Терапевтичний dll4-зв’язувальний білок

Реферат: Винахід належить до DLL4-зв'язувального білка, що є антитілом, антитілом з пересадженими CDR, гуманізованим антитілом, з високою афінністю, яке нейтралізує активність DLL4 та/або VEGF, а також до застосування вказаного білка у приготуванні лікарського засобу і фармацевтичної композиції для лікування захворювань, пов'язаних з DLL4. UA 112743 C2 (12) UA 112743 C2 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Перехресне посилання на споріднені заявки По даній заявці вимагається пріоритет по попередній заявці США № 61/309494, зареєстрованій 2 березня 2010 року, повний зміст якої включений в цей опис як посилання. Список послідовностей Дана заявка містить список послідовностей, що надається в форматі ASCII за допомогою EFS-Web і включений, таким чином, як посилання в повному обсязі. Вказана копія ASCII, створена 24 лютого 2011 року, названа 10920WOO1.txt, і її розмір становить 111426 байтів. Галузь винаходу Даний винахід стосується розробки і застосування DLL4-зв'язувальних білків в інгібуванні, профілактиці і/або лікуванні злоякісних новоутворень, пухлин, інших ангіогенеззалежних захворювань, ангіогенезнезалежних захворювань, дегенерації жовтої плями і захворювань, пов'язаних з віковою дегенерацією жовтої плями, які відрізняються аномальною експресією або активністю DLL4. Передумови винаходу Міжклітинні взаємодії необхідні для багатьох біологічних процесів, таких як диференціювання, проліферація і гомеостаз. Однією системою, використовуваною широким діапазоном еукаріот, є шлях передачі сигналу Notch. Цей шлях, особливо рецептор Notch, також є критичним для ефективного ангіогенезу в пухлині. Таким чином, інгібування функцій рецептора Notch, блокування рецептора Notch і/або блокування шляху передачі сигналу Notch являють собою потенційні стратегії для протипухлинних композицій і способів терапії. Доведено, що низькомолекулярні інгібітори рецептора Notch є токсичними, оскільки вони супресують експресію рецепторів Notch дикого типу в тканині (нормальну) у всьому організмі. Таким чином, різних учасників шляху передачі сигналу Notch потрібно вважати потенційними мішенями для терапевтичних засобів. Лігандом рецептора Notch в судинній системі є дельта 4 або дельта-подібний ліганд 4 (DLL4). DLL4, що широко експресується в судинній системі, є критичним для розвитку судин (Yan et al. Clin. Cancer Res., 13(24):7243-7246 (2007); Shutter et al. Genes Dev., 14(11):1313-1318 (2000); Gale et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(45):15949-15954 (2004); Krebs et al. Genes Dev., 14(11):1343-1352 (2000)). Миші, гетерозиготні по DLL4, гинуть в ембріогенезі внаслідок великих дефектів в розвитку судин (Gale et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(45):15949-15954 (2004); Duarte et al. Genes Dev., 18(20):2474-2478 (2004); Krebs et al. Genes Dev., 18(20):2469-2473 (2004)). Експресію DLL4 можна індукувати за допомогою VEGF (Liu et al. Mol. Cell Biol., 23(1):1425 (2003); Lobov et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104(9):3219-3224 (2007)). Загалом, DLL4 може негативно регулювати передачу сигналу VEGF, частково через пригнічення VEGFR2 і стимуляцію VEGFR1 (Harrington et al. Microvasc. Res., 75(2):144-154 (2008); Suchting et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104(9):3225-3230 (2007)). Точна координація між DLL4 і VEGF необхідна для ефективного ангіогенезу. На доповнення до його фізіологічної ролі, DLL4 піддається позитивній регуляції в кровоносних судинах пухлини (Gale et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(45):15949-15954 (2004); Mailhos et al. Differentiation, 69(2-3):135-144 (2001); Patel et al. Cancer Res., 65(19):8690-8697 (2005); Patel et al. Clin. Cancer Res., 12(16):4836-4844 (2006); Noguera-Troise et al. Nature, 444(7122):1032-1037 (2006)). Блокування DLL4 теоретично інгібує первинний ріст пухлини на множині моделей (Noguera-Troise et al. Nature, 444(7122):1032-1037 (2006); Ridgway et al. Nature, 444(7122):1083-1087 (2006); Scehnet et al. Blood, 109(11):4753-4760 (2007)). Інгібування DLL4 було ефективним навіть проти пухлин, стійких до терапії проти VEGF. Комбіноване інгібування DLL4 і VEGF забезпечувало підвищену протипухлинну активність. Що цікаво, на відміну від інгібування VEGF, що знижує утворення судин пухлини, блокування DLL4 приводить до підвищення щільності судин пухлини, де судини є аномальними, не можуть підтримувати ефективний транспорт речовин кров'ю і, по суті, є нефункціональними. Таким чином, DLL4 представляє потенційну мішень для лікування злоякісних пухлин. У даній галузі існує потреба в терапевтичних засобах, здатних впливати на шлях передачі сигналу DLL4-Notch і, таким чином, інгібувати або навіть попереджати ангіогенез і ріст пухлин. Суть винаходу Винахід стосується білків, що зв'язують DLL4 людини. DLL4-зв'язувальні білки за винаходом включають, як необмежувальні приклади, моноклональні антитіла щура, химерні антитіла, антитіла з пересадженими CDR, гуманізовані антитіла, приматизовані антитіла, афінно зрілі антитіла і їх фрагменти, здатні зв'язувати DLL4 людини. Переважно, зв'язувальний білок, наведений в даному описі, зв'язує DLL4 людини з високою афінністю. Більш переважно, зв'язувальний білок за винаходом здатний нейтралізувати DLL4 людини. Винахід також стосується способів одержання і застосування DLL4-зв'язувальних білків. 1 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Один з аспектів винаходу стосується зв'язувального білка, здатного зв'язувати DLL4 людини, де зв'язувальний білок містить щонайменше одну амінокислотну послідовність, вибрану з групи амінокислотних послідовностей, що складається з SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:160, SEQ ID NO:161, SEQ ID NO:162, SEQ ID NO:163 і SEQ ID NO:164. Аспект даного винаходу стосується зв'язувального білка, що містить антигензв'язувальний домен, де зв'язувальний білок здатний зв'язувати DLL4 людини і вказаний антигензв'язувальний домен містить щонайменше одну або більше (тобто дві, три, чотири, п'ять або шість) CDR, де: CDR-H1 вибрана з групи, що складається з: X1-X2-X3-X4-X5 (SEQ ID NO:151), де X1 є N, Н або Y; X2 є F; X3 є Р; X4 є M; X5 є А або S; залишків 31-35 SEQ ID NO:157 (CDR-H1 38H12); залишків 31-35 SEQ ID NO:161 (CDR-H1 37D10); залишків 31-35 SEQ ID NO:163 (CDR-H1 32C7); залишків 31-35 SEQ ID NO:165 (CDR-H1 14G1); залишків 31-35 SEQ ID NO:167 (CDR-H1 14A11); залишків 31-35 SEQ ID NO:169 (CDR-H1 15D6); залишків 31-35 SEQ ID NO:171 (CDR-H1 VH.1 1A11); залишків 31-35 SEQ ID NO:172 (CDR-H1 VH.1a 1A11); залишків 31-35 SEQ ID NO:173 (CDR-H1 VH.1b 1A11); залишків 31-35 SEQ ID NO:174 (CDR-H1 VH.2a 1A11); залишків 31-35 SEQ ID NO:179 (CDR-H1 VH.1 38H12); залишків 31-35 SEQ ID NO:180 (CDR-H1 VH.1а 38H12); залишків 31-35 SEQ ID NO:181 (CDR-H1 VH.1b 38H12); залишків 31-35 SEQ ID NO:182 (CDR-H1 VH.2a 38H12); залишків 31-35 SEQ ID NO:187 (CDR-H1 h1A11VH.1); залишків 31-35 SEQ ID NO:188 (CDR-H1 h1A11.A6); залишків 31-35 SEQ ID NO:189 (CDR-H1 h1A11.A8); залишків 31-35 SEQ ID NO:190 (CDR-H1 h1A11.C6); залишків 31-35 SEQ ID NO:191 (CDR-H1 h1A11.A11); залишків 31-35 SEQ ID NO:192 (CDR-H1 h1A11.B5); залишків 31-35 SEQ ID NO:193 (CDR-H1 h1A11.E12); залишків 31-35 SEQ ID NO:194 (CDR-H1 h1A11.G3); залишків 31-35 SEQ ID NO:195 (CDR-H1 h1A11.F5) і залишків 31-35 SEQ ID NO:196 (CDR-H1 h1A11.H2); CDR-H2 вибрана з групи, що складається з: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17 (SEQ ID NO:152), де X1 є Т або S; X2 є I; X3 є S; X4 є S або G; X5 є S; X6 є D; X7 є G, А, D, S або Е; X8 є Т або W; X9 є Т, Р або А; X10 є Y, S, Т або N; X11 є Y або I; X12 є R або G; X13 є D; X14 є S; X15 є V; X16 є K; і X17 є G; залишків 50-66 SEQ ID NO:157 (CDR-H2 38H12); залишків 50-68 SEQ ID NO:161 (CDR-H2 37D10); 2 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 залишків 50-66 SEQ ID NO:163 (CDR-H2 32C7); залишків 50-66 SEQ ID NO:165 (CDR-H2 14G1); залишків 50-66 SEQ ID NO:167 (CDR-H2 14A11); залишків 50-66 SEQ ID NO:169 (CDR-H2 15D6); залишків 50-66 SEQ ID NO:171 (CDR-H2 VH.1 1A11); залишків 50-66 SEQ ID NO:172 (CDR-H2 VH.1a 1A11); залишків 50-66 SEQ ID NO:173 (CDR-H2 VH.1b 1A11); залишків 50-66 SEQ ID NO:174 (CDR-H2 VH.2a 1A11); залишків 50-66 SEQ ID NO:179 (CDR-H2 VH.1 38H12); залишків 50-66 SEQ ID NO:180 (CDR-H2 VH.1а 38H12); залишків 50-66 SEQ ID NO:181 (CDR-H2 VH.1b 38H12); залишків 31-35 SEQ ID NO:182 (CDR-H2 VH.2a 38H12); залишків 50-66 SEQ ID NO:187 (CDR-H2 h1A11VH.1); залишків 50-66 SEQ ID NO:188 (CDR-H2 h1A11.A6); залишків 50-66 SEQ ID NO:189 (CDR-H2 h1A11.A8); залишків 50-66 SEQ ID NO:190 (CDR-H2 h1A11.C6); залишків 50-66 SEQ ID NO:191 (CDR-H2 h1A11.A11); залишків 50-66 SEQ ID NO:192 (CDR-H2 h1A11.B5); залишків 50-66 SEQ ID NO:193 (CDR-H2 h1A11.E12); залишків 50-66 SEQ ID NO:194 (CDR-H2 h1A11.G3); залишків 50-66 SEQ ID NO:195 (CDR-H2 h1A11.F5) і залишків 50-66 SEQ ID NO:196 (CDR-H2 h1A11.H2); CDR-H3 вибрана з групи, що складається з: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 (SEQ ID NO:153), де X1 є G; X2 є Y; X3 є Y; X4 є N; X5 є S; X6 є Р; X7 є F; X8 є А; і X9 є Y, F або S; залишків 99-107 SEQ ID NO:157 (CDR-H3 38H12); залишків 101-111 SEQ ID NO:161 (CDR-H3 37D10); залишків 99-105 SEQ ID NO:163 (CDR-H3 32C7); залишків 99-105 SEQ ID NO:165 (CDR-H3 14G1); залишків 99-110 SEQ ID NO:167 (CDR-H3 14A11); залишків 99-110 SEQ ID NO:169 (CDR-H3 15D6); залишків 99-107 SEQ ID NO:171 (CDR-H3 VH.1 1A11); залишків 99-107 SEQ ID NO:172 (CDR-H3 VH.1a 1A11); залишків 99-107 SEQ ID NO:173 (CDR-H3 VH.1b 1A11); залишків 99-107 SEQ ID NO:174 (CDR-H3 VH.2a 1A11); залишків 99-107 SEQ ID NO:179 (CDR-H3 VH.1 38H12); залишків 99-107 SEQ ID NO:180 (CDR-H3 VH.1а 38H12); залишків 99-107 SEQ ID NO:181 (CDR-H3 VH.1b 38H12); залишків 99-107 SEQ ID NO:182 (CDR-H3 VH.2a 38H12); залишків 99-107 SEQ ID NO:187 (CDR-H3 h1A11VH.1); залишків 99-107 SEQ ID NO:188 (CDR-H3 h1A11.A6); залишків 99-107 SEQ ID NO:189 (CDR-H3 h1A11.A8); залишків 99-107 SEQ ID NO:190 (CDR-H3 h1A11.C6); залишків 99-107 SEQ ID NO:191 (CDR-H3 h1A11.A11); залишків 99-107 SEQ ID NO:192 (CDR-H3 h1A11.B5); залишків 99-107 SEQ ID NO:193 (CDR-H3 h1A11.E12); залишків 99-107 SEQ ID NO:194 (CDR-H3 h1A11.G3); залишків 99-107 SEQ ID NO:195 (CDR-H3 h1A11.F5) і залишків 99-107 SEQ ID NO:196 (CDR-H3 h1A11.H2); CDR-L1 вибрана з групи, що складається з: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11 (SEQ ID NO:154), де X1 є R; 3 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 X2 є А; X3 є S; X4 є Е або Q; X5 є D або Е; X6 є I; X7 є Y або W; X8 є S, I, Y, N або R; X9 є N; X10 є L; і X11 є А; залишків 24-34 SEQ ID NO:158 (CDR-L1 38H12); залишків 24-34 SEQ ID NO:162 (CDR-L1 37D10); залишків 24-34 SEQ ID NO:164 (CDR-L1 32C7); залишків 24-34 SEQ ID NO:166 (CDR-L1 14G1); залишків 23-37 SEQ ID NO:168 (CDR-L1 14A11); залишків 23-37 SEQ ID NO:170 (CDR-L1 15D6); залишків 24-34 SEQ ID NO:175 (CDR-L1 VL.1 1A11); залишків 24-34 SEQ ID NO:176 (CDR-L1 VL.1a 1A11); залишків 24-34 SEQ ID NO:177 (CDR-L1 VL.1b 1A11); залишків 24-34 SEQ ID NO:178 (CDR-L1 VL.2a 1A11); залишків 24-34 SEQ ID NO:183 (CDR-L1 VL.1 38H12); залишків 24-34 SEQ ID NO:184 (CDR-L1 VL.1a 38H12); залишків 24-34 SEQ ID NO:185 (CDR-L1 VH.1b 38H12); залишків 24-34 SEQ ID NO:186 (CDR-L1 VL.2a 38H12); залишків 24-34 SEQ ID NO:197 (CDR-L1 h1A11VL.1); залишків 24-34 SEQ ID NO:198 (CDR-L1 h1A11.A2); залишків 24-34 SEQ ID NO:199 (CDR-L1 h1A11.A12); залишків 24-34 SEQ ID NO:200 (CDR-L1 h1A11.A7); залишків 24-34 SEQ ID NO:201 (CDR-L1 h1A11.B4); залишків 24-34 SEQ ID NO:202 (CDR-L1 h1A11.B5) і залишків 24-34 SEQ ID NO:203 (CDR-L1 h1A11.E12); CDR-L2 вибрана з групи, що складається з: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEQ ID NO:155), де X1 є D; X2 є Т; X3 є N або S; X4 є N, D, S, I, Y або V; X5 є L; X6 є А; і X7 є D; залишків 50-56 SEQ ID NO:158 (CDR-L2 38H12); залишків 50-56 SEQ ID NO:162 (CDR-L2 37D10); залишків 50-56 SEQ ID NO:164 (CDR-L2 32C7); залишків 50-56 SEQ ID NO:166 (CDR-L2 14G1); залишків 53-59 SEQ ID NO:168 (CDR-L2 14A11); залишків 53-59 SEQ ID NO:170 (CDR-L2 15D6); залишків 50-56 SEQ ID NO:175 (CDR-L2 VL.1 1A11); залишків 50-56 SEQ ID NO:176 (CDR-L2 VL.1a 1A11); залишків 50-56 SEQ ID NO:177 (CDR-L2 VL.1b 1A11); залишків 50-56 SEQ ID NO:178 (CDR-L2 VL.2a 1A11); залишків 50-56 SEQ ID NO:183 (CDR-L2 VL.1 38H12); залишків 50-56 SEQ ID NO:184 (CDR-L2 VL.1a 38H12); залишків 50-56 SEQ ID NO:185 (CDR-L2 VH.1b 38H12); залишків 50-56 SEQ ID NO:186 (CDR-L2 VL.2a 38H12); залишків 50-56 SEQ ID NO:197 (CDR-L2 h1A11VL.1); залишків 50-56 SEQ ID NO:198 (CDR-L2 h1A11.A2); залишків 50-56 SEQ ID NO:199 (CDR-L2 h1A11.A12); залишків 50-56 SEQ ID NO:200 (CDR-L2 h1A11.A7); залишків 50-56 SEQ ID NO:201 (CDR-L2 h1A11.B4); залишків 50-56 SEQ ID NO:202 (CDR-L2 h1A11.B5) і 4 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 залишків 50-56 SEQ ID NO:203 (CDR-L2 h1A11.E12); і CDR-L3 вибрана з групи, що складається з: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 (SEQ ID NO:156), де X1 є Q; X2 є Q; X3 є Y; X4 є N, D або Т; X5 є N, Y або W; X6 є Y або V; X7 є Р; X8 є Р; і X9 є Т; залишків 89-97 SEQ ID NO:158 (CDR-L3 38H12); залишків 89-97 SEQ ID NO:162 (CDR-L3 37D10); залишків 89-97 SEQ ID NO:164 (CDR-L3 32C7); залишків 89-98 SEQ ID NO:166 (CDR-L3 14G1); залишків 92-100 SEQ ID NO:168 (CDR-L3 14A11); залишків 92-100 SEQ ID NO:170 (CDR-L3 15D6); залишків 89-97 SEQ ID NO:175 (CDR-L3 VL.1 1A11); залишків 89-97 SEQ ID NO:176 (CDR-L3 VL.1a 1A11); залишків 89-97 SEQ ID NO:177 (CDR-L3 VL.1b 1A11); залишків 89-97 SEQ ID NO:178 (CDR-L3 VL.2a 1A11); залишків 89-97 SEQ ID NO:183 (CDR-L3 VL.1 38H12); залишків 89-97 SEQ ID NO:184 (CDR-L3 VL.1a 38H12); залишків 89-97 SEQ ID NO:185 (CDR-L3 VH.1b 38H12); залишків 89-97 SEQ ID NO:186 (CDR-L3 VL.2a 38H12); залишків 89-97 SEQ ID NO:197 (CDR-L3 h1A11VL.1); залишків 89-97 SEQ ID NO:198 (CDR-L3 h1A11.A2); залишків 89-97 SEQ ID NO:199 (CDR-L3 h1A11.A12); залишків 89-97 SEQ ID NO:200 (CDR-L3 h1A11.A7); залишків 89-97 SEQ ID NO:201 (CDR-L3 h1A11.B4); залишків 89-97 SEQ ID NO:202 (CDR-L3 h1A11.B5) і залишків 89-97 SEQ ID NO:203 (CDR-L3 h1A11.E12). Переважно, DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить щонайменше одну CDR, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з: залишків 31-35 SEQ ID NO:157 (CDR-H1 38H12); залишків 50-66 SEQ ID NO:157 (CDR-H2 38H12); залишків 99-107 SEQ ID NO:157 (CDR-H3 38H12); залишків 24-34 SEQ ID NO:158 (CDRL1 38H12); залишків 50-56 SEQ ID NO:158 (CDR-L2 38H12); залишків 89-97 SEQ ID NO:158 (CDR-L3 38H12); залишків 31-35 SEQ ID NO:159 (CDR-H1 1A11); залишків 50-66 SEQ ID NO:159(CDR-H2 1A11); залишків 99-107 SEQ ID NO:159 (CDR-H3 1A11); залишків 24-34 SEQ ID NO:160 (CDR-L1 1A11); залишків 50-56 SEQ ID NO:160 (CDR-L2 1A11); залишків 89-97 SEQ ID NO:160 (CDR-L3 1A11); залишків 31-35 SEQ ID NO:161 (CDR-H1 37D10); залишків 50-68 SEQ ID NO:161 (CDR-H2 37D10); залишків 101-111 SEQ ID NO:161 (CDR-H3 37D10); залишків 24-34 SEQ ID NO:162 (CDR-L1 37D10); залишків 50-56 SEQ ID NO:162 (CDR-L2 37D10); залишків 89-97 SEQ ID NO:162 (CDR-L3 37D10); залишків 31-35 SEQ ID NO:163 (CDR-H1 32C7); залишків 50-66 SEQ ID NO:163 (CDR-H2 32C7); залишків 99-105 SEQ ID NO:163 (CDR-H3 32C7); залишків 24-34 SEQ ID NO:164 (CDR-L1 32C7); залишків 50-56 SEQ ID NO:164 (CDR-L2 32C7); залишків 89-98 SEQ ID NO:164 (CDR-L3 32C7); залишків 31-35 SEQ ID NO:165 (CDR-H1 14G1); залишків 50-66 SEQ ID NO:165 (CDR-H2 14G1); залишків 99-105 SEQ ID NO:165 (CDR-H3 14G1); залишків 24-34 SEQ ID NO:166 (CDR-L1 14G1); залишків 50-56 SEQ ID NO:166 (CDR-L2 14G1); залишків 89-98 SEQ ID NO:166 (CDR-L3 14G1); залишків 31-35 SEQ ID NO:167 (CDR-H1 14A11); залишків 50-66 SEQ ID NO:167 (CDR-H2 14A11); залишків 99-110 SEQ ID NO:167 (CDR-H3 14A11); залишків 2337 SEQ ID NO:168 (CDR-L1 14A11); залишків 53-59 SEQ ID NO:168 (CDR-L2 14A11); залишків 92-100 SEQ ID NO:168 (CDR-L3 14A11); залишків 31-35 SEQ ID NO:169 (CDR-H1 15D6); залишків 50-66 SEQ ID NO:169 (CDR-H2 15D6); залишків 99-110 SEQ ID NO:169 (CDR-H3 15D6); залишків 23-37 SEQ ID NO:170 (CDR-L1 15D6); залишків 53-59 SEQ ID NO:170 (CDR-L2 15D6); залишків 92-100 SEQ ID NO:170 (CDR-L3 15D6); залишків 31-35 SEQ ID NO:171 (CDR-H1 VH.1 1A11); залишків 50-66 SEQ ID NO:171 (CDR-H2 VH.1 1A11); залишків 99-107 SEQ ID NO:171 (CDR-H3 VH.1 1A11); залишків 31-35 SEQ ID NO:172 (CDR-H1 VH.1a 1A11); залишків 50-66 SEQ ID NO:172 (CDR-H2 VH.1a 1A11); залишків 99-107 SEQ ID NO:172 (CDR-H3 VH.1a 1A11); 5 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 залишків 31-35 SEQ ID NO:173 (CDR-H1 VH.1b 1A11); залишків 50-66 SEQ ID NO:173 (CDR-H2 VH.1b 1A11); залишків 99-107 SEQ ID NO:173 (CDR-H3 VH.1b 1A11); залишків 31-35 SEQ ID NO:174 (CDR-H1 VH.2a 1A11); залишків 50-66 SEQ ID NO:174 (CDR-H2 VH.2a 1A11); залишків 99-107 SEQ ID NO:174 (CDR-H3 VH.2a 1A11); залишків 24-34 SEQ ID NO:175 (CDR-L1 VL.1 1A11); залишків 50-56 SEQ ID NO:175 (CDR-L2 VL.1 1A11); залишків 89-97 SEQ ID NO:175 (CDRL3 VL.1 1A11); залишків 24-34 SEQ ID NO:176 (CDR-L1 VL.1a 1A11); залишків 50-56 SEQ ID NO:176 (CDR-L2 VL.1a 1A11); залишків 89-97 SEQ ID NO:176 (CDR-L3 VL.1a 1A11); залишків 2434 SEQ ID NO:177 (CDR-L1 VL.1b 1A11); залишків 50-56 SEQ ID NO:177 (CDR-L2 VL.1b 1A11); залишків 89-97 SEQ ID NO:177 (CDR-L3 VL.1b 1A11); залишків 24-34 SEQ ID NO:178 (CDR-L1 VL.2a 1A11); залишків 50-56 SEQ ID NO:178 (CDR-L2 VL.2a 1A11); залишків 89-97 SEQ ID NO:178 (CDR-L3 VL.2a 1A11); залишків 31-35 SEQ ID NO:179 (CDR-H1 VH.1 38H12); залишків 50-66 SEQ ID NO:179 (CDR-H2 VH.1 38H12); залишків 99-107 SEQ ID NO:179 (CDR-H3 VH.1 38H12); залишків 31-35 SEQ ID NO:180 (CDR-H1 VH.1а 38H12); залишків 50-66 SEQ ID NO:180 (CDR-H2 VH.1а 38H12); залишків 99-107 SEQ ID NO:180 (CDR-H3 VH.1а 38H12); залишків 31-35 SEQ ID NO:181 (CDR-H1 VH.1b 38H12); залишків 50-66 SEQ ID NO:181 (CDR-H2 VH.1b 38H12); залишків 99-107 SEQ ID NO:181 (CDR-H3 VH.1b 38H12); залишків 31-35 SEQ ID NO:182 (CDRH1 VH.2a 38H12); залишків 50-66 SEQ ID NO:182 (CDR-H2 VH.2a 38H12); залишків 99-107 SEQ ID NO:182 (CDR-H3 VH.2a 38H12); залишків 24-34 SEQ ID NO:183 (CDR-L1 VL.1 38H12); залишків 50-56 SEQ ID NO:183 (CDR-L2 VL.1 38H12); залишків 89-97 SEQ ID NO:183 (CDR-L3 VL.1 38H12); залишків 24-34 SEQ ID NO:184 (CDR-L1 VL.1a 38H12); залишків 50-56 SEQ ID NO:184 (CDR-L2 VL.1a 38H12); залишків 89-97 SEQ ID NO:184 (CDR-L3 VL.1a 38H12); залишків 24-34 SEQ ID NO:185 (CDR-L1 VL.1b 38H12); залишків 50-56 SEQ ID NO:185 (CDR-L2 VL.1b 38H12); залишків 89-97 SEQ ID NO:185 (CDR-L3 VL.1b 38H12); залишків 24-34 SEQ ID NO:186 (CDR-L1 VL.2a 38H12); залишків 50-56 SEQ ID NO:186 (CDR-L2 VL.2a 38H12); залишків 89-97 SEQ ID NO:186 (CDR-L3 VL.2a 38H12); залишків 31-35 SEQ ID NO:187 (CDR-H1 h1A11VH.1), залишків 50-66 SEQ ID NO:187 (CDR-H2 h1A11VH.1); залишків 99-107 SEQ ID NO:187 (CDR-H3 h1A11VH.1); залишків 31-35 SEQ ID NO:188 (CDR-H1 h1A11.A6), залишків 50-66 SEQ ID NO:188 (CDR-H2 h1A11.A6); залишків 99-107 SEQ ID NO:188 (CDR-H3 h1A11.A6); залишків 31-35 SEQ ID NO:189 (CDR-H1 h1A11.A8), залишків 50-66 SEQ ID NO:189 (CDR-H2 h1A11.A8); залишків 99107 SEQ ID NO:189 (CDR-H3 h1A11.A8); залишків 31-35 SEQ ID NO:190 (CDR-H1 h1A11.C6), залишків 50-66 SEQ ID NO:190 (CDR-H2 h1A11.C6); залишків 99-107 SEQ ID NO:190 (CDR-H3 h1A11.C6); залишків 31-35 SEQ ID NO:191 (CDR-H1 h1A11.A11), залишків 50-66 SEQ ID NO:191 (CDR-H2 h1A11.A11); залишків 99-107 SEQ ID NO:191 (CDR-H3 h1A11.A11); залишків 31-35 SEQ ID NO:192 (CDR-H1 h1A11.B5), залишків 50-66 SEQ ID NO:192 (CDR-H2 h1A11.B5); залишків 99107 SEQ ID NO:192 (CDR-H3 h1A11.B5); залишків 31-35 SEQ ID NO:193 (CDR-H1 h1A11.E12), залишків 50-66 SEQ ID NO:193 (CDR-H2 h1A11.E12); залишків 99-107 SEQ ID NO:193 (CDR-H3 h1A11.E12); залишків 31-35 SEQ ID NO:194 (CDR-H1 h1A11.G3), залишків 50-66 SEQ ID NO:194 (CDR-H2 h1A11.G3); залишків 99-107 SEQ ID NO:194 (CDR-H3 h1A11.G3); залишків 31-35 SEQ ID NO:195 (CDR-H1 h1A11.F5), залишків 50-66 SEQ ID NO:195 (CDR-H2 h1A11.F5); залишків 99107 SEQ ID NO:195 (CDR-H3 h1A11.F5); залишків 31-35 SEQ ID NO:196 (CDR-H1 h1A11.H2), залишків 50-66 SEQ ID NO:196 (CDR-H2 h1A11.H2); залишків 99-107 SEQ ID NO:196 (CDR-H3 h1A11.H2); залишків 24-34 SEQ ID NO:197 (CDR-L1 h1A11VL.1), залишків 50-56 SEQ ID NO:197 (CDR-L2 h1A11VL.1); залишків 89-97 SEQ ID NO:197 (CDR-L3 h1A11VL.1); залишків 24-34 SEQ ID NO:198 (CDR-L1 h1A11.A2), залишків 50-56 SEQ ID NO:198 (CDR-L2 h1A11.A2); залишків 8997 SEQ ID NO:198 (CDR-L3 h1A11.A2); залишків 24-34 SEQ ID NO:199 (CDR-L1 h1A11.A12), залишків 50-56 SEQ ID NO:199 (CDR-L2 h1A11.A12); залишків 89-97 SEQ ID NO:199 (CDR-L3 h1A11.A12); залишків 24-34 SEQ ID NO:200 (CDR-L1 h1A11.A7), залишків 50-56 SEQ ID NO:200 (CDR-L2 h1A11.A7); залишків 89-97 SEQ ID NO:200 (CDR-L3 h1A11.A7); залишків 24-34 SEQ ID NO:201 (CDR-L1 h1A11.B4), залишків 50-56 SEQ ID NO:201 (CDR-L2 h1A11.B4); залишків 89-97 SEQ ID NO:201 (CDR-L3 h1A11.B4); залишків 24-34 SEQ ID NO:202 (CDR-L1 h1A11.B5), залишків 50-56 SEQ ID NO:202 (CDR-L2 h1A11.B5); залишків 89-97 SEQ ID NO:202 (CDR-L3 h1A11.B5); залишків 24-34 SEQ ID NO:203 (CDR-L1 h1A11.E12), залишків 50-56 SEQ ID NO:203 (CDR-L2 h1A11.E12) і залишків 89-97 SEQ ID NO:203 (CDR-L3 h1A11.E12). У варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить щонайменше три CDR, наведених в даному описі (вище або нижче). У необмежувальному прикладі DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить три CDR, наведених в даному описі, де три CDR є CDR-H1, CDR-H2 і CDR-H3, як наведено в даному описі. У іншому необмежувальному прикладі DLL4зв'язувальний білок за винаходом містить три CDR, наведених в даному описі, де три CDR є CDR-L1, CDR-L2 і CDR-L3, як наведено в даному описі. У варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить одну або більше CDR, 6 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 наведених в даному описі (вище або нижче), наприклад одну, дві, три, чотири, п'ять або шість CDR, наведених в даному описі. У переважному варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить шість CDR, наведених в даному описі, наприклад CDR-H1, CDR-H2, CDRH3, CDR-L1, CDR-L2 і CDR-L3, як наведено в даному описі. У іншому варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить три CDR, вибраних з набору CDR варіабельного домену, де набір CDR варіабельного домену вибраний з групи наборів CDR варіабельного домену, що складається з: набору CDR VH 38Н12 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:157, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:157, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:157; набору CDR VL 38Н12 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:158, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:158, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:158; набору CDR VH 1А11 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:159, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:159, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:159; набору CDR VL 1А11 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:160, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:160, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:160; набору CDR VH 37D10 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:161, CDR-H2: залишки 50-68 SEQ ID NO:161, CDR-H3: залишки 101-111 SEQ ID NO:161; набору CDR VL 37D10 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:162, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:162, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:162; набору CDR VH 32C7 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:163, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:163, CDR-H3: залишки 99-105 SEQ ID NO:163; набору CDR VL 32C7 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:164, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:164, CDR-L3: залишки 89-98 SEQ ID NO:164; набору CDR VH 14G1 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:165, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:165, CDR-H3: залишки 99-105 SEQ ID NO:165; набору CDR VL 14G1 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:166, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:166, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:166; набору CDR VH 14A11 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:167, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:167, CDR-H3: залишки 99-110 SEQ ID NO:167; набору CDR VL 14A11 CDR-L1: залишки 23-37 SEQ ID NO:168, CDR-L2: залишки 53-59 SEQ ID NO:168, CDR-L3: залишки 92-100 SEQ ID NO:168; набору CDR VH 15D6 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:169, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:169, CDR-H3: залишки 99-110 SEQ ID NO:169; набору CDR VL 15D6 7 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 CDR-L1: залишки 23-37 SEQ ID NO:170, CDR-L2: залишки 53-59 SEQ ID NO:170, CDR-L3: залишки 92-100 SEQ ID NO:170; набору CDR VH VH.1 1A11 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:171, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:171, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:171; набору CDR VH VH.1a 1A11 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:172, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:172, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:172; набору CDR VH VH.1b 1A11 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:173, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:173, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:173; набору CDR VH VH.2a 1A11 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:174, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:174, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:174; набору CDR VL VL.1 1A11 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:175, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:175, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:175; набору CDR VL VL.1a 1A11 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:176, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:176, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:176; набору CDR VL VL.1b 1A11 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:177, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:177, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:177; набору CDR VL VL.2a 1A11 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:178, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:178, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:178; набору CDR VH VH.1 38H12 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:179, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:179, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:179; набору CDR VH VH.1a 38H12 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:180, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:180, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:180; набору CDR VH VH.1b 38H12 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:181, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:181, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:181; набору CDR VH VH.2a 38H12 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:182, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:182, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:182; набору CDR VL VL.1 38H12 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:183, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:183, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:183; набору CDR VL VL.1a 38H12 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:184, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:184, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:184; набору CDR VL VL.1b 38H12 8 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:185, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:185, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:185; набору CDR VL VL.2a 38H12 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:186, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:186, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:186; набору CDR VH hA11VH.1 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:187, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:187, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:187; набору CDR VH hA11.A6 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:188, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:188, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:188; набору CDR VH hA11.A8 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:189, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:189, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:189; набору CDR VH hA11.C6 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:190, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:190, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:190; набору CDR VH hA11.A11 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:191, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:191, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:191; набору CDR VH hA11.B5 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:192, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:192, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:192; набору CDR VH hA11.E12 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:193, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:193, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:193; набору CDR VH hA11.G3 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:194, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:194, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:194; набору CDR VH hA11.F5 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:195, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:195, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:195; набору CDR VH hA11.H2 CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO:196, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO:196, CDR-H3: залишки 99-107 SEQ ID NO:196; набору CDR VL h1A11VL.1 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:197, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:197, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:197; набору CDR VL h1A11.A2 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:198, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:198, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:198; набору CDR VL h1A11.A12 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:199, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:199, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:199; набору CDR VL h1A11.A7 9 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:200, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:200, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:200; набору CDR VL h1A11.B4 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:201, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:201, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:201; набору CDR VL h1A11.B5 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:202, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:202, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:202; і набору CDR VL h1A11.E12 CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO:203, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO:203, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO:203. У варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок містить CDR щонайменше з двох наборів CDR варіабельного домену з вказаної вище групи. У іншому варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить три CDR, вибрані з будь-якого набору VH трьох CDR у вказаній вище групі, і три CDR, вибрані з будьякого набору VL трьох CDR у вказаній вище групі. У іншому варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить набір трьох CDR VH, як описано вище, і набір трьох CDR VL, як описано вище, з пари наборів CDR VH і VL, вибраних з групи, що складається з: набору CDR VH 38H12 і набору CDR VL 38H12, набору CDR VH 1A11 і набору CDR VL 1A11, набору CDR VH 37D10 і набору CDR VL 37D10, набору CDR VH 32C7 і набору CDR VL 32C7, набору CDR VH 14G1 і набору CDR VL 14G1, набору CDR VH 14A11 і набору CDR VL 14A11, набору CDR VH 15D6 і набору CDR VL 15D6, набору CDR VH VH.1 1A11 і набору CDR VL VL.1 1A11, набору CDR VH VH.1 1A11 і набору CDR VL VL.1a 1A11, набору CDR VH VH.1 1A11 і набору CDR VL VL.1b 1A11, набору CDR VH VH.1 1A11 і набору CDR VL VL.2a 1A11, набору CDR VH VH.1a 1A11 і набору CDR VL VL.1 1A11, набору CDR VH VH.1a 1A11 і набору CDR VL VL.1a 1A11, набору CDR VH VH.1a 1A11 і набору CDR VL VL.1b 1A11, набору CDR VH VH.1a 1A11 і набору CDR VL VL.2a 1A11, набору CDR VH VH.1b 1A11 і набору CDR VL VL.1 1A11, набору CDR VH VH.1b 1A11 і набору CDR VL VL.1a 1A11, набору CDR VH VH.1b 1A11 і набору CDR VL VL.1b 1A11, набору CDR VH VH.1b 1A11 і набору CDR VL VL.2a 1A11, набору CDR VH VH.2a 1A11 і набору CDR VL VL.1 1A11, набору CDR VH VH.2a 1A11 і набору CDR VL VL.1a 1A11, набору CDR VH VH.2a 1A11 і набору CDR VL VL.1b 1A11, набору CDR VH VH.2a 1A11 і набору CDR VL VL.2a 1A11, набору CDR VH VH.1 38H12 і набору CDR VL VL.1 38H12, набору CDR VH VH.1 38H12 і набору CDR VL VL.1a 38H12, набору CDR VH VH.1 38H12 і набору CDR VL VL.1b 38H12, набору CDR VH VH.1 38H12 і набору CDR VL VL.2a 38H12, набору CDR VH VH.1a 38H12 і набору CDR VL VL.1 38H12, набору CDR VH VH.1a 38H12 і набору CDR VL VL.1a 38H12, набору CDR VH VH.1a 38H12 і набору CDR VL VL.1b 38H12, набору CDR VH VH.1a 38H12 і набору CDR VL VL.2a 38H12, набору CDR VH VH.1b 38H12 і набору CDR VL VL.1 38H12, набору CDR VH VH.1b 38H12 і набору CDR VL VL.1a 38H12, набору CDR VH VH.1b 38H12 і набору CDR VL VL.1b 38H12, набору CDR VH VH.1b 38H12 і набору CDR VL VL.2a 38H12, набору CDR VH VH.2a 38H12 і набору CDR VL VL.1 38H12, 10 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 набору CDR VH VH.2a 38H12 і набору CDR VL VL.1a 38H12, набору CDR VH VH.2a 38H12 і набору CDR VL VL.1b 38H12, набору CDR VH VH.2a 38H12 і набору CDR VL VL.2a 38H12, набору CDR VH h1A11.A6 і набору CDR VL h1A11VL.1, набору CDR VH h1A11.C6 і набору CDR VL h1A11VL.1, набору CDR VH h1A11.A11 і набору CDR VL h1A11VL.1, набору CDR VH h1A11.A8 і набору CDR VL h1A11VL.1, набору CDR VH h1A11VH.1 і набору CDR VL h1A11.B4, набору CDR VH h1A11VH.1 і набору CDR VL h1A11.A7, набору CDR VH h1A11VH.1 і набору CDR VL h1A11.A12, набору CDR VH h1A11VH.1 і набору CDR VL h1A11.A2, набору CDR VH h1A11.B5 і набору CDR VL h1A11.B5, набору CDR VH h1A11.E12 і набору CDR VL h1A11.E12, набору CDR VH h1A11.G3 і набору CDR VL h1A11.E12, набору CDR VH h1A11.F5 і набору CDR VL h1A11.E12 і набору CDR VH h1A11.H2 і набору CDR VL h1A11.E12. У переважному варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок має DLL4антигензв'язувальний домен (або ділянку зв'язування), що містить шість CDR, де CDR-H1, CDRH2 і CDR-H3 знаходяться у варіабельній області важкого ланцюга (VH), і CDR-L1, CDR-L2 і CDR-L3 знаходяться у варіабельній області легкого ланцюга (VL), і де з'єднання областей VH і VL утворює функціональний DLL4-антигензв'язувальний домен DLL4-зв'язувального білка. У додатковому необмежувальному прикладі цього варіанта здійснення DLL4-зв'язувальний білок, що має два DLL4-антигензв'язувальних домени, містить два набори областей VH і VL і, таким чином, містить дванадцять CDR. У іншому варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок має DLL4-антигензв'язувальний домен, що містить шість CDR, де CDR-H1, CDR-H2 і CDR-H3 знаходяться у варіабельній області важкого ланцюга (VH), і CDR-L1, CDR-L2 і CDR-L3 знаходяться у варіабельній області легкого ланцюга (VL), і де інші послідовності в кожній варіабельній області складають каркасну область (FR) таким чином, що кожна CDR знаходиться між двома послідовностями FR-областей всього для чотирьох послідовностей FR, тобто FR1, FR2, FR3 і FR4. У цьому варіанті здійснення розташування послідовностей FR і CDR у варіабельній області являє собою FR1-CDR1-FR2CDR2-FR3-CDR3-FR4. У цьому варіанті здійснення зв'язувальний домен, утворений з'єднанням області VH і області VL, містить вісім послідовностей FR і шість CDR. DLL4-зв'язувальні білки за винаходом включають антитіла з пересадженими CDR, де пересаджують одну або більше областей CDR VH і/або VL антитіла одних видів (донорних видів) і заміщують відповідними CDR VH і/або VL антитіла інших (акцепторних) видів з використанням рекомбінантних способів, доступних в цій галузі. Прикладом молекул донорних видів є моноклональне антитіло щура проти DLL4 людини, наведене в даному описі, і прикладом молекул акцепторних видів є молекула імуноглобуліну гамма (IgG) людини, де послідовності FR людини областей VH і VL молекули IgG людини є акцепторними каркасними послідовностями людини, що одержують пересаджені CDR від донорного моноклонального антитіла щура. Акцепторні каркасні послідовності людини одержаного антитіла з пересадженими CDR можна додатково піддавати мутагенезу для поліпшення однієї або більше властивостей антитіла з пересадженими CDR. Як необмежувальні приклади, один або більше залишків однієї або більше послідовностей FR антитіла з пересадженими CDR можна піддавати мутагенезу для поліпшення афінності зв'язування з DLL4 або зниження імуногенності антитіла з пересадженими CDR у людини. У варіанті здійснення винаходу DLL4-зв'язувальний білок, що містить одну або більше описуваних вище CDR, додатково містить акцепторну каркасну послідовність людини. Переважно, DLL4-зв'язувальний білок містить одну або більше (наприклад, одну, дві, три, чотири, п'ять, шість, сім або вісім) акцепторних каркасних послідовностей людини. Акцепторна каркасна послідовність людини, присутня в DLL4-зв'язувальному білку за винаходом, може містити один або більше амінокислотних залишків, підданих зворотному мутагенезу в один або більше відповідних амінокислотних залишків, присутніх в моноклональному антитілі щура, що зв'язує DLL4, і/або підданих мутагенезу в одному або більше амінокислотних залишках, що зменшують або усувають ділянку(и) для небажаних реакцій, наприклад для зменшення або усунення ділянки небажаного глікозилування і/або ділянки небажаного утворення N-кінцевого піроглутамату, і/або ділянки потенційно зниженого ризику імуногенності. У варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок, що містить одну або більше описуваних 11 UA 112743 C2 5 10 15 вище CDR, додатково містить одну або більше (наприклад, будь-яку одну, дві, три, чотири, п'ять, шість, сім або вісім) акцепторних каркасних послідовностей людини, вибраних з групи акцепторних каркасних послідовностей людини в таблицях 3 і 4 нижче. Одна або більше акцепторних каркасних послідовностей людини з таблиць 3 і 4, присутніх в DLL4-зв'язувальному білку за винаходом, можуть додатково містити один або більше амінокислотних залишків, підданих зворотному мутагенезу в один або більше відповідних амінокислотних залишків, присутніх в моноклональному антитілі щура, що зв'язує DLL4, і/або підданих мутагенезу в одну або більше амінокислот, що зменшують або усувають ділянку(и) для небажаної реакції, наприклад для зменшення або усунення ділянки небажаного глікозилування і/або ділянки небажаного утворення N-кінцевого піроглутамату, і/або ділянки потенційно зниженого ризику імуногенності. У іншому варіанті здійснення винахід стосується DLL4-зв'язувального білка, що містить одну або більше описуваних вище CDR, де зв'язувальний білок також містить одну або більше (наприклад, будь-яку одну, дві, три, чотири, п'ять, шість, сім або вісім на зв'язувальний домен) акцепторних каркасних послідовностей людини, вибраних з будь-якої каркасної послідовності, присутньої в послідовності варіабельної області, що вибрана з групи, яка складається з: 20 25 30 35 40 У ще одному варіанті здійснення винаходу DLL4-зв'язувальний білок додатково містить одну або більше (наприклад, будь-яку одну, дві, три, чотири, п'ять, шість, сім або вісім) акцепторних каркасних послідовностей, вибраних з групи, що складається з: каркаса важкого ланцюга-1 (H-FR1): E-V-Q-L-V-E-S-G-G-G-L-V-Q-P-G-G-S-L-R-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-X30 (SEQ ID NO:143), де X30 є S, R або G; каркаса важкого ланцюга-2 (H-FR2): W-V-R-Q-A-P-G-K-G-L-E-W-V-A (SEQ ID NO:144); каркаса важкого ланцюга-3 (H-FR3): R-F-T-I-S-R-D-N-A-K-X11-S-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-X31-R (SEQ ID NO:145), де X11 є Ν або S; і X31 є А або S; каркаса важкого ланцюга-4 (H-FR4): W-G-Q-G-T-L-V-T-V-S-S (SEQ ID NO:146); каркаса легкого ланцюга-1 (L-FR1): D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S-L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C (SEQ ID NO:147); каркаса легкого ланцюга-2 (L-FR2): W-Y-Q-Q-K-P-G-K-X9-P-K-L-L-I-X15 (SEQ ID NO:148), де X9 є А або S; і X15 є F або Y; каркаса легкого ланцюга-3 (L-FR3): G-V-P-S-R-F-S-G-S-G-S-G-T-D-X15-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C (SEQ ID NO:149), де X15 є F або S; і каркаса легкого ланцюга-4 (L-FR4): F-G-Q-G-T-K-L-E-I-K (SEQ ID NO:150). У іншому варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок, що містить одну або більше описуваних вище CDR, також містить описувану вище акцепторну каркасну послідовність 12 UA 112743 C2 5 10 15 людини, де акцепторна каркасна послідовність людини містить щонайменше одну заміну амінокислоти в каркасній області в ключовому залишку, де ключовий залишок вибраний з групи, що складається із залишку, суміжного з CDR, залишку в ділянці глікозилування, рідкого залишку, залишку, здатного взаємодіяти з DLL4 людини, залишку, здатного взаємодіяти з CDR, канонічного залишку, контактного залишку між варіабельною областю важкого ланцюга і варіабельною областю легкого ланцюга, залишку в зоні Верньє і залишку в області, що перекривається між CDR1 варіабельної області важкого ланцюга, що визначається по Chothia, і першою каркасною областю важкого ланцюга, що визначається по Kabat. У іншому варіанті здійснення акцепторна каркасна послідовність людини DLL4зв'язувального білка, наведена в даному описі, містить щонайменше одну заміну амінокислоти в каркасній області, де амінокислотна каркасна послідовність є щонайменше на 65 % ідентичною акцепторній каркасній послідовності зародкової лінії людини і містить щонайменше 70 амінокислотних залишків, ідентичних акцепторній каркасній послідовності зародкової лінії людини. У іншому варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить консенсусну послідовність варіабельного домену людини. У варіанті здійснення винахід стосується DLL4-зв'язувального білка, що містить акцепторну каркасну послідовність людини, де зв'язувальний білок містить щонайменше один варіабельний домен з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з: 20 У іншому варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить два або більше описуваних вище варіабельних доменів. У переважному варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить два варіабельних домени, де два варіабельних домени мають амінокислотні послідовності, вибрані з групи, що складається з: 25 13 UA 112743 C2 14 UA 112743 C2 У варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить щонайменше один варіабельний домен з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з: 5 15 UA 112743 C2 У іншому варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить два варіабельних домени, де два варіабельних домени мають амінокислотні послідовності, вибрані з групи, що складається з: 5 16 UA 112743 C2 17 UA 112743 C2 5 10 15 20 У варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить два варіабельних домени з амінокислотними послідовностями, вибраними з групи, що складається з: SEQ ID NO:188 (h1A11.A6 VH) і SEQ ID NO:197 (h1A11VL.1), SEQ ID NO:190 (h1A11.C6 VH) і SEQ ID NO:197 (h1A11VL.1) і SEQ ID NO:191 (h1A11.A11 VH) і SEQ ID NO:197 (h1A11.VL.1). У варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом містить два варіабельних домени з амінокислотними послідовностями SEQ ID NO:181 (VH.1b 38H12) і SEQ ID NO:185 (VL.1b 38H12). За винаходом варіабельні домени важкого ланцюга (VH) і варіабельні домени легкого ланцюга (VL) будь-якого з DLL4-зв'язувальних білків, наведених в даному описі, також можна перетасовувати з використанням доступних в цій галузі рекомбінантних способів для одержання і селекції додаткових DLL4-зв'язувальних білків, що містять різні комбінації доменів VH і VL, наведені в даному описі. У варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом зв'язує DLL4 людини (huDLL4) і щонайменше DLL4 одного іншого виду. Більш переважно, DLL4-зв'язувальний білок, наведений в даному описі, зв'язує DLL4 людини і DLL4, вибраний з групи, що складається з DLL4 яванського макака (DLL4 яванського макака, cynoDLL4), DLL4 миші (muDLL4), DLL4 щура і їх комбінацій. У іншому варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок, наведений в даному описі, здатний блокувати взаємодію DLL4 з білком Notch. Переважно, білок Notch вибраний з групи, що складається з Notch-1, Notch-2, Notch-3, Notch-4 і їх комбінацій. У варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок, наведений в даному описі, здатний 18 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 модулювати, інгібувати або нейтралізувати одну або більше біологічних функцій DLL4 людини. Більш переважно, DLL4-зв'язувальний білок за винаходом здатний модулювати, інгібувати або нейтралізовувати активність DLL4, вибраного з групи, що складається з DLL4 людини, DLL4 яванського макака, DLL4 мавпи, DLL4 щура і їх комбінацій. У додатковому варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок, наведений в даному описі, здатний інгібувати активність VEGFR2, активність VEGFR1 або активність і VEGFR2, і VEGFR1. У варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок, наведений в даному описі, здатний інгібувати нормальний ангіогенез. У варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом має константу швидкості 2 -1 -1 3 -1 прямої реакції (Kon) з DLL4 щонайменше приблизно 10 М с ; щонайменше приблизно 10 М с 1 4 -1 -1 5 -1 -1 ; щонайменше приблизно 10 М с ; щонайменше приблизно 10 М с або щонайменше 6 -1 -1 приблизно 10 М с , як вимірюють за допомогою поверхневого плазмонного резонансу. Переважно, зв'язувальний білок за винаходом має константу швидкості прямої реакції (Kon) з 2 -1 -1 3 -1 -1 3 -1 -1 4 -1 -1 4 -1 -1 5 -1 -1 5 DLL4 від 10 М с до 10 М с ; від 10 М с до 10 М с ; від 10 М с до 10 М с або від 10 -1 -1 6 -1 -1 М с до 10 М с , як вимірюють за допомогою поверхневого плазмонного резонансу. У іншому варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом має константу -3 -1 -4 швидкості зворотної реакції (Koff) з DLL4 не більше приблизно 10 с ; не більше приблизно 10 -1 -5 -1 -6 -1 с ; не більше приблизно 10 с або не більше приблизно 10 с , як вимірюють за допомогою поверхневого плазмонного резонансу. Переважно, зв'язувальний білок за винаходом має -3 -1 -4 -1 -4 -1 -5 -1 константу швидкості зворотної реакції (Koff) з DLL4 від 10 с до 10 с ; від 10 с до 10 с або -5 -1 -6 -1 від 10 с до 10 с , як вимірюють за допомогою поверхневого плазмонного резонансу. У іншому варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок за винаходом має константу -7 -8 дисоціації (KD) для DLL4 не більше приблизно 10 M; не більше приблизно 10 M; не більше -9 -10 -11 приблизно 10 M; не більше приблизно 10 M; не більше приблизно 10 M; не більше -12 -13 приблизно 10 M або не більше 10 M. Переважно, зв'язувальний білок за винаходом має -7 -8 -8 -9 -9 -10 константу дисоціації (KD) для DLL4 від 10 Μ до 10 M; від 10 M до 10 Μ; від 10 Μ до 10 Μ; -10 -11 -11 -12 -12 -13 від 10 до 10 Μ; від 10 Μ до 10 Μ або від 10 Μ до 10 Μ. У варіанті здійснення винахід стосується конструкції антитіла, що містить описуваний вище DLL4-зв'язувальний білок і лінкерний поліпептид або константний домен імуноглобуліну. У переважному варіанті здійснення конструкція антитіла за винаходом вибрана з групи, що складається з: молекули імуноглобуліну, моноклонального антитіла, химерного антитіла, антитіла з пересадженими CDR, гуманізованого антитіла, Fab, Fab', F(ab') 2, Fv, зв'язаних дисульфідним зв'язком Fv, scFv, однодоменного антитіла, діатіла, поліспецифічного антитіла, антитіла з подвійною специфічністю і біспецифічного антитіла. У переважному варіанті здійснення конструкція антитіла за винаходом містить константний домен важкого ланцюга імуноглобуліну, вибраний з групи, що складається з константного домену IgM людини, константного домену IgG1 людини, константного домену IgG2 людини, константного домену IgG3 людини, константного домену IgG4 людини, константного домену IgE людини і константного домену IgA людини. У іншому варіанті здійснення конструкція антитіла за винаходом містить константну область імуноглобуліну, вибрану з групи, що складається з константної області важкого ланцюга імуноглобуліну гамма-1 (IgG1) (такої як SEQ ID NO:3), мутантної константної області важкого ланцюга IgG1 (такої як SEQ ID NO:4), константної області легкого каппа-ланцюга імуноглобуліну (такої як SEQ ID NO:5), константної області легкого лямбда-ланцюга імуноглобуліну (такої як SEQ ID NO:6) і їх комбінацій. У іншому варіанті здійснення конструкція антитіла глікозилована. Переважно, глікозилування відбувається по профілю глікозилування людини. У варіанті здійснення винахід стосується кон'югата антитіла, що містить конструкцію антитіла, наведену в даному описі, кон'юговану з засобом. Переважно, засіб вибраний з групи, що складається з: засобу для візуалізації, терапевтичного засобу, цитотоксичного засобу і молекули імуноадгезії. У переважному варіанті здійснення засоби візуалізації вибрані з групи, що складається з: радіоактивної мітки, ферменту, флуоресцентної мітки, люмінесцентної мітки, біолюмінесцентної мітки, магнітної мітки і біотину. Більш переважно, засіб для візуалізації є 3 14 35 90 99 111 125 131 радіоактивною міткою, вибраною з групи, що складається з: H, C, S, Y, Tc, In, I, I, 177 166 153 Lu, Ho і Sm. У переважному варіанті здійснення терапевтичний або цитотоксичний засіб вибраний з групи, що складається з: антиметаболіту, алкілувального засобу, антибіотика, фактора росту, цитокіну, антиангіогенного засобу, антимітотичного засобу, антрацикліну, токсину і проапоптотичного засобу. В іншому варіанті здійснення описувані вище DLL4-зв'язувальний білок, конструкція антитіла або кон'югат антитіла існують у вигляді кристала. Переважно, кристал є фармацевтичним 19 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 кристалом з контрольованим вивільненням без носія. В іншому варіанті здійснення такий кристалізований зв'язувальний білок, кристалізована конструкція антитіла або кристалізований кон'югат антитіла має більший час напівжиття in vivo, ніж його розчинний еквівалент. У переважному варіанті здійснення кристалізований зв'язувальний білок, кристалізована конструкція антитіла або кристалізований кон'югат антитіла після кристалізації зберігає біологічну активність розчинної або некристалічної форми зв'язувального білка, конструкції антитіла або кон'югата антитіла. У варіанті здійснення винахід стосується виділеної нуклеїнової кислоти, що кодує одну або більше амінокислотних послідовностей DLL4-зв'язувального білка (включаючи будь-яку конструкцію антитіла або кон'югат антитіла), наведеного в даному описі. У переважному варіанті здійснення винахід стосується виділеної нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид, вибраний із групи, що складається з: поліпептиду, що містить варіабельний домен важкого ланцюга, де варіабельний домен важкого ланцюга містить одну або більше з CDR-H1, CDR-H2 і CDR-H3, як описано вище; поліпептиду, що містить варіабельний домен легкого ланцюга, де варіабельний домен легкого ланцюга містить одну або більше з CDR-L1, CDR-L2 і CDR-L3, як описано вище; і комбінації обох поліпептидів. Один з аспектів винаходу стосується виділеної нуклеїнової кислоти, що кодує DLL4зв'язувальний білок, конструкцію антитіла, DLL4-зв'язувальний кон'югат антитіла або його DLL4зв'язувальну частину. Особливо переважною є виділена нуклеїнова кислота, що кодує поліпептид, вибраний із групи, яка складається з: поліпептиду, що містить варіабельний домен важкого ланцюга, де варіабельний домен важкого ланцюга містить описувані вище CDR-H1, CDR-H2 або CDR-H3; поліпептиду, що містить варіабельний домен легкого ланцюга, де варіабельний домен легкого ланцюга містить CDR-L1, CDR-L2 або CDR-L3, як описано вище; або комбінації обох поліпептидів. Додатковий варіант здійснення винаходу стосується вектора, що містить виділену нуклеїнову кислоту, наведену в даному описі. У переважному варіанті здійснення вектор вибраний із групи, що складається з: pcDNA, pTT (Durocher et al. Nucl. Acids Res., 30(2e9):1-9 (2002)), pTT3 (pTT з додатковими множинними ділянками клонування), pEFBOS (Mizushima et al. Nucl. Acids. Res., 18(17):5322 (1990)), pBV, pJV і pBJ. Інший аспект винаходу стосується клітини-хазяїна, трансформованої описуваним вище вектором. Клітина-хазяїн може бути прокаріотичною або еукаріотичною клітиною. Переважна прокаріотична клітина-хазяїн являє собою Escherichia coli. Переважно, еукаріотична клітина вибрана з групи, що складається з: клітини найпростіших, клітини тварини, рослинної клітини і клітини гриба. Більш переважно, клітина-хазяїн являє собою клітину ссавця, включаючи, як необмежувальні приклади, клітини CHO і COS. Переважна клітина гриба являє собою Saccharomyces cerevisiae. Переважна клітина комахи являє собою клітину Sf9. Інший аспект винаходу стосується способу одержання зв'язувального білка, що зв'язує DLL4 людини, який включає етап культивування будь-якої з описуваних вище клітин-хазяїнів у середовищі для культивування в умовах, достатніх для одержання зв'язувального білка, що зв'язує DLL4 людини. Один з варіантів здійснення стосується композиції для вивільнення DLL4-зв'язувального білка за винаходом, де композиція містить сполуку, що містить кристалізований DLL4зв'язувальний білок, кристалізовану конструкцію антитіла або кристалізований кон'югат антитіла, як описано вище, і інгредієнт, і додатково щонайменше один полімерний носій. Переважно, полімерний носій є полімером, вибраним з одного або більше із групи, що складається з: полі(акрилової кислоти), полі(ціаноакрилатів), полі(амінокислот), полі(ангідридів), полі(депсипептиду), полі(складних ефірів), полі(молочної кислоти), співполімеру молочної і гліколевої кислоти або PLGA, полі(b-гідроксибутирату), полі(капролактону), полі(діоксанону); полі(етиленгліколю), полі(гідроксипропіл)метакриламіду, полі[(органо)фосфазену], полі(ортоефірів), полі(вінілового спирту), полі(вінілпіролідону), співполімерів малеїнового ангідриду й алкілвінілового простого ефіру, поліолів-плюроників, альбуміну, альгінату, целюлози і похідних целюлози, колагену, фібрину, желатину, гіалуронової кислоти, олігосахаридів, глікозаміногліканів, сульфатованих полісахаридів, їх сумішей і співполімерів. Переважно, інгредієнт вибраний із групи, що складається з альбуміну, сахарози, трегалози, лактитолу, желатину, гідроксипропіл-β-циклодекстрину, метоксиполіетиленгліколю і поліетиленгліколю. Інший варіант здійснення стосується способу лікування ссавця, який включає етап введення ссавцю ефективної кількості композиції, що містить кристалізований DLL4-зв'язувальний білок, кристалізовану конструкцію антитіла або кристалізовані кон'югати антитіла, описувані вище. Винахід також стосується фармацевтичної композиції, яка містить DLL4-зв'язувальний білок, 20 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 як описано вище (включаючи конструкцію антитіла або кон'югат антитіла, як описано вище), і фармацевтично прийнятний носій. У додатковому варіанті здійснення фармацевтична композиція містить щонайменше один додатковий засіб. Додатковий засіб може бути терапевтичним засобом для лікування порушення, при якому DLL4 завдає шкоди. Переважно, фармацевтична композиція за винаходом містить додатковий засіб, вибраний із групи, що складається з: терапевтичного засобу; засобу для візуалізації; протипухлинного засобу; хіміотерапевтичного засобу; інгібітору ангіогенезу; антитіла проти VEGF; антитіла проти EGFR; антитіла проти cMet; антитіла проти Erb3; антитіла проти HER2; антитіла проти CD20; молекулипастки для VEGF; інгібітору кіназ; блокатора костимуляторних молекул; антитіла проти B7.2; CTLA4-Ig; блокатора молекул адгезії; антитіла проти селектину E; антитіла проти селектину L; антитіла проти цитокіну або його функціонального фрагмента; антитіла проти IL-18; антитіла проти TNF; антитіла проти IL-6; метотрексату; кортикостероїду; циклоспорину; рапаміцину; FK506; ДНК-алкілувального засобу; цисплатину; карбоплатину; антитубулінового засобу; паклітакселу; доцетакселу; доксорубіцину; гемцитабіну; гемзару; антрацикліну; адріаміцину; інгібітору топоізомерази I; інгібітору топоізомерази II; 5-фторурацилу (5-FU); лейковорину; іринотекану; інгібітору тирозинкіназного рецептора; інгібітору апоптозу; інгібітору Bcl2/Bclx; ерлотинібу; гефітинібу; інгібітору COX-2; целекоксибу; циклоспорину; рапаміцину; детектованої мітки або репортерної молекули; антагоніста TNF; протиревматичного засобу; міорелаксанту; наркотичного засобу; аналгезуючого засобу; анестетика; седативного засобу; місцевого анестетика; блокатора нервово-м'язового проведення; протимікробного засобу; протипсоріазного засобу; кортикостероїду; анаболічного стероїду; еритропоетину; засобу для імунізації; імуноглобуліну; імуносупресуючого засобу; гормону росту; лікарського засобу для гормонозамісної терапії; радіофармацевтичного лікарського засобу; антидепресанту; антипсихотичного лікарського засобу; стимулятора; лікарського засобу проти астми; бетаагоніста; інгаляційного стероїду; епінефрину; аналога епінефрину; цитокіну і антагоніста цитокіну. В іншому аспекті винахід стосується способу інгібування активності DLL4 людини, який включає приведення DLL4 людини у контакт з описуваним вище зв'язувальним білком таким чином, що інгібують або нейтралізують DLL4 людини. У спорідненому аспекті винахід стосується способу інгібування активності DLL4 у людини, що страждає порушенням, при якому DLL4 завдає шкоди, який включає введення людині описуваного вище зв'язувального білка таким чином, що у людини інгібують DLL4 людини і досягають лікування. Переважно, порушення вибране з групи, що включає первинні і метастатичні злоякісні новоутворення, включаючи карциноми молочної залози, товстої кишки, прямої кишки, легень, ротоглотки, гортаноглотки, стравоходу, шлунка, підшлункової залози, печінки, жовчного міхура і жовчних проток, тонкого кишечнику, сечовивідних шляхів (включаючи нирки, сечовий міхур і уротелій), жіночої статевої системи (включаючи шийку матки, матку і яєчники, а також хоріокарциному і гестаційну трофобластичну хворобу), чоловічої статевої системи (включаючи передміхурову залозу, сім'яні пухирці, тестикули і герміногенні пухлини), ендокринних залоз (включаючи щитовидну залозу, надниркові залози і гіпофіз) і шкіри, а також гемангіоми, меланоми, саркоми (включаючи виникаючі з кісткової тканини і м'яких тканин, а також саркому Капоші), пухлини головного мозку, нервів, очей і оболонок головного і спинного мозку (включаючи астроцитоми, гліоми, гліобластоми, ретинобластоми, невроми, нейробластоми, шваноми і менінгіоми), солідні пухлини, що виникають зі злоякісних новоутворень гемопоетичної системи, такі як лейкози і лімфоми (ходжкінські і неходжкінські лімфоми), метастази пухлин, неоваскуляризацію очей (включаючи діабетичний амавроз, ретинопатії, вікову дегенерацію жовтої плями і рубеоз), набряк, ревматоїдний артрит, атеросклеротичні бляшки, рефрактерний асцит, псоріаз, панкреатит, полікістоз яєчників (POD), ендометріоз, міому матки, доброякісну гіпертрофію передміхурової залози, T-клітинний гострий лімфобластний лейкоз (T-ALL), церебральну аутосомно-домінантну артеріопатію з підкірковими інфарктами і лейкоенцефалопатією (CADASIL), розсіяний склероз (MS), тетраду Фалло (TOF), синдром Алажіля (AS), дегенерацію жовтої плями і захворювання, пов'язані з віковою дегенерацією жовтої плями, і інші ангіогенезнезалежні і ангіогенеззалежні захворювання, пов'язані з аномальною експресією або активністю DLL4. В іншому аспекті винахід стосується способу лікування пацієнта, що страждає порушенням, при якому DLL4 людини завдає шкоди, який включає етап введення будь-якого з описуваних вище зв'язувальних білків до, одночасно або після введення терапевтично ефективної кількості другого засобу. У переважному варіанті здійснення другий засіб вибраний із групи, що складається з: радіотерапевтичного засобу; протипухлинного засобу; хіміотерапевтичного засобу; ДНК-алкілувального засобу; цисплатину; карбоплатину; антитубулінового засобу; 21 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 паклітакселу; доцетакселу; таксолу; доксорубіцину; гемцитабіну; гемзару; антрацикліну; адріаміцину; інгібітору топоізомерази I; інгібітору топоізомерази II; 5-фторурацилу (5-FU); лейковорину; іринотекану; інгібітору тирозинкіназного рецептора; інгібітору апоптозу; інгібітору Bcl2/Bclx; ерлотинібу; гефітинібу; інгібітору COX-2; целекоксибу; інгібітору кіназ; інгібітору ангіогенезу; антитіла проти VEGF; антитіла проти EGFR; антитіла проти cMet; антитіла проти Erb3; антитіла проти HER2; антитіла проти CD20; молекули-пастки для VEGF (афліберцепту); блокатора костимуляторних молекул; антитіла проти B7.1; антитіла проти B7.2; CTLA4-Ig; блокатора молекул адгезії; антитіла проти LFA-1; антитіла проти селектину E; антитіла проти селектину L; низькомолекулярного інгібітору; антитіла проти цитокіну або його функціонального фрагмента; антитіла проти IL-18; антитіла проти TNF; антитіла проти IL-6; антитіла проти цитокінового рецептора; метотрексату; циклоспорину; рапаміцину; FK506; детектованої мітки або репортера; антагоніста TNF; протиревматичного засобу; міорелаксанту; наркотичного засобу; нестероїдного протизапального засобу (NSAID); аналгезуючого засобу; анестетика; седативного засобу; місцевого анестетика; блокатора нервово-м'язового проведення; протимікробного засобу; протипсоріазного засобу; кортикостероїду; анаболічного стероїду; еритропоетину; засобу для імунізації; імуноглобуліну; імуносупресуючого засобу; гормону росту; лікарського засобу для гормонозамісної терапії; радіофармацевтичного лікарського засобу; антидепресанту; антипсихотичного лікарського засобу; стимулятора; лікарського засобу проти астми; бета-агоніста; інгаляційного стероїду; епінефрину; аналога епінефрину; цитокіну і антагоніста цитокіну. У переважному варіанті здійснення описувані вище фармацевтичні композиції вводять індивідууму щонайменше одним способом, вибраним із групи, що складається з: парентерального, підшкірного, внутрішньом'язового, внутрішньовенного, інтраартеріального, внутрішньосуглобового, внутрішньобронхіального, внутрішньоочеревинного, внутрішньокапсульного, внутрішньохрящового, внутрішньопорожнинного, внутрішньочеревного, внутрішньомозочкового, інтрацеребровентрикулярного, внутрішньотовстокишкового, інтрацервікального, внутрішньошлункового, внутрішньопечінкового, інтраміокардіального, внутрішньокісткового, внутрішньотазового, внутрішньоперикардіального, інтраперитонеального, внутрішньоплеврального, внутрішньопростатичного, внутрішньолегеневого, інтраректального, внутрішньониркового, інтраретинального, внутрішньохребетного, інтраторакального, внутрішньоматкового, інтравезикального, болюсного, вагінального, ректального, букального, сублінгвального, інтраназального і трансдермального введення. Інший аспект винаходу стосується щонайменше одного DLL4-антиідіотипічного антитіла до щонайменше одного DLL4-зв'язувального білка за даним винаходом. Антиідіотипічне антитіло включає будь-який білок або пептид, що містить молекулу, яка містить щонайменше частину молекули імуноглобуліну, як необмежувальні приклади, таку як щонайменше одну область, що визначає комплементарність (CDR), важкого або легкого ланцюга або її частину, що зв'язує ліганд, варіабельну область важкого ланцюга або легкого ланцюга, константну область важкого ланцюга або легкого ланцюга, каркасну область і будь-яку її частину, яку можна вбудовувати в зв'язувальний білок за даним винаходом. Будь-який з множини форматів імунологічних аналізів можна адаптувати для використання DLL4-зв'язувального білка за винаходом для визначення або вимірювання DLL4 у суміші, розчині або біологічному зразку. Такі формати імунологічних аналізів включають, як необмежувальні приклади, радіоімунологічний аналіз (RIA), імунопреципітацію, твердофазний імуноферментний аналіз (ELISA), імуноблотинг (наприклад, вестерн-блотинг), імуностріпи (наприклад, тест-смужки), що містять DLL4-зв'язувальний білок за винаходом, адсорбований або іммобілізований на субстраті, FACS і т. п. Визначення DLL4 з використанням DLL4зв'язувального білка за винаходом можна здійснювати in vitro у суміші, розчині або біологічному зразку. Біологічний зразок, який можна приводити в контакт із зв'язувальним білком за винаходом для визначення або вимірювання DLL4 у зразку, включає, як необмежувальні приклади, сечу, слину, мазок зі слизової оболонки ротової порожнини (букальний, лінгвальний або мазок із зіва), мазок зі шкіри, зскрібок зі шкіри, ректальний мазок, вагінальний мазок, зразок цільної крові, зразок плазми, зразок сироватки, біопсійний матеріал тканини і будь-який інший зразок, одержуваний від індивідуума відомим у цій галузі способом. В іншому варіанті здійснення DLL4-зв'язувальний білок можна використовувати для визначення DLL4 in vivo, такого як різні способи томографії і сканування, включаючи, як необмежувальні приклади, комп'ютерну томографію (КТ), магнітно-резонансну томографію (МРТ) і позитронно-емісійну томографію (ПЕТ). Докладний опис винаходу Даний винахід стосується DLL4-зв'язувальних білків, зокрема антитіл проти DLL4 або їх 22 UA 112743 C2 5 антигензв'язувальних частин, що зв'язують DLL4. Амінокислотна послідовність (SEQ ID NO:1) DLL4 людини представлена в таблиці 1 разом з відповідною кодуючою нуклеотидною послідовністю DLL4 (SEQ ID NO:2). Різні аспекти винаходу стосуються антитіл і фрагментів антитіл, і їх фармацевтичних композицій, а також нуклеїнових кислот, рекомбінантних експресуючих векторів і клітин-хазяїнів для одержання таких антитіл і фрагментів. Способи використання антитіл за винаходом для визначення DLL4 людини або DLL4 миші, способи інгібування активності DLL4 людини або миші і/або VEGFR2 або VEGFR1 людини або миші in vitro або in vivo і способи регуляції експресії генів також включені у винахід. 10 Таблиця 1 Амінокислотна і кодуюча нуклеотидна послідовності DLL4 людини 23 UA 112743 C2 24 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 Якщо інше не зазначено в даному описі, наукові і технічні терміни, використовувані стосовно даного винаходу, повинні мати значення, що звичайно розуміють фахівці в цій галузі. Значення й обсяг термінів повинні бути чіткими, однак у випадку будь-якої прихованої двозначності визначення, що представляються в даному описі, превалюють над будь-яким словниковим або стороннім визначенням. Крім того, якщо інше не передбачено контекстом, терміни в однині повинні включати множину, і терміни в множині повинні включати однину. У цій заявці використання "або" означає "і/або", якщо не зазначено інакше. Крім того, не обмежують використання терміна "включаючи", а також інших форм, таких як "включає" і "включений". Також, терміни, такі як "елемент" або "компонент" включають і елементи, і компоненти, що містять одну одиницю, і елементи, і компоненти, що містять декілька субодиниць, якщо особливо не зазначено інакше. Як правило, використовувані номенклатури і способи культивування клітин і тканин, молекулярної біології, імунології, мікробіології, генетики і хімії білків і нуклеїнових кислот і гібридизації, наведені в даному описі, є тими, котрі добре відомі і загальнозастосовні в цій галузі. Способи за даним винаходом, як правило, здійснюють відповідно до загальноприйнятих добре відомих в цій галузі способів і як описано в різних загальних і більш спеціалізованих джерелах, цитованих і обговорюваних протягом всього даного опису, якщо не зазначено інакше. Ферментативні реакції і способи очищення здійснюють по посібниках виробників, як загальноприйнято здійснюють у цій галузі або як наведено в даному описі. Використовувані номенклатури і лабораторні способи аналітичної хімії, синтетичної органічної хімії і медичної і фармацевтичної хімії, наведені в даному описі, є добре відомими і загальнозастосовними в цій галузі. Для хімічного синтезу, хімічного аналізу, одержання, складання і доставки лікарського засобу і лікування пацієнтів використовують стандартні способи. Для кращого розуміння даного винаходу нижче наводять вибрані терміни. 25 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Як застосовують у даному описі, термін "поліпептид" стосується будь-якого полімерного ланцюга амінокислот. Терміни "пептид" і "білок" використовують взаємозамінно з терміном поліпептид, і вони також стосуються полімерного ланцюга амінокислот. Термін "поліпептид" включає природні або штучні білки, фрагменти білка і поліпептидні аналоги послідовності білка. Поліпептид може бути мономерним або полімерним. Використання терміна "поліпептид" у даному описі призначене для включення поліпептиду і його фрагментів і варіантів (включаючи фрагменти варіантів), якщо не зазначено інакше. У випадку антигенного поліпептиду фрагмент поліпептиду, необов'язково, містить щонайменше один суміжний або нелінійний епітоп поліпептиду. Фахівець у цій галузі може підтверджувати точні границі щонайменше одного фрагмента епітопа. Фрагмент містить щонайменше приблизно 5 суміжних амінокислот, наприклад щонайменше приблизно 10 суміжних амінокислот, щонайменше приблизно 15 суміжних амінокислот або щонайменше приблизно 20 суміжних амінокислот. Варіант поліпептиду наведений у даному описі. Термін "виділений білок" або "виділений поліпептид" означає білок або поліпептид, який, у силу свого походження або джерела одержання, не зв'язаний з природними компонентами, що супроводжують його в його нативному стані; по суті, не містить білки тих же видів; експресований клітинами інших видів; або не існує у природі. Таким чином, поліпептид, хімічно синтезований або синтезований у клітинній системі, що відрізняється від клітини, з якої він походить в природі, буде "виділеним" зі зв'язаних з ним у природі компонентів. Також білок можна одержувати, по суті, таким, що не містить зв'язані з ним у природі компоненти, за допомогою виділення з використанням добре відомих у цій галузі способів очищення білка. Як застосовують у даному описі, термін "виділення" стосується способу одержання хімічних сполук, таких як поліпептид, які, по суті, не містять зв'язані з ними в природі компоненти, за допомогою виділення, наприклад, з використанням добре відомих у цій галузі способів очищення білка. Як застосовують у даному описі, термін "DLL4 людини" (скорочений тут як "hDLL4" або "huDLL4"), включає декілька EGF-подібних доменів і DSL-домен, необхідний для зв'язування рецептора. Термін включає білок, що складає приблизно 74-75 кДа. Структуру і передбачені послідовності ДНК і білка DLL4 людини додатково описують, наприклад, у Shutter et al. Genes & Dev., 4:1313-1318 (2000). Термін "DLL4 людини" призначений для включення рекомбінантного DLL4 людини (rhDLL4), який можна одержувати стандартними способами рекомбінантної експресії. Як застосовують у даному описі стосовно DLL4, "біологічна активність" стосується усіх властивих DLL4 біологічних властивостей. Біологічні властивості DLL4 включають, як необмежувальні приклади, зв'язування рецептора Notch, активацію рецептора Notch, негативну регуляцію передачі сигналу VEGF, репресію VEGFR2 і стимуляцію VEGFR1. Як застосовують у даному описі стосовно взаємодії антитіла, білка або пептиду з другою хімічною сполукою, терміни "специфічне зв'язування" або "специфічно зв'язуючий" означають, що взаємодія залежить від наявності в хімічній сполуці конкретної структури (наприклад, антигенної детермінанти або епітопа); наприклад, антитіло розпізнає і зв'язується з конкретною білковою структурою частіше, ніж з білками взагалі. Якщо антитіло є специфічним до епітопа "A", наявність молекули, що містить епітоп A (або вільний, немічений A),у реакції, що включає мічений "A" і антитіло, буде знижувати кількість міченого A, що зв'язується з антитілом. "Зв'язувальний білок" є мономерним або мультимерним білком, що зв'язується і створює комплекс з партнером по зв'язуванню, який може бути поліпептидом, антигеном, хімічною сполукою або іншою молекулою, або субстратом будь-якого типу. Зв'язувальний білок специфічно зв'язується з партнером по зв'язуванню. Зв'язувальні білки включають антитіла і інші молекули, які містять один або більше антигензв'язувальних доменів, що зв'язуються з молекулою антигену або конкретною ділянкою (епітопом) на молекулі антигену. Зв'язувальний білок включає антитіло або будь-який з його антигензв'язувальних фрагментів і різні форми і похідні антитіл, відомі в цій галузі і описувані нижче. Таким чином, зв'язувальний білок включає, як необмежувальні приклади, антитіло, тетрамерний імуноглобулін, молекулу IgG, молекулу IgG1, моноклональне антитіло, химерне антитіло, антитіло з пересадженими CDR, гуманізоване антитіло, афінно зріле антитіло і фрагменти будь-яких таких антитіл, що зберігають здатність зв'язуватися з антигеном. Як застосовують в даному описі, термін "антитіло" приблизно стосується будь-якої молекули імуноглобуліну (Ig), що складається з чотирьох поліпептидних ланцюгів, двох важких (Н) ланцюгів і двох легких (L) ланцюгів, або будь-якого її функціонального фрагмента, мутанта, варіанта або похідного, що зберігає необхідні для зв'язування епітопа властивості молекули Ig. У цій галузі відомі формати таких мутантів, варіантів або похідних антитіл. Їх необмежувальні 26 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 варіанти здійснення представлені нижче. У повнорозмірному антитілі кожний важкий ланцюг складається з варіабельної області важкого ланцюга (скороченої в даному описі як HCVR або VH) і константної області важкого ланцюга. Константна область важкого ланцюга складається з трьох доменів, CH1, CH2 і CH3. Кожний легкий ланцюг складається з варіабельної області легкого ланцюга (скороченої в даному описі як LCVR або VL) і константної області легкого ланцюга. Константна область легкого ланцюга складається з одного домену CL. Області VH і VL можна додатково поділяти на гіперваріабельні області, звані областями, що визначають комплементарність (CDR), розосередженими серед більш консервативних областей, званих каркасними областями (FR). Кожна VH і VL складається з трьох CDR і чотирьох FR, розташованих від амінокінця до карбоксикінця в наступному порядку: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 і FR4. Молекули імуноглобулінів можуть бути будь-якого типу (наприклад, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA і IgY), класу (наприклад, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 і IgA2) або підкласу. Термін "Fc-область" використовують для визначення С-кінцевої області важкого ланцюга імуноглобуліну, яку можна одержувати розщепленням інтактного антитіла папаїном. Fc-область може являти собою нативну послідовність Fc-області або варіант Fc-області. Fc-область імуноглобуліну, як правило, містить два константних домени, домен CH2 і домен CH3, і, необов'язково, містить домен CH4. У цій галузі відомі заміни амінокислотних залишків в Fcчастині для зміни ефекторної функції антитіла (патенти США №№ 5648260 і 5624821). Fcчастина антитіла опосередковує декілька важливих ефекторних функцій, наприклад стимуляцію цитокінів, ADCC, фагоцитоз, зумовлену комплементом цитотоксичність (CDC) і час напівжиття/швидкість виведення антитіла і комплексів антиген-антитіло. У деяких випадках ці ефекторні функції бажані для терапевтичного антитіла, але в інших випадках можуть бути небажаними або навіть шкідливими, залежно від терапевтичних цілей. Конкретні ізотипи IgG людини, зокрема IgG1 і IgG3, опосередковують ADCC і CDC за допомогою зв'язування FcγR і компонента комплементу C1q, відповідно. Неонатальні Fc-рецептори (FcRn) є критичними компонентами, що визначають час напівжиття циркулюючих антитіл. У іншому варіанті здійснення щонайменше один амінокислотний залишок замінюють в константній області антитіла, наприклад Fc-області антитіла, таким чином, що змінюють ефекторні функції антитіла. Димеризацію двох ідентичних важких ланцюгів імуноглобуліну опосередковує димеризація доменів CH3 і стабілізує дисульфідні зв'язки в шарнірній області (Huber et al. Nature, 264:415420 (1976); Thies et al. J. Mol. Biol, 293:67-79 (1999)). Мутація залишків цистеїну в шарнірних областях для запобігання утворенню дисульфидних зв'язків між важкими ланцюгами буде дестабілізувати димеризацію доменів CH3. Ідентифікують залишки, відповідальні за димеризацію CH3 (Dall'Acqua, Biochem., 37:9266-9273 (1998)). Таким чином, можна одержувати моновалентні напів-Ig. Що цікаво, ці моновалентні молекули напів-Ig виявляють в природі у випадку підкласів IgG і IgA (Seligman, Ann. Immunol., 129:855-70 (1978); Biewenga et al. Clin. Exp. Immunol., 51:395-400 (1983)). Стехіометричний склад FcRn:Ig Fc-область визначають як 2:1 (West et al. Biochem., 39:9698-9708 (2000)), і половини Fc достатньо для опосередковування зв'язування FcRn (Kim et al. Eur. J. Immunol., 24:542-548 (1994)). Мутації з порушенням димеризації домену CH3 можуть не надавати великого несприятливого впливу на його зв'язування з FcRn, оскільки залишки, важливі для димеризації CH3, знаходяться на внутрішній поверхні структури β-листа CH3, в той час як область, відповідальна за зв'язування FcRn, знаходиться на зовнішній поверхні доменів CH2-CH3. Однак молекула напів-Ig може мати конкретні переваги при проникненні в тканину в результаті свого меншого розміру в порівнянні з розміром звичайного антитіла. У одному з варіантів здійснення в константній області зв'язувального білка за винаходом, наприклад Fc-області, замінюють щонайменше один амінокислотний залишок таким чином, що порушують димеризацію важких ланцюгів, приводячи до утворення молекул напів-Ig. Протизапальна активність IgG повністю залежить від сіалування N-зв'язаного глікану Fc-фрагмента IgG. Визначають точну необхідність наявності глікану для протизапальної активності таким чином, що можна одержувати відповідний Fc-фрагмент IgG1, таким чином, одержуючи повністю рекомбінантний, сіалований Fc IgG1 зі значно більшою активністю (Anthony et al. Science, 320:373-376 (2008)). Як застосовують в даному описі, термін "антигензв'язувальна частина" антитіла (або просто "частина антитіла") стосується одного або більше фрагментів антитіла, що зберігають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном (тобто з конкретним епітопом антигену, таким як епітоп DLL4). Показано, що антигензв'язувальну функцію антитіла можуть виконувати фрагменти повнорозмірного антитіла. Такі варіанти здійснення антитіла також можуть являти собою біспецифічні формати, формати з подвійною специфічністю або мультиспецифічні формати, що специфічно зв'язуються з двома або більше різними антигенами (або двома або більше різними 27 UA 112743 C2 5 10 15 20 25 30 35 епітопами одного антигену). Приклади зв'язувальних фрагментів, включених в термін "антигензв'язувальна частина" антитіла, включають (i) Fab-фрагмент, моновалентний фрагмент, що складається з доменів VL, VH, CL і CH1; (ii) F(ab') 2-фрагмент, бівалентний фрагмент, що містить два Fab-фрагменти, зв'язані дисульфідним містком в шарнірній області; (iii) Fdфрагмент, що складається з доменів VH і CH1; (iv) Fv-фрагмент, що складається з доменів VL і VH одного плеча антитіла; (v) dAb-фрагмент (Ward et al. Nature, 341:544-546 (1989); публікація PCT № WO 90/05144 A1), що містить один варіабельний домен; і (vi) виділену область, що визначає комплементарність (CDR). Крім того, хоч два домени Fv-фрагмента, VL і VH, кодують різні гени, їх можна з'єднувати з використанням рекомбінантних способів за допомогою синтетичного лінкера, який дозволяє одержувати їх у вигляді одного білкового ланцюга, в якому області VL і VH складають пару з утворенням моновалентних молекул (відомих як одноланцюжковий Fv (scFv); див., наприклад, Bird et al. Science, 242:423-426 (1988); Huston et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:5879-5883 (1988)). Такі одноланцюжкові антитіла також призначені для включення в термін "антигензв'язувальна частина" антитіла. Також включені інші форми одноланцюжкових антитіл, такі як діатіла. Діатіла є бівалентними, біспецифічними антитілами, в яких домени VH і VL експресуються в одному поліпептидному ланцюгу, але з використанням лінкера, дуже короткого, щоб допускати утворення пари між двома доменами на одному ланцюзі, таким чином, примушуючи домени утворювати пари з комплементарними доменами іншого ланцюга і створюючи дві антигензв'язувальних ділянки (див., наприклад, Holliger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993); Poljak, R. J. Structure, 2:1121-1123 (1994)). Такі антигензв'язувальні частини відомі в цій галузі (див., Kontermann і Dubel eds., Antibody Engineering (Springer-Verlag. New York, 2001), р. 790 (ISBN 3-540-41354-5)). Крім того, одноланцюжкові антитіла також включають "лінійні антитіла", що містять пару тандемних Fvсегментів (VH-CH1-VH-CH1), які разом з комплементарними поліпептидами легкого ланцюга утворюють пару антигензв'язувальних областей (Zapata et al. Protein Eng., 8(10):1057-1062 (1995); і патент США № 5641870). Як застосовують в даному описі, термін "конструкція антитіла" (або "конструкція антитіла проти DLL4") стосується поліпептиду, що містить одну або більше антигензв'язувальних частин за винаходом, зв'язаних з лінкерним поліпептидом або константним доменом імуноглобуліну. Лінкерні поліпептиди містять два або більше амінокислотних залишків, з'єднаних пептидними зв'язками, і їх використовують для з'єднання однієї або більше антигензв'язувальних частин. Такі лінкерні поліпептиди добре відомі в цій галузі (див., наприклад, Holliger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993); Poljak R. J., Structure, 2:1121-1123 (1994)). Константний домен імуноглобуліну стосується константного домену важкого або легкого ланцюга. Амінокислотні послідовності константних доменів важкого ланцюга і легкого ланцюга IgG людини відомі в цій галузі і представлені в таблиці 2. 28