа, 75 кДа, 100кДа, 110 кДа, 120 кДа або 130 кДа. Згідно з наступним аспектом заявленого винаходу запропоновано вакцини, які містять імуногенну композицію винаходу та фармацевтично прийнятний носій. Згідно з наступним аспектом заявленого винаходу запропоновано комплект вакцин для сумісного або послідовного призначення, який містить дві багатовалентні імуногенні композиції для надання хазяїну захисту проти хвороби, викликаної Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebactehum diphtheriae, Haemophilus influenzae та Neisseria meningitidis, вказаний комплект містить першу ємність, яка містить: правцевий анатоксин (ТТ), дифтерійний анатоксин (DT), та цілоклітинні або безклітинні коклюшні компоненти та другу ємність, яка містить: капсульні полісахариди N. meningitidis з принаймні з одної, двох, трьох або чотирьох з серогруп А, С, W та Y, кон'юговані з білком-носієм, де середній розмір кожного полісахариду або кожного 95075 6 з полісахаридів N. meningitidis є вище 50 кДа, 75кДа, 100 кДа, 110 кДа, 120кДа або 130 кДа. Згідно з наступним аспектом винаходу запропоновано спосіб створення імуногенної композиції або вакцини винаходу, який полягає у змішуванні капсульних полісахаридів N. meningitidis з принаймні одної, двох, трьох або чотирьох з серогруп А, С, W та Y, кон'юговані з білком-носієм, необов'язково із фармацевтично прийнятним наповнювачем, де середній розмір кожного полісахариду або кожного з полісахаридів N. meningitidis є вище 50кДа, 75 кДа, 100 кДа, 110 кДа, 120 кДа або 130кДа. Згідно з наступним аспектом заявленого винаходу запропоновано спосіб імунізації людинихазяїна проти хвороби, викликаної Neisseria meningitidis, який полягає у призначенні хазяїну імунозахисної дози імуногенної композиції або вакцини винаходу. Згідно з наступним аспектом заявленого винаходу запропоновано імуногенну композицію винаходу для застосування у лікуванні або попередженні хвороби, викликаної Neisseria meningitidis. Згідно з наступним аспектом заявленого винаходу запропоновано застосування імуногенної композиції або вакцини винаходу у виробництві медикаменту для лікування або попередження хвороб, викликаних Neisseria meningitidis. Опис фігур Фіг.1-А - Стовпчикова діаграма, яка показує реакції СГК в аналізі ELISA проти MenY. ENYTT012 є кон'югатом MenY-TT, отриманим з природного полісахариду MenY. ENYTT014 є кон'югатом MenY-TT, отриманим з мікрофлюїдизованого полісахариду MenY, котрий було піддано 40 циклам мікрофлюїдизації. ENYTT015bis є кон'югатом MenY-TT, отриманим з мікрофлюїдизованого полісахариду MenY, котрий було піддано 20 циклам мікрофлюїдизації. - В - Стовпчикова діаграма, яка показує реакції СГТ в аналізі SBA проти MenY. ENYTT012 є кон'югатом MenY-TT, отриманим з природного полісахариду MenY. ENYTT014 є кон'югатом MenY-TT, отриманим з мікрофлюїдизованого полісахариду MenY, котрий було піддано 40 циклам мікрофлюїдизації. ENYTT015bis є кон'югатом MenY-TT, отриманим з мікрофлюїдизованого полісахариду MenY, котрий було піддано 20 циклам мікрофлюїдизації. Деталізований опис Імуногенна композиція винаходу містить капсульні полісахариди N. meningitidis з принаймні одної, двох, трьох або чотирьох з серогруп А, С, W та Y, кон'юговані з білком-носієм, де середній розмір (середньозважена молекулярна маса; Mw) принаймні одного, двох, трьох або чотирьох, або кожного полісахариду N. meningitidis є вище 50кДа, 60 кДа, 75 кДа, 100 кДа, 110 кДа, 120 кДа або 130 кДа. Згідно з незалежним аспектом винаходу, імуногенна композиція винаходу містить капсульні полісахариди N. meningitidis з принаймні одної, двох, трьох або чотирьох з серогруп А, С, W та Y, кон'юговані з білком-носієм, де принаймні один, два, три або чотири полісахариди, або кожний по 7 лісахарид N. meningitidis є будь-яким природним полісахаридом або є зменшеними за розміром аж до 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 разів відносно середньозваженої молекулярної маси природного полісахариду. Для мети винаходу, "природний полісахарид" стосується полісахариду, який не було піддано обробці, мета котрої полягає у зменшенні розміру полісахариду. Полісахарид може стати слабко зменшеним за розміром протягом звичайної процедури очистки. Такий полісахарид все ще є природним. Тільки якщо полісахариди було піддано обробці для зменшення розміру, такий полісахарид не слід розглядати як природний. Для мети винаходу, "зменшений за розміром аж до х2 разів" означає, що полісахарид є об'єктом обробки, призначеної для зменшення розміру полісахариду, але для збереження розміру, більшого, ніж половина розміру природного полісахариду. х3, 4, тощо, слід інтерпретувати таким же чином, тобто полісахарид є об'єктом обробки, призначеної для зменшення розміру полісахариду, але для збереження розміру, більшого, ніж третина, чверть, тощо, розміру природного полісахариду відповідно. Згідно з аспектом винаходу, імуногенна композиція винаходу містить капсульні полісахариди N. meningitidis з принаймні одної, двох, трьох або чотирьох з серогруп А, С, W та Y, кон'юговані з білком-носієм, де принаймні один, два, три або чотири полісахариди, або кожний полісахарид N. meningitidis є природним полісахаридом. Згідно з аспектом винаходу, імуногенна композиція винаходу містить капсульні полісахариди N. meningitidis з принаймні одної, двох, трьох або чотирьох з серогруп А, С, W та Y, кон'юговані з білком-носієм, де принаймні один, два, три або чотири полісахариди, або кожний полісахарид N. meningitidis є зменшеними за розміром аж до х1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 разів. Імуногенні композиції винаходу необов'язково містять такі кон'югати: капсульний полісахарид серогрупи С N. meningitidis (MenC), капсульний полісахарид серогрупи А N. meningitidis (MenA), капсульний полісахарид серогрупи W135N. meningitidis (MenW), капсульний полісахарид серогрупи Υ N. meningitidis (MenY), капсульні полісахариди серогруп С та Υ (MenCY), капсульні полісахариди серогруп С та А (MenАС), капсульні полісахариди серогруп С та W (MenCW), капсульні полісахариди серогруп А та Υ (MenAY), капсульні полісахариди серогруп А та W (MenAW), капсульні полісахариди серогруп W та Υ (MenWY), капсульні полісахариди серогруп А, С та W (MenACW), капсульні полісахариди серогруп А, С та Υ (MenACY); капсульні полісахариди серогруп A, W135 та Υ (MenAWY), капсульні полісахариди серогруп С, W135 та Υ (MenCWY); або капсульні полісахариди серогруп А, С, W135 та Υ (MenACWY). Це є визначенням "одного, двох, трьох або чотирьох", або "принаймні одного з серогруп А, С, W та Y, або кожного полісахариду N. meningitidis, де це тут згадано. У втіленні середній розмір (або молекулярна маса) принаймні одного, двох, трьох або чотирьох, 95075 8 або кожного полісахариду N. meningitidis є 50 кДа 1500 кДа, 50 кДа - 500 кДа, 50 кДа - 300 кДа, 101кДа - 1500 кДа, 101 кДа - 500 кДа, або 101 кДа 300 кДа, як визначено за MALLS. У втіленні MenА полісахарид, де він є наявним, має молекулярну масу 50-500 кДа, 50-100кДа, 100-500 кДа, 55-90 кДа, 60-70 кДа або 70-80 кДа або 60-80 кДа, як визначено за MALLS. У втіленні MenС полісахарид, де він є наявним, має молекулярну масу 100-200 кДа, 50100кДа, 100-150 кДа, 101-130 кДа, 150-210 кДа або 180-210 кДа, як визначено за MALLS. У втіленні MenY полісахарид, де він є наявним, має молекулярну масу 60-190 кДа, 70-180кДа, 80-170 кДа, 90-160 кДа, 100-150 кДа або 110140кДа, 50-100 кДа, 100-140 кДа, 140-170 кДа або 150-160 кДа, як визначено за MALLS. У втіленні MenW полісахарид, де він є наявним, має молекулярну масу 60-190 кДа, 70-180кДа, 80-170 кДа, 90-160 кДа, 100-150 кДа, 110-140 кДа, 50-100 кДа або 120-140 кДа, як визначено за MALLS. Молекулярна маса або середня молекулярна маса полісахариду тут стосується середньозваженої молекулярної маси (Mw) полісахариду, виміряної перед кон'югацією, та є виміряною за допомогою MALLS. Способи MALLS є добре відомими у попередньому рівні техніки та є звичайно здійснюваними, як описано у прикладі 2. Для MALLS-аналізу менінгококових сахаридів, дві колонки (TSKG6000 та 5000PWxl TOSOH Bioscience) можуть бути застосованими у комбінації та сахариди елюють у воді. Сахариди виявляють, застосовуючи детектор розсіюваного світла (наприклад, Wyatt Dawn DSP оснащений аргоновим лазером 10 мВт при 488 нм) та інтерференційний рефрактометр (наприклад, W yatt Otilab DSP оснащений Р100 Cell та червоним фільтром при 498 нм). У втіленні полісахариди N. meningitidis є природними полісахаридами або природними полісахаридами, котрі зменшено у розмірі протягом звичайного процесу екстракції. У втіленні полісахариди N. meningitidis є зменшеними за розміром механічним розщепленням, наприклад, мікрофлюїдизацією або обробкою ультразвуком. Мікрофлюїдизація та обробка ультразвуком мають перевагу у тому, що зменшують розмір більших природних полісахаридів достатньо для того, щоб забезпечити здатність кон'югату проходити через фільтр. Зменшення розміру відбувається не більше, ніж у 20, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 або 1,5 разів. У втіленні імуногенна композиція винаходу містить кон'югати N. meningitidis, які є створеними з суміші природних полісахаридів та полісахаридів, що є зменшеними за розміром не більше, ніж у 20 разів. Наприклад, полісахариди від MenС та/або MenА є природними. Наприклад, полісахариди від MenY та/або MenW є зменшеними за розміром не більше, ніж у 20, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 або х1,5 разів. Наприклад, імуногенна композиція містить кон'югат, створений з MenY та/або MenW та/або MenС та/або MenА, котрий є зменшеним за розміром тоді не більше, ніж у 20, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 або 1,5 9 разів та/або є мікрофлюїдизованими. Наприклад, імуногенна композиція містить кон'югат, створений з природних MenА та/або MenС та/або MenW та/або MenY. Наприклад, імуногенна композиція винаходу містить кон'югат, створений з природного MenС. Наприклад, імуногенна композиція винаходу містить кон'югат, створений з природних MenС та MenА, котрий є зменшеним за розміром не більше, ніж у 20, 10, 8, б, 5, 4, 3, 2 або х1,5 разів та/або є мікрофлюїдизованим. Наприклад, імуногенна композиція винаходу містить кон'югат, створений з природних MenС та MenY, котрий є зменшеним за розміром не більше, ніж у 20, 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 або х1,5 разів та/або є мікрофлюїдизованим. У втіленні полідисперсність полісахариду є 11,5, 1-1,3, 1-1,2, 1-1,1 або 1-1,05, та після кон'югації з білком-носієм, полідисперсність кон'югатів є 1,0-2,5, 1,0-2,0. 1,0-1,5, 1,0-1,2, 1,5-2,5, 1,7-2,2 або 1,5-2,0. Усі виміри полідисперсності отримано за допомогою MALLS. Полісахариди є необов'язково зменшеними за розміром аж до 1,5, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 або 20 разів відносно розміру полісахариду, виділеного з бактерій. У втіленні імуногенні композиції винаходу також містять антиген з серогрупи В N. meningitidis. Антигеном необов'язково є капсульний полісахарид з серогрупи В N. meningitidis (MenB) або зменшений за розміром полісахарид або олігосахарид, похідний звідти. Антигеном необов'язково є зовнішньомембранний везикулярний препарат з серогрупи В N. meningitidis, як описано у ЕР301992, WO 01/09350, WO 04/14417, WO 04/14418 та WO 04/14419. У втіленні імуногенна композиція винаходу містить крім того капсульний сахарид Н. influenzae b, кон'югований з білком-носієм. Полісахарид N. meningitidis(s) (та необов'язково капсульний сахарид Hib), уведений у фармацевтичні композиції винаходу, є кон'югованим з білком-носієм, як-то правцевий анатоксин, фрагмент С правцевого анатоксину, нетоксичні мутанти правцевого токсину, дифтерійний анатоксин, CRM197, інші нетоксичні мутанти дифтерійного токсину [як-то CRM176, CRM 197, CRM228, CRM 45 (Uchida et al J. Biol. Chem. 218; 3838-3844, 1973); CRM 9, CRM 45, CRM102, CRM 103 та CRM107 та інші мутації, описані Nicholls та Youle у Genetically Engineered Toxins, Ed: Frankel, Maecel Dekker Inc, 1992; делеція або мутація Glu-148 до Asp, Gin або Ser та/або Ala 158 до Gly та інші мутації, розкриті у US 4709017 або US 4950740; мутація принаймні одного або більше залишків Lys 516, Lys 526, Phe 530 та/або Lys 534 та інші мутації, розкриті у US 5917017 або US 6455673; або фрагмент, розкритий у US 5843711], пневмококовий пневмолізин, ОМРС (менінгококовий зовнішньомембранний білок - звичайно екстрагований з серогрупи В N. meningitidis - ЕР0372501), синтетичні пептиди (ЕР0378881, ЕР0427347), білки теплового шоку (WO 93/17712, WO 94/03208), коклюшні білки (WO 98/58668, ЕР0471177), цитокіни, лімфокіни, фактори або гормони росту (WO 91/01146), штучні білки, що містять складні епітопи CD4+ Т 95075 10 клітин людини від різних похідних від патогенів антигенів (Falugi et al (2001) Eur J Immunol 31; 3816-3824), як-то білок N19 (Baraldoi et al (2004) Infect Immun 72; 4884-7) пневмококовий поверхневий білок PspA (WO 02/091998) пневмолізин (Kuo et al (1995) Infect Immun 63; 2706-13), білки поглинання заліза (WO 01/72337), токсин А або В С. difficile (WO 00/61761) або Білок D (EP594610 та WO 00/56360). У втіленні імуногенна композиція винаходу містить однаковий білок-носій (незалежно) у принаймні двох, трьох, чотирьох або кожному з полісахаридів N. meningitidis. У втіленні, де є наявним Hib, Hib може бути кон'югованим з тим же білкомносієм, як принаймні один, два, три, чотири або кожний з полісахаридів N. meningitidis. Наприклад, 1, 2, 3 або 4 полісахаридів N. meningitidis є незалежно кон'югованими з правцевим анатоксином зі створенням 1, 2, 3 або 4 кон'югатів. У втіленні одиничний білок-носій може нести більше, ніж один сахаридний антиген (WO 04/083251). Наприклад, одиничний білок-носій міг би бути кон'югованим з MenА та MenС; MenА та MenW; MenА та MenY; MenC та MenW; MenC та MenY; MenW та MenY; MenА, MenC та MenW; MenА, MenC та MenY; MenА, MenW та MenY; MenC, MenW та MenY; MenА, MenC, MenW та MenY; Hib та MenА; Hib та MenC; Hib та MenW; або Hib та MenY. У втіленні імуногенна композиція винаходу містить полісахарид N. meningitidis, кон'югований з білком-носієм, вибраним з групи, яка складається з нижченаведеного: правцевий анатоксин, дифтерійний анатоксин, CRM197, фрагмент С від правцевого анатоксину та білок D. У втіленні імуногенна композиція винаходу містить сахарид Hib, кон'югований з білком-носієм, вибраним з групи, яка складається з нижченаведеного: правцевий анатоксин, дифтерійний анатоксин, CRM197, фрагмент С від правцевого анатоксину та білок D. Імуногенна композиція винаходу необов'язково містить принаймні один менінгококовий сахаридний кон'югат (наприклад, MenA; MenC; MenW; MenY; MenA та MenC; MenA та MenW; MenA та MenY; MenC та MenW; MenC та MenY; MenW та MenY; MenA, MenC та MenW; MenA, MenC та MenY; MenA, MenW та MenY; MenC, MenW та MenY або MenA, MenC, MenW та MenY), що має співвідношення Men-сахариду до білку-носія між 1:5 та 5:1, між 1:2 та 5:1, між 1:0,5 та 1:2,5 або між 1:1,25 та 1:2,5 (співвідношення за масою). Імуногенна композиція винаходу необов'язково містить сахаридний кон'югат Hib, що має співвідношення Hib до білку-носія між 1:5 та 5:1; 1:2 та 2:1; 1:1 та 1:4; 1:2 та 1:3,5; або приблизно або точно 1:2,5 або 1:3 (співвідношення за масою). Термін 'приблизно' означає 10% встановленого співвідношення. Співвідношення сахариду до білку-носія (співвідношення за масою) у кон'югаті може бути визначеним, застосовуючи стерилізований кон'югат. Кількість білку визначають, застосовуючи випробування Лоурі (наприклад, Lowry et al (1951) J. Biol. Chem. 193, 265-275 або Peterson et al, 11 Analytical Biochemistry 100, 201-220 (1979)) та кількість сахариду визначають, застосовуючи ICP-OES (індуктивно сполучена плазмово-оптична емісійна спектроскопія) для MenA, DMAP-випробування для MenC та Резорцином-випробування для MenW та MenY (Monsigny et al (1988) Anal. Biochem. 175, 525-530). У втіленні імуногенної композиції винаходу полісахарид N. meningitidis) та/або сахарид Hib є кон'югованими з білком-носієм через лінкер, наприклад, афункціональний лінкер. Лінкер необов'язково є гетеробіфункціональним або гомобіфункціональним, що має, наприклад, реакційну аміногруп та реакційну карбоксильну групу, дві реакційні аміногрупи або дві реакційні карбоксильні групи. Лінкер має, наприклад, число атомів карбону між 4 та 20, 4 та 12, 5 та 10. Можливим лінкером є ADH. Інші лінкери охоплюють Впропіонамідогрупу (WO 00/10599), нітрофенілетиламін (Gever et al (1979) Med. Microbiol. Immunol. 165; 171-288), галогеналкіл-галогеніди (US4057685), глікозидний зв'язок (US4673574, US4808700), гексан-діамін та 6-амінокапронову кислоту (US4459286). Кон'югати полісахаридів, наявні в імуногенних композиціях винаходу, можуть бути отриманими будь-якими відомими способами сполучення. Процес кон'югації може залежати від активації сахариду 1-ціано-4-диметиламіно піридиній тетрафлуорборатом (CDAP) для утворення ціанатного естеру. Активований сахарид може, таким чином, бути сполученим безпосередньо або через спейсерну (лінкерну) групу з аміногрупою на білку-носії. Наприклад, спейсерна група могла б бути цистаміновою або цистеаміновою для отримання тіолатованого полісахариду, котрий міг би бути сполученим з носієм через тіоетерний зв'язок, отриманий після реакції з активованим малеїнімідом білком-носієм (наприклад, застосовуючи GMBS) або голоацетилованим білком-носієм (наприклад, застосовуючи йодацетимід або Nсукциніміділ бромацетатбромацетат). Необов'язково, ціанатний естер (необов'язково створений за допомогою CDAP-хімії) є сполученим з гександіаміном або ADH, а аміно-дериватизований сахарид є кон'югованим з білком-носієм, застосовуючи карбодіімідну хімію (наприклад, EDAC або EDC). Такі кон'югати є описаними в опублікованій заявці РСТ WO 93/15760 Uniformed Services University та WO 95/08348 і WO 96/29094. Інші придатні способи застосування карбіїнідів, гідразидів, активних естерів, норборану, пнітробензойної кислоти, N-гідроксисукциніміду, SNHS, EDC, TSTU. Багато їх є описаними у WO 98/42721. Кон'югація може залучати карбонільний лінкер, котрий може бути утвореним реакцією вільної гідроксильної групи сахариду з GDI (Bethell et al J. Biol. Chem. 1979, 254; 2572-4, Hearn et al J. Chromatogr. 1981. 218; 509-18) з наступною реакцією з білком для утворення карбаматного зв'язку. Це може охоплювати зменшення аномерного кінця до первинної гідроксильної групи, необов'язковий захист/зняття захисту з первинної гідроксильної групи, реакції первинної гідроксильної групи з CDI для утворення CDI-карбаматної проміжної сполуки 95075 12 та сполучення CDI карбаматної проміжної сполуки з аміногрупою з на білку. Кон'югати можуть також бути отриманими способами безпосереднього відновного амінування, як описано у US 4365170 (Jennings) та US 4673574 (Anderson). Інші способи є описаними у ЕР-0-161188, ЕР-208375 та ЕР-0-477508. Наступний спосіб полягає у сполученні активованого ціаноген-бромідом (або CDAP) сахарину, дериватизованого гідразидами адіпінової кислоти (ADH) з білком-носієм конденсацією з карбодіімідом (Chu С. et al Infect. Immunity, 1983 245 256), наприклад, застосовуючи EDAC. У втіленні гідроксильна група (необов'язково активована гідроксильна група, наприклад, гідроксильна група, активована ціанатним естером) на сахариді є поєднаною з аміногрупою або карбоксильною групою на білку безпосередньо або небезпосередньо (через лінкер). Де лінкер є наявним, гідроксильна група на сахарид необов'язково є поєднаною з аміногрупою на лінкері, наприклад, із застосуванням CDAP-кон'югації. Додаткова аміногрупа у лінкері, наприклад, ADH) може бути кон'югованою з карбоксильною групою на білку, наприклад, застосуванням карбодіімідної хімії, наприклад, застосуванням EDAC. У втіленні Hib або капсульний полісахарид N. meningitidis(s) є кон'югованим з лінкером спершу перед тим, як лінкер кон'югують з білком-носієм. У втіленні сахарид Hib, де він є наявним, є кон'югованим з білком-носієм із застосуванням CNBr, або CDAP, або комбінації CDAP та карбодіімідної хімії (як-то EDAC), або комбінації CNBr та карбодіімідної хімії (як-то EDAC). Необов'язково Hib є кон'югованим, застосовуючи CNBr та карбодіімідну хімію, необов'язково EDAC. Наприклад, CNBr є застосовуваним для об'єднання сахариду та лінкеру, та тоді застосовують карбодіімідну хімію для приєднання лінкеру до білку-носія. У втіленні принаймні один з капсульних полісахаридів N. meningitidis є безпосередньо кон'югованим з білком-носієм; необов'язково сахариди MenW та/або MenY та/або MenС є безпосередньо кон'югованими з білком-носієм. Наприклад, MenW; MenY; MenC; MenW та MenY; MenW та MenC; MenY та MenС; або MenW, MenY та MenС є безпосередньо приєднаними до білку-носія. Необов'язково принаймні один з капсульних полісахаридів N. meningitidis є безпосередньо кон'югованим за допомогою CDAP. Наприклад, MenW; MenY; MenC; MenW та MenY; MenW та MenC; MenY та MenC; або MenW, MenY та MenС є безпосередньо поєднаними з вихідним білком за допомогою CDAP (дивись WO 95/08348 та WO 96/29094). У втіленні усі капсульні полісахариди N. meningitidis є кон'югованими з правцевим анатоксином. Необов'язково співвідношення сахариду MenW та/або Υ до білку-носія є між 1:0,5 та 1:2 (співвідношення за масою) та/або співвідношення сахариду MenС до білку-носія є між 1:0,5 та 1:4 або 1:1,25-1:1,5 або 1:0,5 та 1:1,5 (співвідношення за масою), особливо, де ці сахариди є безпосередньо приєднаними до білку, необов'язково, застосовуючи CDAP. 13 У втіленні принаймні один з капсульних полісахаридів N. meningitidis{s) є кон'югованим з білком-носієм через лінкер, наприклад, біфункціональний лінкер. Лінкер необов'язково є гетеробіфункціональним або гомобіфункціональним, і має, наприклад, реакційну аміногрупу та реакційну карбоксильну групу, 2 реакційні аміногрупи або 2 реакційні карбоксильні групи. Лінкер має, наприклад, між 4 та 20, 4 та 12, 5 та 10 атомів карбону. Можливим лінкером є ADH. У втіленні MenА; MenС; або MenА та MenС є кон'югованим з білком-носієм (наприклад, правцевим анатоксином) через лінкер. У втіленні принаймні один полісахарид N. meningitidis є кон'югованим з вихідним білком через лінкер, застосовуючи CDAP та EDAC. Наприклад, MenА; MenС; або MenА та MenС є кон'югованими з білком через лінкер (наприклад, з двома гідразиногрупами на кінцях, як-то ADH), застосовуючи CDAP та EDAC, як описано вище. Наприклад, CDAP є застосованим для кон'югації сахариду з лінкером, a EDAC є застосованим для кон'югації лінкеру до білку. Необов'язково кон'югація через лінкер призводить до співвідношення полісахариду до білку-носія між 1:0,5 та 1:6; 1:1 та 1:5 або 1:2 та 1:4, для MenА; MenС; або MenА та MenС. У втіленні капсульний полісахарид MenА, де він є наявним, є принаймні частково Оацетилованим так, щоб принаймні 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% або 98% повторюваних ланок були О-ацетилованими у принаймні одному положенні. О-ацетилування є, наприклад, наявним принаймні у положенні О-3 принаймні 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% або 98% повторюваних ланок. У втіленні капсульний полісахарид MenС, де він є наявним, є принаймні частково Оацетилованим так, щоб принаймні 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% або 98% (а2 —>9)поєднаних NeuNAc повторюваних ланок були Оацетилованими у принаймні одному або двох положеннях. О-ацетилування є, наприклад, наявним у положеннях О-7 та/або О-8 принаймні 30%. 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% або 98% повторюваних ланок. У втіленні капсульний полісахарид MenW, де він є наявним, є принаймні частково Оацетилованим так, щоб принаймні 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% або 98% повторюваних ланок були О-ацетилованими у принаймні одному або двох положеннях. О-ацетилування є, наприклад, наявним у положеннях О-7 та/або О-9 принаймні 30%. 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% або 98% повторюваних ланок. У втіленні капсульний полісахарид MenY, де він є наявним, є принаймні частково Оацетилованим так, щоб принаймні 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% або 98% повторюваних ланок були О-ацетилованими у принаймні одному або двох положеннях. О-ацетилування є наявним у положеннях 7 та/або 9 принаймні 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% або 98% повторюваних ланок. Процент О-ацетилування стосується проценту повторюваних ланок, які було піддано О 95075 14 ацетилуванню. Це може бути виміряним у полісахариді поперед кон'югації та/або після кон'югації. У наступному втіленні імуногенна композиція винаходу містить сахаридний кон'югат Hib та принаймні два кон'югати полісахаридів N. meningitidis, де Hib-кон'югат є наявним у нижчій дозі сахариду, ніж середня доза сахариду принаймні двох кон'югатів полісахаридів N. meningitidis. Альтернативно, Hib-кон'югат є наявним у нижчій дозі сахариду, ніж доза сахариду кожного принаймні з двох кон'югатів полісахаридів N. meningitidis. Наприклад, доза кон'югату Hib може бути принаймні на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% або 80% нижчою, ніж середня або найнижча доза сахариду принаймні двох додаткових кон'югатів полісахаридів N. meningitidis. Термін "сахарид" охоплює полісахариди або олігосахариди. Полісахариди є виділеними з бактерій або виділеними з бактерій та деякою мірою зменшеними за розміром відомими способами (дивись, наприклад, ЕР497524 та ЕР497525) та необов'язково мікрофлюїдизацією. Полісахариди можуть бути зменшеними за розміром для зменшення в'язкості у зразках полісахаридів та/або для поліпшення здатності проходження через фільтр для кон'югованих продуктів. Олігосахариди характеризуються як такі, що звичайно є гідролізованими полісахаридами з низьким числом повторюваних ланок (звичайно 5-30 повторюваних ланок). Середню дозу визначають складанням дози усіх додаткових полісахаридів та діленням на число додаткових полісахаридів. Додаткові полісахариди усі є полісахаридами в імуногенній композиції, не враховуючи Hib, та можуть охоплювати капсульні полісахариди N. meningitidis. "Дозою" є кількість імуногенної композиції або вакцини, яка є призначеною для людини. Сахарид Hib є полірибозил-фосфатним (PRP) капсульним полісахаридом Haemophilus influenzae типу b або олігосахаридом, похідним звідти. 'Принаймні два додаткові бактеріальні сахаридні кон'югати' означають принаймні два додаткові бактеріальні сахаридні кон'югати на додаток до Hib-кон'югату. Принаймні два додаткові бактеріальні кон'югати можуть охоплювати капсульні кон'югати полісахаридів N. meningitidis. Імуногенні композиції винаходу можуть містити додаткові сахаридні кон'югати, похідні від одного або більше з Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, групи А Streptococci, групи В Streptococci, S. typhi, Staphylococcus aureus або Staphylococcus epidermidis. У втіленні імуногенна композиція винаходу містить капсульні полісахариди або олігосахариди, похідні з одної або більше серогруп А, С, W135 та Υ Neisseria meningitidis. У наступному втіленні застосовувано капсульні полісахариди або олігосахариди, похідні від Streptococcus pneumoniae. Антигени пневмококового капсульного полісахариду або олігосахариду є необов'язково вибраними з серотипів 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 8, 9N, 9V, 10А, 11А, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23F та 33F (необов'язково з серотипів 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19F та 23F). У наступному втіленні застосовувано капсульні полісахариди або олігосахариди типу 5, типу 15 8 або 336 Staphylococcus aureus. У наступному втіленні застосовувано капсульні полісахариди Staphylococcus epidermidis типу І, типу II або типу III. У наступному втіленні застосовувано Viсахарид (полі або олігосахарид) від S. typhi. У наступному втіленні застосовувано капсульні полісахариди або олігосахариди групи В Streptococcus типу Іа, типу Іс, типу Іі, типу III або типу V. У наступному втіленні застосовувано капсульні полісахариди або олігосахариди групи A Streptococcus, які крім того необов'язково містять принаймні один Мбілок та необов'язково складні типи М-білку. У втіленнях, імуногенна композиція винаходу містить кожний капсульний полісахарид N. meningitidis у дозі між 0,1-20 мкг; 1-10 мкг; 2-10 мкг, 2,5-5 мкг, приблизно або точно 5 мкг; або приблизно або точно 2,5 мкг. У втіленні імуногенна композиція винаходу містить, наприклад, сахаридний кон'югат Hib у дозі сахариду між 0,1 та 9 мкг; 1 та 5 мкг або 2 та 3 мкг або приблизно або точно 2,5 мкг та кожний з кон'югатів полісахаридів N. meningitidis у дозі сахариду між 2 та 20 мкг, 3 та 10 мкг, або між 4 та 7 мкг або приблизно або точно 5 мкг. "Біля" або "приблизно" визначають як у межах 10% більше або менше даної фігури для мети винаходу. У втіленні імуногенна композиція винаходу містить дозу сахариду сахаридного кон'югату Hib, котра є, наприклад, менше, ніж 90%, 80%, 75%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% або 10% середньої дози сахариду принаймні двох, трьох, чотирьох або кожного з кон'югатів полісахаридів N. meningitidis. Доза сахариду Hib складає, наприклад, між 20% та 60%, 30% та 60%, 40% та 60% або приблизно чи точно 50% середньої дози сахариду принаймні двох, трьох, чотирьох або кожного з кон'югатів полісахаридів N. meningitidis. У втіленні імуногенна композиція винаходу містить дозу сахариду сахаридного кон'югату Hib, котра є, наприклад, менше, ніж 90%, 80%, 75%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20% або 10% найнижчої дози сахариду принаймні двох, трьох, чотирьох або кожного з кон'югатів полісахаридів N. meningitidis. Доза сахариду Hib складає, наприклад, між 20% та 60%, 30% та 60%, 40% та 60% або приблизно або точно 50% найнижчої дози сахариду принаймні двох, трьох, чотирьох або кожного з кон'югатів полісахаридів N. meningitidis. У втіленні винаходу, доза сахариду кожних принаймні з двох, трьох, чотирьох або кожного з кон'югатів полісахаридів N. meningitidis необов'язково є однаковою, або приблизно однаковою. Прикладами імуногенних композицій винаходу є композиції, які складаються з нижченаведеного або містять наступне: Hib-кон'югат та MenA-кон'югат та MenCкон'югат, необов'язково у співвідношеннях доз сахаридів 1:2:2, 1:2:1, 1:4:2, 1:6:3, 1:3:3, 1:4:4, 1:5:5, 1:6:6 (співвідношення за масою). Необов'язково, доза сахариду MenА є більшою, ніж доза сахариду MenС. Hib-кон'югат та MenC-кон'югат та MenYкон'югат, необов'язково у співвідношеннях доз сахаридів 1:2:2, 1:2:1, 1:4:2, 1:4:1, 1:8;4, 1:6:3, 95075 16 1:3:3, 1:4:4, 1:5:5, 1:6:6 (співвідношення за масою). Необов'язково, доза сахариду MenС є більшою, ніж доза сахариду MenY. Hib-кон'югат та MenC-кон'югат та MenWкон'югат, необов'язково у співвідношеннях доз сахаридів 1:2:2, 1:2:1, 1:4:2, 1:4:1, 1:8;4, 1:6:3, 1:3:3, 1:4:4, 1:5:5, 1:6:6 (співвідношення за масою). Необов'язково, доза сахариду MenС є більшою, ніж доза сахариду MenW. Hib-кон'югат та MenА-кон'югат та MenWкон'югат, необов'язково у співвідношеннях доз сахаридів 1:2:2, 1:2:1, 1:4:2, 1:4:1, 1:8;4, 1:6:3, 1:3:3, 1:4:4, 1:5:5, 1:6:6 (співвідношення за масою). Необов'язково, доза сахариду MenА є більшою, ніж доза сахариду MenW. Hib-кон'югат та MenА-кон'югат та MenYкон'югат, необов'язково у співвідношеннях доз сахаридів 1:2:2, 1:2:1, 1:4:2, 1:4:1, 1:8:4, 1:6:3, 1:3:3, 1:4:4, 1:5:5, 1:6:6 (співвідношення за масою). Необов'язково, доза сахариду MenА є більшою, ніж доза сахариду MenY. Hib-кон'югат та MenW-кон'югат та MenYкон'югат, необов'язково у співвідношеннях доз сахаридів 1:2:2, 1:2:1, 1:1:2, 1:4:2, 1:2:4, 1:4:1, 1:1:4, 1:3;6, 1:1:3, 1:6:3, 1:3:3, 1:4:4, 1:5:5, 1:6:6 (співвідношення за масою). Необов'язково, доза сахариду MenY є більшою, ніж доза сахариду MenW. MenА, MenС, MenW та MenY у співвідношеннях доз сахаридів 1:1:1:1 або 2:1:1:1 або 1:2:1:1 або 2:2:1:1 або 1:3:1:1 або 1:4:1:1 (співвідношення за масою). Згідно з наступним аспектом заявленого винаходу запропоновано вакцини, які містять імуногенну композицію винаходу та фармацевтично прийнятний наповнювач. У втіленні імуногенна композиція винаходу є буферованою або доведеною до значень між рН 7,0 та 8,0, рН 7,2 та 7,6 або приблизно або точно рН 7,4. Імуногенна композиція або вакцина винаходу є необов'язково ліофілізованими у присутності стабілізатору, наприклад, поліолу, як-то сахароза або трегалоза. Необов'язково, імуногенна композиція або вакцина винаходу містить кількість імуностимулятору, достатню для підсилення імунної реакції на імуноген. Придатні імуностимулятори охоплюють, але без обмеження, солі алюмінію (алюміній фосфат або алюміній гідроксид), суміші сквалену (SAF-1), мураміл-пептид, похідні сапоніну, препарати стінок мікобактеріальних клітин, монофосфорилліпід А, похідні міколевої кислоти, неіоногенні блок-кополімерні поверхнево-активні речовини, Quil А, субодиниця В токсину холери, поліфосфазен та похідні, та імуностимулювальні комплекси (ISCOM), як-то комплекси, описані Takahashi et al. (1990) Nature 344:873-875. Для комбінацій N. meningitidis або Hib-Men, обговорених вище, може не бути переважним застосування будь-якого солі алюмінію як імуностимулятору або будь-якого імуностимулятору взагалі. В усіх імуногенних композиціях або вакцинах імунологічно ефективні кількості імуногенів повинні бути визначеними емпірично. Фактори, що слід 17 розглядати, охоплюють імуногенність, незалежно від того, буде чи ні імуноген поєднаним з імуностимулятором або білком-носієм або іншим носієм, або ковалентно приєднаним до них, шлях призначення та число призначених доз імунізації. Такі фактори є відомими у попередньому рівні техніки вакцин, та спеціалістам в імунології добре відомо, як робити такі визначення без надмірного експериментування. Активний засіб може бути наявним у різноманітних концентраціях у фармацевтичній композиції або вакцині винаходу. Звичайно, мінімальною концентрацією речовини є кількість, необхідна для досягнення призначеного для неї застосування, у той час як максимальною концентрацією є максимальна кількість, що повинна залишатися у розчині або бути гомогенно суспендованою у початковій суміші. Наприклад, мінімальною кількістю терапевтичного засобу необов'язково є кількість, котра повинна забезпечувати одиничну терапевтично ефективну дозу. Для біоактивної речовини, мінімальною концентрацією є кількість, необхідна для біоактивності при відтворюванні та максимальною концентрацією є кількість, при котрій гомогенна суспензія не може бути підтримуваною. У випадку окремих дозованих одиниць кількістю є кількість для одиничного терапевтичного застосування. Взагалі, очікують, що кожна доза повинна містити 1-100 мкг білкового антигену, необов'язково 5-50 мкг або 5-25 мкг. Прикладами доз бактеріальних сахаридів є 10-20 мкг, 5-10 мкг, 2,5-5 мкг або 1-2,5 мкг. Краща кількість речовини змінюється від речовини до речовини, але є легко установлюваною спеціалістом у попередньому рівні техніки. Вакцинні препарати заявленого винаходу можуть бути застосованими для захисту або лікування різних ссавців (наприклад, пацієнта-людини) сприйнятливих до інфекції, засобами застосування вказаної вакцини системним шляхом або через слизову. Пацієнтом-людиною необов'язково є малюк (у межах 12 місяців), малюк, який починає ходити (12-24, 12-16 або 12-14 місяців), дитина (210, 3-8 або 3-5 років) підліток (12-25, 14-21 або 1519 років) або дорослий (будь-якого віку зверх 12, 15, 18 або 21). Ці призначення можуть охоплювати ін'єкцію внутрішньом'язовим, інтраперитонеальним, інтрадермальним або підшкірним шляхами; або призначення через слизову до перорального/травного, респіраторного, сечостатевого трактів. Інтраназальне призначення вакцин для лікування пневмонії або середнього отиту є кращим (оскільки переніс пневмококів у носоглотку може бути більш ефективно попередженим, таким чином послаблюючи інфекцію на її ранньому етапі). Хоча вакцина винаходу може бути призначеною як одинична доза, її компоненти можуть також бути співпризначеними разом одночасно або у відмінні моменти часу (наприклад, якщо сахариди є наявними у вакцині, вони могли б бути призначеними окремо у той же час або через 1-2 тижнів після застосування бактеріальної білкової вакцини для оптимального узгодження імунних реакцій одна відносно іншої). На додаток до одиничного шляху призначення, можуть бути застосованими два відмінні шляхи призначення. Наприклад, вірусні анти 95075 18 гени можуть бути призначеними ID (інтрадермально), у той час, як бактеріальні білки можуть бути призначеними IМ (внутрішньом'язово) або IN (інтраназально). Якщо сахариди є наявними, вони можуть бути призначеними внутрішньом'язово (або інтрадермально), а бактеріальні білки можуть бути призначеними інтраназально (або інтрадермально). На додаток, вакцини винаходу можуть бути призначеними внутрішньом'язово для примувальної дози та інтраназально для ревакцинувальної дози. Отримання вакцин є взагалі описаним у Vaccine Design ("The subunit and adjuvant approach" (eds Powell M.F. & Newman M.J.) (1995) Plenum Press New York). Інкапсулювання у ліпосоми є описаним Fullerton, Патент США № 4,235,877. Згідно з наступним аспектом заявленого винаходу запропоновано комплект вакцин для сумісного або послідовного призначення, який містить дві багатовалентні імуногенні композиції для надання хазяїну захисту проти хвороби, викликаної Bordetella pertussis, Clostridium tetani, Corynebacterium diphtheriae та Neisseria meningitidis та необов'язково Haemophilus influenzae. Наприклад, комплект необов'язково містить першу ємність, яка містить одне або більше з групи: правцевий анатоксин (ТТ), дифтерійний анатоксин (DT), та цілоклітинні або безклітинні коклюшні компоненти та другу ємність, яка містить будь-що з нижченаведеного: капсульні полісахариди N. meningitidis з принаймні одної, двох, трьох або чотирьох з серогруп А, С, W та Y, кон'юговані з білком-носієм, де середній розмір кожного полісахариду N. meningitidis є вище 50 кДа, 75 кДа, 100 кДа, 110 кДа, 120 кДа або 130 кДа, які є необов'язково ліофілізованими. або сахаридний кон'югат Hib, та капсульні полісахариди N. meningitidis з принаймні одної, двох, трьох або чотирьох з серогруп А, С, W та Y, кон'юговані з білком-носієм, де середній розмір кожного полісахариду N. meningitidis є вище 50 кДа, 75 кДа, 100 кДа, 110 кДа, 120 кДа або 130 кДа, які є необов'язково ліофілізованими. Приклади композицій кон'югату Hib та кон'югатів полісахаридів N. meningitidis є описаними вище. Згідно з наступним аспектом заявленого винаходу запропоновано комплект вакцин для сумісного або послідовного призначення, який містить дві багатовалентні імуногенні композиції для надання хазяїну захисту проти хвороби, викликаної Streptococcus pneumoniae та Neisseria meningitidis та необов'язково Haemophilus influenzae. Наприклад, комплект необов'язково містить першу ємність, яка містить: один або більше кон'югатів білку-носія та капсульний сахарид від Streptococcus pneumoniae [де капсульний сахарид необов'язково є від пневмококового серотипу, вибраного з групи, яка складається з нижченаведеного: 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 19 8, 9N, 9V, 10А, 11 A, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23F та 33F]. та другу ємність, яка містить будь-що з нижченаведеного: капсульні полісахариди N. meningitidis з принаймні одної, двох, трьох або чотирьох з серогруп А, С, W та Y, кон'юговані з білком-носієм, де середній розмір кожного полісахариду N. meningitidis є вище 50 кДа, 75 кДа, 100 кДа, 110 кДа, 120 кДа або 130 кДа, які є необов'язково ліофілізованими. або сахаридний кон'югат Hib, та капсульні полісахариди N. meningitidis з принаймні одної, двох, трьох або чотирьох з серогруп А, С, W та Y, кон'юговані з білком-носієм, де середній розмір кожного полісахариду N. meningitidis є вище 50 кДа, 75 кДа, 100 кДа, 110 кДа, 120 кДа або 130 кДа, які є необов'язково ліофілізованими. Приклади кон'югату Hib та кон'югатів полісахаридів N. meningitidis є описаними вище. Звичайно вакцина проти Streptococcus pneumoniae у комплекті вакцин заявленого винаходу повинна містити сахаридні антигени (які є необов'язково кон'югованими), де полісахариди є похідними від принаймні чотирьох серотипів пневмококу, вибраних з групи, яка складається з нижченаведеного: 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 8, 9N, 9V, 10А, 11А, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23F та 33F. Необов'язково чотири серотипи охоплюють 6В, 14, 19F та 23F. Необов'язково, принаймні 7 серотипів є уведеними у композицію, наприклад, серотипів, похідних з серотипів 4, 6В, 9V, 14, 18С, 19F, та 23F. Необов'язково більше, ніж 7 серотипів є уведеними у композицію, наприклад, принаймні 10, 11, 12, 13 або 14 серотипів. Наприклад, композиція в одному втіленні містить 11 капсульних полісахаридів, похідних з серотипів 1, 3, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19F та 23F (які є необов'язково кон'югованими). У втіленні винаходу принаймні 13 полісахаридних антигенів (які є необов'язково кон'югованими) є уведеними, хоча додаткові полісахаридні антигени, наприклад, 23-валентні (як-то серотипи 1, 2, 3, 4, 5, 6В, 7F, 8, 9N, 9V, 10А, 11 A, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23F та 33F), є також охопленими винаходом. Пневмококові сахариди є незалежно кон'югованими з будь-яким відомим білком-носієм, як-то, наприклад, CRM197, правцевий анатоксин, дифтерійний анатоксин, білок D або будь-який інший білок-носій, який згадано вище. Необов'язково, комплекти вакцин винаходу містять третій компонент. Наприклад, комплект необов'язково містить першу ємність, яка містить одне або більше з групи: правцевий анатоксин (ТТ), дифтерійний анатоксин (DT), та цілоклітинні або безклітинні коклюшні компоненти та другу ємність, яка містить : один або більше кон'югатів білку-носія та капсульний сахарид від Streptococcus pneumoniae [де капсульний сахарид необов'язково походить від пневмококового серотипу, вибраного з групи, яка складається з нижченаведеного: 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 95075 20 6В, 7F, 8, 9N, 9V, 10А, 11А, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23F та 33F]. та третю ємність, яка містить: капсульні полісахариди N. meningitidis з принаймні одної, двох, трьох або чотирьох з серогруп А, С, W та Y, кон'юговані з білком-носієм, де середній розмір кожного полісахариду N. meningitidis є вище 50 кДа, 75 кДа, 100 кДа, 110 кДа, 120 кДа або 130 кДа, які є необов'язково ліофілізованими. або сахаридний кон'югат Hib, та капсульні полісахариди N. meningitidis з принаймні одної, двох, трьох або чотирьох з серогруп А, С, W та Y, кон'юговані з білком-носієм, де середній розмір кожного полісахариду N. meningitidis є вище 50 кДа, 75 кДа, 100 кДа, 110 кДа, 120 кДа або 130 кДа, які є необов'язково ліофілізованими. Імуногенні композиції, які містять менінгококові кон'югати, наприклад, HibMenC, HibMenAC, HibMenAW, HibMenAY, HibMenCW, HibMenCY, HibMenWY, MenAC, MenAW, MenAY, MenCW, MenCY, MenWY або MenACWY, що охоплюють комплекти композицій, подібних тим, які описані вище, необов'язково містять антигени від кору та/або свинки та/або червоної висипки та/або вітряної віспи. Наприклад, менінгококова імуногенна композиція містить антигени від кору, свинки та червоної висипки або кору, свинки, червоної висипки та вітряної віспи. У втіленні ці вірусні антигени необов'язково є наявними у тому ж контейнері, що і менінгококовий та/або сахаридний кон'югат Hib. У втіленні ці вірусні антигени є ліофілізованими. Згідно з наступним аспектом заявленого винаходу запропоновано спосіб створення імуногенної композиції винаходу, який містить етап змішування капсульних полісахаридів N. meningitidis з принаймні одної, двох або трьох з серогруп А, С, W та Y, кон'югованих з білком-носієм, з бактеріальним сахаридним кон'югатом, де середній розмір кожного полісахариду N. meningitidise є вище 50 кДа, 75 кДа, 100 кДа, 110 кДа, 120 кДаабо 130 кДа. Отримання вакцин є взагалі описаним у Vaccine Design ("The subunit and adjuvant approach" (eds Powell M.F. & Newman M.J.) (1995) Plenum Press New York). Інкапсулювання у ліпосоми є описаним Fullerton, Патент США № 4,235,877. Згідно з наступним аспектом заявленого винаходу запропоновано спосіб імунізації людинихазяїна проти хвороби, викликаної N. meningitidis та необов'язково інфекції Haemophilus influenzae, який полягає у призначенні хазяїну імунозахисної дози імуногенної композиції або вакцини або комплекту винаходу. Згідно з наступним аспектом заявленого винаходу запропоновано імуногенну композицію винаходу для застосування у лікуванні або попередженні хвороби, викликаної N. meningitidis та необов'язково інфекцією Haemophilus influenzae. Згідно з наступним аспектом заявленого винаходу запропоновано застосування імуногенної композиції або вакцини або комплекту винаходу у виробництві медикаменту для лікування або попередження хвороб, викликаних N. meningitidis та необов'язково інфекцією Haemophilus influenzae. 21 Терміни "що містить", "містять" та "містить" тут є призначеними винахідникам як такі, що необов'язково можуть бути заміненими термінами "складається з, "складаються з" та "що складається з", відповідно, у кожному випадку. Усі посилання або заявки на патент, цитовані у цьому патентному описанні, є уведеними тут як посилання. Винахід є ілюстрованим у супровідних прикладах. Приклади нижче є здійсненими, застосовуючи стандартні способи, котрі є добре відомими та звичайними для спеціалістів, за винятком того, де описано детально щось інше. Приклади є ілюстративними, але не обмежують винахід. Приклади Приклад 1 - отримання кон'югатів полісахаридів Ковалентне зв'язування полірибозилфосфатного полісахариду Haemophilus influenzae (Hib) з ТТ було здійснено хімічним сполученням, розробленим Chu et al (Infection та Immunity 1983, 40 (1); 245-256). Полірибозил-фосфатний полісахарид Hib було активовано додаванням CNBr та інкубацією при рН10,5 протягом 6 хвилин. рН було знижено до рН 8,75 та було додано дигідразид адіпінової кислоти (ADH) та інкубацію продовжували протягом наступних 90 хвилин. Активований полірибозил-фосфатний полісахарид було сполучено з очищеним правцевим анатоксином конденсацією з карбодіімідом, застосовуючи 1-етил-3-(3диметил-амінопропіл)карбодіімід (EDAC). 1-етил3-(3-диметил-амінопропіл)карбодіімід було додано до активованого полірибозил-фосфатного полісахариду для досягнення кінцевого співвідношення 0,6 мг EDAC/мг активованого полірибозилфосфатного полісахариду. рН було доведено до значення 5,0 та очищений правцевий анатоксин було додано для досягнення 2 мг ТТ/мг полірибозил-фосфатного полісахариду. Утворений розчин було залишено на три доби з помірним перемішуванням. Після фільтрування через мембрану 0,45 мкм, кон'югат було очищено на колонці Sephacryl S500HR (Pharmacia, Sweden) урівноваженій у 0,2М NaCI. MenС -ТТ-кон'югати були виготовленими, застосовуючи природні полісахариди (більше 150кДа, як виміряно за допомогою способу MALLS). MenA-TT-кон'югати були виготовленими, застосовуючи будь-який природний полісахарид або слабко мікрофлюїдизований полісахарид більше 60 кДа, як виміряно за допомогою способу MALLS з прикладу 2. MenW та MenY-TT-кон'югати були виготовленими, застосовуючи зменшені за розміром полісахариди приблизно 100-200 кДа, як виміряно за допомогою MALLS (дивись приклад 2). Зменшення розміру було отримано мікрофлюїдизацією, застосовуючи гомогенізатор Emulsiflex C50. Полісахариди були тоді профільтрованими через фільтр 0,2 мкм. Активація та сполучення були проведеними, як описано у WO96/29094 та WO 00/56360. Коротко, полісахарид при концентрації 10-20 мг/мл у 2М NaCI з рН 5,5-6,0 було змішано із розчином CDAP (100 мг/мл нещодавно отриманим у суміші ацетонітрил/WFI, 50/50) до кінцевого співвідношення 95075 22 CDAP/полісахарид 0,75/1 або 1,5/1. Через 1,5 хвилин, рН було підвищено натрій гідроксидом до рН 10,0. Через три хвилини правцевий анатоксин було додано для досягнення співвідношення білок/полісахарид 1,5/1 для MenW, 1,2/1 для MenY, 1,5/1 для MenА або 1,5/1 для MenС. Реакцію продовжували протягом від одної до двох годин. Після етапу сполучення, гліцин було додано до кінцевого співвідношення гліцин/PS (співвідношення за масою) 7,5/1 та рН було доведено до значення рН 9,0. Суміш було залишено на 30 хвилин. Кон'югат було очищено, застосовуючи фільтр 10 мкм Kleenpak та це було тоді завантажено на колонку Sephacryl S400HR, застосовуючи буфер для елюювання 150 мМ NaCI, 10 мМ або 5 мМ трис рН 7,5, клінічні партії були профільтрованими на стерилізувальній мембрані Opticap 4. Утворені кон'югати мали середнє співвідношення полісахарид:білок 1:1-1:5 (співвідношення за масою). Для мети кон'югації капсульного полісахариду MenА до правцевого анатоксину через спейсерну групу, було застосовано наступний спосіб. Ковалентне зв'язування полісахариду та спейсерної групи (ADH) здійснюють хімічним сполученням, котрим полісахарид активують у контрольованих умовах ціанілувальним засобом, 1-ціано-4диметиламіно-піридиній тетрафлуорборатом (CDAP). Спейсерна група реагує із ціанілованим PS через свої гідразиногрупи, для утворення стабільного ізосечовинного зв'язку між спейсерною групою та полісахаридом. 10 мг/мл розчин MenА було оброблено нещодавно отриманим розчином концентрацією 100мг/мл CDAP у суміші ацетонітрил/вода (50/50 (за об'ємом)) для отримання співвідношення CDAP/MenA 0,75 (співвідношення за масою). Після 1,5 хвилин, рН було підвищено до рН 10,0. Трьома хвилинами пізніше ADH було додано для отримання співвідношення ADH/MenA 8,9. рН розчину було зменшено до 8,75 та реакція перебігала протягом 2 годин. Перед реакцією кон'югації очищений розчин ТТ та розчин PSAAH були розбавленими для досягнення концентрації 10 мг/мл для PSAAH та 10мг/мл для ТТ. EDAC було додано до розчину PSAAH для мети досягнення кінцевого співвідношення 0,9 мг EDAC/мг PSAAH. рН було доведено до значення 5,0. Очищений правцевий анатоксин було додано перистальтичним насосом (протягом 60 хвилин) для досягнення 2 мг ТТ/мг PSAAH. Утворений розчин було залишено на 60 хвилин при +25*0 при перемішуванні для отримання кінцевого часу сполучення 120 хвилин. Кон'югат було очищено, застосовуючи фільтр 10 мкм та було очищено, застосовуючи колонку Sephacryl S400HR. Приклад 2 - визначення молекулярної маси, застосовуючи MALLS Детектори були сполученими з ексклюзійною колонкою формату ВЕРХ, з котрої зразки були ельованими. З одного боку детектор розсіюваного світла лазеру вимірював інтенсивності розсіюваного макромолекулярним розчином світла при 16 кутах, а з іншого боку інтерференційний рефрактометр в оперативному режимі дозволяв визна 23 95075 чення кількості ельованого зразку. За цими інтенсивностями можуть бути визначеними розмір та конфігурація макромолекул у розчині. Середню відносну молекулярну масу (Mw) визначають як суму мас усіх різновидів помножених на їх відповідну молекулярну масу та розділену на суму мас усіх різновидів. Середньозважена відносна молекулярна маса: -Mw-, Середньочисельна молекулярна маса, -Μn-, визначена за рівнянням Mn   Ni  Mi  Ni  mi m0 2 c) середньоквадратичний радіус: -Rw-, a R w є квадратичним радіусом, визначеним за рівнянням:  R2w або r 2 w   mi  ri2  mi (-mi- - значення для розсіювального центру і, а -n- - відстань між розсіювальним центром і та центром тяжіння макромолекули). d) Полідисперсність визначають як співвідношення -Mw/Μn-. Менінгококові полісахариди були проаналізованими за допомогою MALLS завантаженням на дві ВЕРХ-колонки (TSKG6000 та SOOOPWxl), застосовані у комбінації. 25 мкл полісахариду були завантаженими на колонку та це було ельовано 0,75 мл профільтрованої води. Полісахариди виявляють, застосовуючи детектор розсіюваного світла (Wyatt Dawn DSP оснащений аргоновим лазером 10 мВт при 488 нм) та інтерференційним рефрактометром (Wyatt Otilab DSP, оснащеним коміркою Р100 Cell та червоним фільтром при 498 нм). Дисперсності молекулярної маси та виведення усіх зразків були розрахованими за допомогою способу Дебі, застосовуючи поліноміальної команду 1 підгонки у програмному забезпеченні Astra 4,72. Приклад 3 - клінічне випробування порівняння імунізації кон'югатом Meninqitec або більшим зменшеним за розміром MenС-ТТ-кон'югатом Фаза II, відкрите контрольоване дослідження було здійснено для порівняння вакцини з кон'югатом менінгококової серогрупи С (MenC) GSK Biologicals з вакциною з кон'югатом (Hib-MenC) або Meningitec менінгококової серогрупи С Haemophilus influenzae b GSK Biological's. Кожна доза Meningitec містить 10 мкг олігосахариду менінгококової серогрупи С, кон'югованого з 15 мкг CRM197 та є виготовленою Wyeth. MenCкон'югати GSK містили природні полісахариди розміром приблизно кДа, кон'юговані з правцевим анатоксином (ТТ). Дослідження складалося з п'яти груп, кожна, як було сплановано, містила 100 суб'єктів, розподілені на дві паралельні гілки таким чином: У цьому представленому дослідженні усі суб'єкти в обох гілках отримували одну п'яту (1/5) 24 дози Mencevax ACWY та сумісну дозу Infanrix hexa у період 12-15 місяців віку (Місяць дослідження 0). Два зразки крові були зібраними від усіх суб'єктів (Місяць дослідження 0 та Місяць дослідження 1). Гілка 1 складалася з чотирьох груп з дослідження первинної вакцинації, яких було піддано первинній вакцинації при їх віку 3, 4 та 5 місяців нижченаведеними вакцинами: Група K: MenС (10 мкг), неадсорбований на солях алюмінію (неадсорб.), кон'югат правцевого анатоксину (ТТ) та Infanrix hexa (MenC10-TT + Infanrix hexa) Група L: Hib (10 мкг)-MenС (10 мкг), неадсорб. ТТ-кон'югат та Infanrix penta (Hib10-MenC10-TT + Infanrix penta) Група Μ: Hib (5 pg)-MenC (5 мкг), неадсорб., ТТ-кон'югат та Infanrix penta (Hib5-MenC5-TT + Infanrix penta) Група Ν: Meningitec та Infanrix hexa (Meningitec + Infanrix hexa) Дві групи вакцин Hib-MenC-TT (Групи L та М) були застосовуваними всліпу у дослідженні повторної імунізації, як-то для точного складу вакциникандидата. Гілка 2-(Група О) складалося з підібраних за віком суб'єктів, раніше не вакцинованих менінгококовою вакциною серогрупи С (необробленою), але які отримали звичайні вакцини для дітей згідно з вимогами German Permanent Commission on Immunization. Критерії оцінки: Імуногенність. Визначення титрів бактерицидних антитіл проти менінгококів С (SBA-MenC) бактерицидним тестуванням (відсічка: розбавлення 1:8) та ELISA-вимір антитіл проти менінгококової серогрупи С (відсічка випробування: 0,3 мкг/мл), Hib-полірибозил-фосфатного полісахариду (відсічка випробування: 0,15 мкг/мл) та правцевого анатоксину (відсічка випробування: 0,1 М-од./мл) у зразках крові, отриманих перед вакцинацією та приблизно через один місяць після вакцинації від усіх суб'єктів. Статистичні способи: Демографічні дані: Визначення середнього віку у місяцях (з серединним, діапазоном та стандартним відхиленням [SD]), та расового і статевого складу вакцинованих АТР та загальної груп. Імуногенність: Два аналізи імуногенності були проведеними на основі групи АТР на імуногенність (для аналізів імунної пам'яті та реакції на повторну імунізацію) або групи АТР на безпечність (для аналізу опірності). Це охоплює: Оцінку імунної пам'яті стосовно MenС та реакції на повторну імунізацію стосовно Hib та правцевого анатоксину (перед імунізацією та через один місяць після призначення 1/5 дози полісахаридної вакцини без домішок): Визначення середнього геометричного титрів та концентрації (СГТ та СГК) із довірчими інтервалами 95% (95% СІ) Визначення проценту суб'єктів із титром/концентрацією антитіла вище запропонованих значень відсічки із точним довірчим інтервалом 95% (значення серопозитивності/серозахисту) 25 Дослідження титрів/концентрацій антитіл після вакцинації, застосовуючи зворотні інтегральні криві Розрахунок стандартизованого асимптотичного довірчого інтервалу 95% для відмінностей значень серопозитивності/серозахисту між підданими первинній вакцинації групами (Групи K, L, Μ та Ν) та не підданою первинній вакцинації групою (Група О) Визначення середнього геометричного індивідуальних співвідношень титру SBA-MenС зверх концентрації анті-PSC, з довірчим інтервалом 95% 95075 26 Визначення довірчого інтервалу 95% для співвідношення СГТ/K після вакцинації між групами K, L, Μ та контрольною групою N для антіполірибозил-фосфатної та анті-правцевої та між кожною з підданих первинній вакцинації груп (Групи K, L, Μ та Ν) та не підданих первинній вакцинації груп (Група О) для SBA-MenC та анті-PSC, застосовуючи модель ANOVA Результати Група K: суб'єкти, піддані первинній вакцинації MenС10-ТТ + Infanrix. hexa; Група L: суб'єкти, піддані первинній вакцинації Ніb10-MenС10-ТТ + Infanrix. penta; Група Μ: суб'єкти, піддані первинній вакцинації Hib5-MenC5-TT + Infanrix. penta; Група Ν: суб'єкти, піддані первинній вакцинації Meningitec. + Infanrix. hexa; Група О: контрольні суб'єкти (тобто суб'єкти, не піддані первинній вакцинації вакциною з кон'югатом MenC) N: число суб'єктів з результатами, що відповідають вимогам Вищі титри антитіл проти MenС та вищі SBA-титри були досягнутими первинною вакцинацією вакцинами з більшим зменшеним за розміром MenС-кон'югатом полісахариду (групи K, L та М) порівняно з вакциною Meningitec з кон'югатом олігосахариду. В усіх чотирьох підданих первинній вакцинації групах (Групи K, L, Μ та N), GMR був значно збільшеним від часу перед до часу після повторної вакцинації, вказуючи на наявність розвинення та функціональності антитіл. GMR у групі Μ (під даній первинній вакцинації Ніb5-MenС5-ТТ) був вищим, ніж у групі N (підданій первинній вакцинації Meningitec). 27 95075 28 Група K: суб'єкти, піддані первинній вакцинації MenC10-TT + Infanrix. hexa; Група L: суб'єкти, піддані первинній вакцинації Hib10-MenC10-TT + Infanrix. penta; Група Μ: суб'єкти, піддані первинній вакцинації Hib5-MenC5-TT + Infanrix. penta; Група Ν: суб'єкти, піддані первинній вакцинації Meningitec. + infanrix. hexa; Ν: число суб'єктів з результатами, що відповідають вимогам Вищі SBA-титри проти MenС були досягнутими первинною вакцинацією з більшим розміром MenС (групи K, L та М) порівняно з первинною вакцинацією MenС-кон'югатом олігосахариду Meningitec. Імунна пам'ять (АТР група стосовно імуногенності) Призначення 1/5 дози полісахаридної вакцини ACWY без домішок призвело до дуже високого SBA-MenC-титру в усіх чотирьох підданих первинній вакцинації групах із 98,7-100% та 97,5-100% суб'єктів, підданих режиму первинної вакцинації вакциною-кандидатом, виявляючи титри 1:8 та 1:128, відповідно. У групі, підданій режиму первинної вакцинації Meningitec, спостерігали тенденцію стосовно нижчого проценту суб'єктів з титрами 21:128 (91,8%). При порівнянні, 17,6% не підданих первинній вакцинації суб'єктів мали SBAMenC-титри 1:8 та 1:128. Приклад 4 Фаза II клінічного випробування на HibMenAC -ТТ-вакцині з кон'югатом, змішаним із DTPw-HepB Мета дослідження: Відкрите, рандомізоване (1:1:1:1:1), одинично-центрове дослідження з п'я тьма групами. П'ять груп отримували нижченаведений режим вакцинації відповідно, у віці 6, 10 та 14 тижнів: Tritanrix.-HepB/Hib-MenAC 2,5 мкг/2,5 мкг/2,5 мкг: тут і далі позначено як 2,5/2,5/2,5 Tritanrix.-HepB/Hib-MenAC 2,5 мкг/5 мкг/5 мкг: тут і далі позначено як 2,5/5/5 Tritanrix.-HepB/Hib-MenAC 5 мкг/5 мкг/5 мкг: тут і далі позначено як 5/5/5 Tritanrix.-HepB + Hiberix.: тут і далі позначено як Hiberix Tritanrix.-HepB/Hiberix, + Meningitec; тут і далі позначено як Meningitec Зразки крові були узятими підчас першого уведення дози вакцини (Перед) та через один місяць після уведення третьої дози вакцини (Після доз 3). Tritanrix є вакциною DTPw отриманою від GlaxoSmithKline Biologicals S.A. 105 суб'єктів були застосованими у кожній п'яти груп даючи загалом 525 суб'єктів у дослідженні. 29 Композиції вакцин Hib-MenAC були змішаними непередбачувано з Tritanirix-HepB, GSK Biologicals' комбінованою дифтерійно-правцевогепатитною(В) вакциною (Tritanrix-НерВ) з цілих клітин Bordetella pertussis (DTPw-HB), яка містить не менше, ніж 30 Міжнародних одиниць (М-од.) дифтерійного анатоксину, не менше, ніж 60 М-од. правцевого анатоксину, не менше, ніж 4 М-од. вбитої Bordetella pertussis та 10 мкг рекомбінантного поверхневого антигену гепатиту В. Довідка: терапія, доза, режим призначення, № партії: Перелік/ділянка вакцинації: Одна група отримувала вакцину Tritanrix.HepB внутрішньом'язово у ліве стегно та вакцину Hiberix внутрішньом'язово у праве стегно у віці 6, 10 та 14 тижнів. Друга група отримувала вакцину TritanrixHepB/Hiberix внутрішньом'язово у ліве стегно та 95075 30 вакцину Meningitec внутрішньом'язово у праве стегно у віці 6, 10 та 14 тижнів. Вакцина/композиція/доза/№ партії: вакцину Tritanrix-HepB було застосовано, як описано вище. Одна доза (0,5 мл) вакцини GSK Biologicafs' Haemophilus influenzae типу b з кон'югатом: Hiberix містила 10 мкг полірибозилфосфатного сахарину, кон'югованого з правцевим анатоксином. У групі Hiberix™ це було змішано із стерильним розріджувачем та у Meningitec це було змішано із Tritannx-HepB. Одна доза (0,5 мл) вакцини Wyeth Lederle's MENINGITEC містила: 10 мкг капсульного олігосахариду менінгококової групи С, кон'югованого з 15 мкг білку Corynebacterium diphtheria CRM197 та як солі солі алюмінію. Результати - імунні реакції створені проти Hib, MenА та Мес 31 Висновок Порівняння результатів імуногенності, досягнутих, застосовуючи вакцину з кон'югатом олігосахариду MenC-CRM197 та три композиції GSK, котрі містять полісахарид MenА-ТТ та MenС -ТТкон'югати, показало, що кон'югати полісахаридів Men були здатними призводити до гарної імуногенної реакції, подібної тій, що досягнуто, застосовуючи вакцину з кон'югатом олігосахариду Meningitec. Усі тестовані композиції виявили реакцію на MenС у 100% пацієнтів. Приклад 5 - Фаза II клінічного випробування застосування Hib MenCY сумісно із Infanrix penta згідно з програмою на 2, 3 та 4 місяці Мета дослідження: Фаза II, відкрите (частково подвійно-сліпе) рандомізоване контрольоване багатоцентрове дослідження з 5 групами, які отримували три-дозовий первинний режим з нижченаведеними вакцинами: Група Hib-MenCY 2,5/5/5: Hib-MenCY (2,5/5/5) + Infanrix penta Група Hib-MenCY 5/10/10: Hib-MenCY (5/10/10) + Infanrix penta Група Hib-MenCY 5/5/5: Hib-MenCY (5/5/5) + Infanrix penta 95075 32 Група Hib-MenC: Hib-MenC (5/5) + Infanrix penta Група Menjugate: Menjugate** + Infanrix hexa (контроль). * Група Hib-MenCY 2,5/5/5, група Hib-MenCY 5/10/10 та група Hib-MenC були призначені у подвійно-сліпому режимі, у той час як група HibMenCY 5/5/5 та група Menjugate груп були відкритими. Композиції 2,5/5/5, 5/10/10 та 5/5/5 HibMenCY містять природні полісахариди MenС та полісахариди MenY, котрі є мікрофлюїдизованими. "Menjugate містить 10 мкг олігосахаридів MenС, кон'югованих з 12,5-25 мкг CRM197 на дозу та є виготовленою Chiron. Вакцинація у період часу +/- 2, 3,4 місяців віку (місяць дослідження 0, місяць дослідження 1 та місяць дослідження 2), та зразки крові (3,5 мл) від усіх суб'єктів перед первинної вакцинацією та через один місяць після первинної вакцинації (місяць дослідження 0 та місяць дослідження 3). Дослідження вакцин, дози, режиму призначення, № партії: Три дози, уведені ін'єкціями внутрішньом'язово при інтервалах один місяць, у віці приблизно 2, 3 та 4 місяці: 33 Імуногенність: Вимір титрів/концентрацій антитіл проти кожного антигену вакцини: Перед першою дозою (Місяць 0) та приблизно через один місяць після третьої дози (Місця 3) від усіх суб'єктів для; SBA-MenC та SBA-MenY, антіPSC та анті-PSY, анті-PRP, анті-Т, анті-FHA, антіPRN та анті-РТ. Застосовуючи сироваточну бактерицидну активність проти серогруп С та Υ N. meningitidis (SBA-MenC та SBA-MenY, відсічка: 1:8 та 1:128); ELISA-випробування з відсічками: 0,3 мкг/мл та 2 мкг/мл для анті-N. meningitidis серогруп С та Υ полісахаридів (анті-PSC IgG та антіPSY IgG); 0,15 мкг/мл та 1,0 мкг/мл для Hib полірибозил-рибітол-фосфатрого полісахариду (антіPRP IgG); 5ЕL.од./мл для анті-FHA, анті-PRN, антіРТ; 0,1 М-од./мл анті-правцевого анатоксину (анті-ТТ). Тільки через один місяць після третьої дози (Місяць 3) від усіх суб'єктів для: анті-D, анті-НВ та анті-поліо 1, 2 та 3. Застосовуючи ELISAвипробування із відсічками: 0,1 М-од./мл для антідифтерійної (анті-D); 10 мМ-од./мл для антигепатитної В (анті-HBs); та мікронейтралізації тестування відсічка: 1:8 для анті-роlіо тип 1, 2 та 3 (антіроlіо 1, 2 та 3). Статистичні способи: Значення серопозитивності/серозахисту та середнє геометричне концентрації/титрів (СГК/СГТ) із 95% довірчими інтервалами (95% СІ) були розрахованими на групу, для SBA-MenC, анті-PSC, SBA-MenY, анті-PSY, анті-PRP, анті-правцевої, анті-РТ, анті-FHA та анті-PRN перед вакцинацією 95075 34 та через один місяць після вакцинації; для антідифтерійної, анті-HBs, анті-РоІіо 1, анті-РоІіо 2 та анті-Polio 3 через один місяць після вакцинації. Реакція на вакцину (виявлення антитіл у суб'єктів, спочатку серонегативних або принаймні тримаючи концентрації антитіл у суб'єктів, спочатку серопозитивних) з довірчим інтервалом 95% для анті-РТ, анті-PRN та анті-FHA були також розрахованим через один місяць після вакцинації. Зворотні інтегральні криві для кожного антитіла у місяці 3 є представленими також. Відмінності між групами Hib-MenCY та Hib- MenС, порівняно з контрольною групою Menjugate, були оціненими у режимі дослідження для кожного антитіла, за винятком SBAMenY та анті-PSY, у термінах (1) відмінності між групою Menjugate (мінус) групами Hib-MenCY та Hib-MenC для проценту суб'єктів вище встановлених відсічок, або з реакцією на вакцину з її стандартизованим асимптотичним довірчим інтервалом 95%, (2) СГК- або СГТ-співвідношення групи Menjugate відносно груп Hib-MenCY та Hib-MenC з їх довірчими інтервалами 95%. Такі ж порівняння були зроблені для оцінювання відмінності між кожною парою композицій Hib-MenCY для антитіл анті-PRP, SBA-MenC, анті-PSC, SBA-MenY, анті-PSY та анті-ТТ. Значення серопозитивності/серозахисту &CГК/Ts (АТР-група для імуногенності) 35 95075 36 37 95075 38 Група Hib-MenCY 2,5/5/5: Hib-MenCY (2,5/5/5) + Infanrix penta Група Hib-MenCY 5/10/10: Hib-MenCY (5/10/10) + Infanrix penta Група Hib-MenCY 5/5/5: Hib-MenCY (5/5/5) + lnfanrix penta Група Hib-MenC: Hib-Men (5/5) + Infanrix hexa Група Menjugate: Menjugate + Infanrix penta N = число суб'єктів з результатами, що відповідають вимогам. % = процент суб'єктів з концентрацією/титром у встановлених межах СГК/Т: середній геометричний довірчий інтервал 95% (95% СІ) концентрації/титру LL = Нижче обмеження; UL = Вище обмеження Висновок Кон'югати полісахаридів MenС та MenY продукували гарну імунну реакцію в усіх суб'єктах із 100% суб'єктів, що виявляють реакції вище 0,3мкг/мл проти MenС та MenY. Приклад 6 - Фаза II клінічне випробування порівняння трьох композицій MenACWY-ТТ з вакциною з олігосахаридним кон'югатом Meningitec MenC-CRM197. Цей приклад описує фазу II, відкритого (частково-сліпого), рандомізованого, з контрольованими межами доз дослідження для оцінення імуногенності трьох відмінних композицій вакцини GlaxoSmithKline Biological's менінгококових з кон'югатом правцевого анатоксину серогруп А, С, W135, Y (MenACWY-TT) при порівнянні з вакциною з кон'югатом олігосахарид MenC-CRM197 (Meningitec), уведеним як одна доза дітям віком 12-14 місяців. Клінічне випробування було відкритим (частково подвійно-сліпим*), контрольованим, багатоцентровим дослідженням, у котрому підхожі суб'єкти віком 12-14 місяців були рандомізоване (1:1:1:1) до одної з чотирьох паралельних груп з 50 суб'єктів для отримання одиничної первинної дози при візиті 1 таким чином: Форма 1Т: MenACWY-TT у дозі 2,5 мкг MenА полісахариду, кон'югованого з правцевим анатоксином (ТТ), 2,5 мкг полісахариду MenС, кон'югованого з ТТ, 2,5 мкг полісахариду MenW, кон'югованого з ТТ та 2,5 мкг полісахариду MenY, кон'югованого з ТТ. Форма 2Т: MenACWY-TT у дозі 5 мкг полісахариду MenА, кон'югованого з ТТ, 5 мкг полісахариду MenС, кон'югованого з ТТ, 5 мкг полісахариду MenW, кон'югованого з ТТ та 5 мкг полісахариду MenY, кон'югованого з ТТ. Форма 3Т: MenACWY-TT у дозі 2,5 мкг полісахариду MenА, кон'югованого з ТТ, 10 мкг полісахариду MenС, кон'югованого з ТТ, 2,5 мкг полісаха риду MenW, кон'югованого з ТТ та 2,5 мкг полісахариду MenY, кон'югованого з ТТ. Контроль Т: 10 мкг олігосахариду MenС, кон'югованого з 12,5-25 мкг CRM197 (Meningitec). Три відмінні композиції MenACWY-TT були призначеними у подвійно-сліпому режимі. Режим/ділянка вакцинації: одинична вакцини доза була призначеною внутрішньом'язово у лівий дельтовидний м'яз при візиті 1 (Місяць дослідження 0) згідно з рандомізованим призначенням. Усі вакцини-кандидати постачали як ліофілізовану гранулу у монодозовій склянці (0,5 мл після відтворювання із застосуванням як розріджувачу фізіологічного розчину). Імуногенність. Вимір титрів/концентрацій антитіл проти антигенних компонентів менінгококових вакцин у зразках крові, отриманих перед дослідження дози вакцини (Місяць 0) та приблизно через один місяць після дослідження дози вакцини (Місяць 1) від усіх суб'єктів. Визначення титрів бактерицидних антитіл проти серогруп А, С, W-135 та Υ N. meningitidis (SBA-MenA, SBA-MenC, SBAMenW та SBA-MenY) бактерицидним тестуванням (відсічка для випробувань: розбавлення 1:8 та 1:128) та ELISA-вимір антитіл проти серогруп А, С, W-135 та Υ N. meningitidis (анті-PSA. анті-PSC, анті-PSW та анті-PSY, відсічка для випробувань 0,3 мкг/мл та 2 мкг/мл), та правцевого анатоксину (анті-правцева, відсічка для випробування 0,1 М-од./мл). Результати Реакція антитіла у термінах проценту респондерів SBA-MenA, SBA-MenC, SBA-MenW та SBAMenY через один місяць після вакцинації (первинна кінцева точка) є показаною у таблиці 8. Реакцію визначають як більше, ніж 4-кратне збільшення або рівне ньому для серопозитивних суб'єктів, або сероконверсії для серонегативних суб'єктів перед вакцинацією. 39 95075 40 Таблиця 9 показує числа суб'єктів, що досягають титрів SBA зверх точок відсічки 1:8 та 1:126, а також СГТ. Вакцинація усіма трьома композиціями ACWY-TT-кон'югату полісахариду призводила до гарної SBA-реакції проти MenA, MenC, MenW та MenY з 95-100% суб'єктів з титрами більш, ніж 1:8. Зокрема, композиції кон'югатів полісахаридів 5/5/5/5 та 2,5/10/2,5/2,5 продукували вищу реак 41 95075 42 цію проти MenС, ніж вакцина з олігосахаридом Meningitic, як показано вищою пропорцією суб'єк тів, що мали титр більше, ніж 1:128 та дані для СГТ. Усі три композиції вакцини з ACWY-TTкон'югатом полісахариду продукували гарну імунну реакцію проти MenA, MenC, MenW та MenY з між 93% та 100% суб'єктів, що досягали титрів, більших, ніж 0,3 мкг/мл. Вищі дані для СГК були досягнутими, застосовуючи композиції вакцин з ACWY-TT-кон'югатом полісахариду 5/5/5/5 та 2/5/10/2,5/2,5, при порівнянні із Meningitec. Приклад 7 - порівняння імуногенності природних та зменшених за розміром кон'югатів полісахаридів MenY Миші (самиці DBA/2 віком 6-8 тижнів) отримували дві ін'єкції, з проміжком 2 тижні, PSY-TT підшкірним шляхом. Зразки крові були узятими через 14 діб після другої ін'єкції для проведення анті-PSY ELISA та SBA, застосовуючи штам S1975 MenY. На ін'єкцію миші отримували 1 мкг РSY-ТT(ліо-неадсорбовану композицію). Кон'югати, описані у таблиці 11, були застосованими. Результати Результати (Фіг. 1) показують тенденцію у напрямі вищої імуногенності для отриманих кон'югатів, застосовуючи зменшені за розміром PSY. Фіг. 1А показує результати СГК, отримані у ELISA для імунної сироватки, підвищеної відносно кон'югатів, отриманих з природним MenY (ENYTT012), мікрофлюїдизованим MenY - 40 циклів (ENYTT014) та мікрофлюїдизованим MenY 20 циклів (ENYTT015 біс). Вищі значення СГК були отриманими там, де MenY-TT було отримано з мікрофлюїдизованого полісахариду MenY. Подібні результати були отриманими, коли імунні сироватки були оціненими за допомогою SBA-випробування (Фіг. 1В). З іншого боку вищі значення СГТ були досягнутими, застосовуючи кон'югати, отримані з мікрофлюїдизованого полісахариду MenY. 43 Комп’ютерна верстка О. Гапоненко 95075 Підписне 44 Тираж 24 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП ―Український інститут промислової власності‖, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601