Терапевтичний dll4-зв’язувальний білок

Реферат: Винахід належить до зв'язувального білка, який містить антигензв'язувальний домен, який здатний зв'язуватися з людським DLL4. UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Посилання на споріднені заявки У даній заявці вимагається пріоритет попередньої заявки на патент США № 61/238152, поданої 29 серпня 2009 р., і попередньої заявки на патент США № 61/261728, поданої 16 листопада 2009 р. Галузь, до якої належить винахід Даний винахід стосується одержання і застосування DLL4-зв'язувальних білків з поліпшеними властивостями, і їх використання для пригнічення, попередження і/або лікування ракових захворювань, пухлин і/або інших асоційованих з ангіогенезом захворювань, таких як очна неоваскуляризація, або захворювань, які не асоційовані з ангіогенезом і характеризуються порушенням експресії або активності DLL4, таких як аутоімунні розлади. Попередній рівень техніки Міжклітинні взаємодії необхідні для здійснення множини біологічних процесів, таких як диференціювання, проліферація і гомеостаз. Однією з систем, використовуваних еукаріотами широкого ряду, є шлях передачі сигналу Notch. Цей шлях, зокрема рецептор Notch, також грає важливу роль в функціональному ангіогенезі пухлини. Таким чином, інгібування функції рецептора Notch, блокування рецептора Notch і/або блокування шляху передачі Notch-сигналу є стратегією, яка може бути застосована для одержання протиракових композицій і розробки методів лікування раку. Було встановлено, що невеликі молекули-інгібітори рецептора Notch є токсичними, оскільки вони пригнічують експресію рецептора Notch в тканинах дикого типу (нормальних тканинах) у всьому організмі. Таким чином, різні члени шляху передачі сигналу Notch повинні розглядатися як потенційні мішені для терапії. Лігандом судинної мережі для рецептора Notch є дельта-4 або дельта-подібний ліганд 4 (DLL4). DLL4, який експресується, головним чином, в судинній мережі, грає важливу роль в розвитку судин (Yan et al., Clin. Cancer Res., 13(24): 7243-7246 (2007); Shutter et al., Genes Dev., 14(11): 1313-1318 (2000); Gale et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(45): 15949-15954 (2004); Krebs et al., Genes Dev., 14(11): 1343-1352 (2000)). Миші, гетерозиготні по DLL4, гинуть на стадії ембріонального розвитку, що зумовлено значними порушеннями розвитку судин (Gale et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(45): 15949-15954 (2004); Duarte et al., Genes Dev., 18(20): 24742478 (2004); Krebs et al., Genes Dev., 18(20): 2469-2473 (2004)). Експресія DLL4 може бути індукована VEGF (Liu et al., Mol. Cell Biol, 23(1): 14-25 (2003); Lobov et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104(9): 3219-3224 (2007)). В свою чергу, DLL4 може знижувати передачу сигналу VEGF, частково за допомогою інгібування VEGFR2 і індукування VEGR1 (Harrington et al., Microvasc. Res., 75(2): 144-154 (2008); Suchting et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 104(9): 3225-3230 (2007)). Тонка координація між DLL4 і VEGF грає важливу роль в функціональному ангіогенезі. Крім своєї фізіологічної ролі DLL4 також активується в кровоносних судинах пухлин (Gale et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(45): 15949-15954 (2004); Mailhos et al., Differentiation, 69(2-3): 135-144 (2001); Patel et al., Cancer Res., 65(19): 8690-8697 (2005); Patel et al., Clin. Cancer Res., 12(16): 4836-4844 (2006); Noguera-Troise et al., Nature, 444(7122): 1032-1037 (2006)). Блокування DLL4 приводить до сильного інгібування росту первинної пухлини в багатьох моделях (NogueraTroise et al., Nature, 444(7122): 1032-1037 (2006); Ridgway et al., Nature, 444(7122): 1083-1087 (2006); Scehnet et al., Blood, 109(11): 4753-4760 (2007)). Таке інгібування DLL4 є ефективним навіть стосовно пухлин, резистентних до терапії анти-VEGF антитілами. Комбіноване інгібування DLL4 і VEGF приводить до підвищення протипухлинної активності. Цікаво зазначити, що на відміну від інгібування VEGF, яке знижує утворення пухлинних судин, блокування DLL4 приводить до підвищення щільності судинної мережі пухлини, де вказані судини є аномальними, не можуть забезпечувати ефективне проходження кровотоку і є функціонально неефективними. Таким чином, DLL4 є потенційною мішенню для лікування раку. Тому необхідно одержати такі терапевтичні засоби, які можуть бути націлені на шлях DLL4Notch і тим самим інгібувати цей шлях або навіть запобігати ангіогенезу і росту пухлини. Опис суті винаходу Даний винахід стосується білків, які зв'язуються з DLL4, включаючи антитіла, CDRприщеплені антитіла і їх зв'язувальні фрагменти, що мають здатність зв'язуватися з DLL4. Описаний тут зв'язувальний білок, переважно, зв'язується з DLL4 з високою афінністю. Більш переважно, зв'язувальний білок згідно з винаходом має здатність нейтралізувати DLL4. Даний винахід також стосується способів одержання і застосування DLL4-зв'язувальних білків, включаючи людські DLL4-зв'язувальні білки. Перевага даного винаходу полягає в тому, що він не вимагає одержання гуманізованих DLL4-зв'язувальних білків, що дозволяє уникнути проблем, виникаючих при використанні гуманізованих DLL4-зв'язувальних білків. У одному зі своїх аспектів даний винахід стосується зв'язувального білка, що містить антигензв’язувальний домен, здатний зв'язуватися з людським DLL4, де вказаний 1 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 антигензв’язувальний домен включає щонайменше одну або декілька CDR, вибраних з групи, що складається з: CDR-H1: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEQ ID NO: 99), де: X1 являє собою S або N; X2 являє собою S, G або N; X3 являє собою S, N, Т, G або R; X4 являє собою Y; X5 являє собою Y або Н; X6 являє собою W; і X7 являє собою G; CDR-H2: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16 (SEQ ID NO: 100), де: X1 являє собою D; X2 являє собою I; X3 являє собою Y, N або S; X4 являє собою Y; X5 являє собою Т, N, А, I, S або R; X6 являє собою G; X7 являє собою S, N, Т або G; X8 являє собою Т; X9 являє собою Y; X10 являє собою Y; X11 являє собою N; X12 являє собою Р; X13 являє собою S; X14 являє собою L; X15 являє собою K; і X16 являє собою S, N, D або G; CDR-H3: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11 (SEQ ID NO: 101), де: X1 являє собою Е, Y, F, Q, W, L або А; X2 являє собою D, А, S, G, V, Е або N; X3 являє собою V, M, L, Р або А; X4 являє собою I, А, Р, R, S, K, Q, V, G, M або Е; X5 являє собою L, Y, F або M; X6 являє собою R, G, S, Q або А; X7 являє собою G; X8 являє собою G, А або S; X9 являє собою S, А, L, V, R або G; X10 являє собою D; і X11 являє собою Y, D, S, N, Н, Е, R, L, Р, С, I, M, Т, Q або K; CDR-L1: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11 (SEQ ID NO: 102), де: X1 являє собою S; X2 являє собою G; X3 являє собою Q, Е або D; X4 являє собою R, S, G, M, K, L або Т; X5 являє собою L; X6 являє собою G; X7 являє собою D або Е; X8 являє собою K; X9 являє собою Y; X10 являє собою А або V; і X11 являє собою S; CDR-L2: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEQ ID NO: 103), де: X1 являє собою Е або Q; X2 являє собою D; X3 являє собою S, L, Т, А, Е або F; X4 являє собою K, Т, Е, N, Q, S або M; X5 являє собою R; X6 являє собою Р; і X7 являє собою S; і CDR-L3: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 (SEQ ID NO: 104), де: 2 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 X1 являє собою Q; X2 являє собою А; X3 являє собою W; X4 являє собою D; X5 являє собою R, S, M, Е, N, G або K; X6 являє собою D або Е; X7 являє собою Т, V, А, S або M; X8 являє собою G, А або С; і X9 являє собою V. Переважно, антигензв’язувальний домен DLL4-зв'язувального білка згідно з винаходом містить щонайменше одну CDR, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: залишків 31-37 SEQ ID NO: 1 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 1 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 1 (CDR-H3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 111 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 111 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 111 (CDR-L3); SEQ ID NO: 117 (CDR-H1); SEQ ID NO: 118 (CDR-H2); SEQ ID NO: 119 (CDR-H3); SEQ ID NO: 121 (CDR-H1); SEQ ID NO: 122 (CDR-H2); SEQ ID NO: 123 (CDR-H3); SEQ ID NO: 125 (CDR-H1); SEQ ID NO: 126 (CDR-H2); SEQ ID NO: 127 (CDR-H3); SEQ ID NO: 129 (CDR-H1); SEQ ID NO: 130 (CDR-H2); SEQ ID NO: 131 (CDR-H3); SEQ ID NO: 133 (CDR-H1); SEQ ID NO: 134 (CDR-H2); SEQ ID NO: 135 (CDR-H3); SEQ ID NO: 137 (CDR-H1); SEQ ID NO: 138 (CDR-H2); SEQ ID NO: 139 (CDR-H3); SEQ ID NO: 141 (CDR-H1); SEQ ID NO: 142 (CDR-H2); SEQ ID NO: 143 (CDR-H3); SEQ ID NO: 145 (CDR-H1); SEQ ID NO: 146 (CDR-H2); SEQ ID NO: 147 (CDR-H3); SEQ ID NO: 149 (CDR-H1); SEQ ID NO: 150 (CDR-H2); SEQ ID NO: 151 (CDR-H3); SEQ ID NO: 153 (CDR-H1); SEQ ID NO: 154 (CDR-H2); SEQ ID NO: 155 (CDR-H3); SEQ ID NO: 157 (CDR-HI); SEQ ID NO: 158 (CDR-H2); SEQ ID NO: 159 (CDR-H3); SEQ ID NO: 161 (CDR-H1); SEQ ID NO: 162 (CDR-H2); SEQ ID NO: 163 (CDR-H3); SEQ ID NO: 165 (CDR-H1); SEQ ID NO: 166 (CDR-H2); SEQ ID NO: 167 (CDR-H3); SEQ ID NO: 169 (CDR-H1); SEQ ID NO: 170 (CDR-H2); SEQ ID NO: 171 (CDR-H3); SEQ ID NO: 173 (CDR-H1); SEQ ID NO: 174 (CDR-H2); SEQ ID NO: 175 (CDR-H3); SEQ ID NO: 177 (CDR-H1); SEQ ID NO: 178 (CDR-H2); SEQ ID NO: 179 (CDR-H3); SEQ ID NO: 181 (CDR-H1); SEQ ID NO: 182 (CDR-H2); SEQ ID NO: 183 (CDR-H3); SEQ ID NO: 185 (CDR-H1); SEQ ID NO: 186 (CDR-H2); SEQ ID NO: 187 (CDR-H3); SEQ ID NO: 189 (CDR-H1); SEQ ID NO: 190 (CDR-H2); SEQ ID NO: 191 (CDR-H3); SEQ ID NO: 193 (CDR-H1); SEQ ID NO: 194 (CDR-H2); SEQ ID NO: 195 (CDR-H3); SEQ ID NO: 197 (CDR-H1); SEQ ID NO: 198 (CDR-H2); SEQ ID NO: 199 (CDR-H3); SEQ ID NO: 201 (CDR-H1); SEQ ID NO: 202 (CDR-H2); SEQ ID NO: 203 (CDR-H3); SEQ ID NO: 205 (CDR-H1); SEQ ID NO: 206 (CDR-H2); SEQ ID NO: 207 (CDR-H3); SEQ ID NO: 209 (CDR-H1); SEQ ID NO: 210 (CDR-H2); SEQ ID NO: 211 (CDR-H3); SEQ ID NO: 213 (CDR-H1); SEQ ID NO: 214 (CDR-H2); SEQ ID NO: 215 (CDR-H3); SEQ ID NO: 217 (CDR-L1); SEQ ID NO: 218 (CDR-L2); SEQ ID NO: 219 (CDR-L3); SEQ ID NO: 221 (CDR-L1); SEQ ID NO: 222 (CDR-L2); SEQ ID NO: 223 (CDR-L3); SEQ ID NO: 225 (CDR-L1); SEQ ID NO: 226 (CDR-L2); SEQ ID NO: 227 (CDR-L3); SEQ ID NO: 229 (CDR-L1); SEQ ID NO: 230 (CDR-L2); SEQ ID NO: 231 (CDR-L3); SEQ ID NO: 233 (CDR-L1); SEQ ID NO: 234 (CDR-L2); SEQ ID NO: 235 (CDR-L3); SEQ ID NO: 237 (CDR-L1); SEQ ID NO: 238 (CDR-L2); SEQ ID NO: 239 (CDR-L3); SEQ ID NO: 241 (CDR-L1); SEQ ID NO: 242 (CDR-L2); SEQ ID NO: 243 (CDR-L3); SEQ ID NO: 245 (CDR-L1); SEQ ID NO: 246 (CDR-L2); SEQ ID NO: 247 (CDR-L3); SEQ ID NO: 249 (CDR-L1); SEQ ID NO: 250 (CDR-L2); SEQ ID NO: 251 (CDR-L3); SEQ ID NO: 253 (CDR-L1); SEQ ID NO: 254 (CDR-L2); SEQ ID NO: 255 (CDR-L3); SEQ ID NO: 257 (CDR-L1); SEQ ID NO: 258 (CDR-L2); SEQ ID NO: 259 (CDR-L3); SEQ ID NO: 261 (CDR-L1); SEQ ID NO: 262 (CDR-L2); SEQ ID NO: 263 (CDR-L3); SEQ ID NO: 265 (CDR-L1); SEQ ID NO: 266 (CDR-L2); SEQ ID NO: 267 (CDR-L3); SEQ ID NO: 269 (CDR-L1); SEQ ID NO: 270 (CDR-L2); SEQ ID NO: 271 (CDR-L3); SEQ ID NO: 273 (CDR-L1); SEQ ID NO: 274 (CDR-L2); SEQ ID NO: 275 (CDR-L3); SEQ ID NO: 277 (CDR-L1); SEQ ID NO: 278 (CDR-L2); SEQ ID NO: 279 (CDR-L3); SEQ ID NO: 281 (CDR-L1); SEQ ID NO: 282 (CDR-L2); SEQ ID NO: 283 (CDR-L3); SEQ ID NO: 285 (CDR-L1); SEQ ID NO: 286 (CDR-L2); SEQ ID NO: 287 (CDR-L3); SEQ ID NO: 289 (CDR-L1); SEQ ID NO: 290 (CDR-L2); SEQ ID NO: 291 (CDR-L3); SEQ ID NO: 293 (CDR-L1); SEQ ID NO: 294 (CDR-L2); SEQ ID NO: 295 (CDR-L3); SEQ ID NO: 297 (CDR-L1); SEQ ID NO: 298 (CDR-L2); SEQ ID NO: 299 (CDR-L3); SEQ ID NO: 301 (CDR-L1); SEQ ID NO: 302 (CDR-L2); SEQ ID NO: 303 (CDR-L3); SEQ ID NO: 305 (CDR-L1); SEQ ID NO: 306 (CDR-L2); SEQ ID NO: 307 (CDR-L3); SEQ ID NO: 309 (CDR-L1); SEQ ID NO: 310 (CDR-L2); SEQ ID NO: 311 (CDR-L3); SEQ ID NO: 313 (CDR-L1); SEQ ID NO: 314 (CDR-L2); SEQ ID NO: 315 (CDR-L3); 3 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 залишків 31-37 SEQ ID NO: 334 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 334 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 334 (CDR-H3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 335 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 335 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 335 (CDR-L3); залишків 31-37 SEQ ID NO: 336 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 336 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 336 (CDR-H3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 337 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 337 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 337 (CDR-L3); залишків 31-37 SEQ ID NO: 338 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 338 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 338 (CDR-H3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 339 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 339 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 339 (CDR-L3); залишків 31-37 SEQ ID NO: 340 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 340 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 340 (CDR-H3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 341 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 341 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 341 (CDR-L3); залишків 31-37 SEQ ID NO: 342 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 342 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 342 (CDR-H3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 343 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 343 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 343 (CDR-L3); залишків 31-37 SEQ ID NO: 344 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 344 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 344 (CDR-H3); залишків 24-34 SEQ ID NO: 345 (CDR-L1); залишків 50-56 SEQ ID NO: 345 (CDR-L2); залишків 89-97 SEQ ID NO: 345 (CDR-L3); залишків 31-37 SEQ ID NO: 346 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 346 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 346 (CDR-H3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 347 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 347 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 347 (CDR-L3); залишків 31-37 SEQ ID NO: 348 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 348 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 348 (CDR-H3); залишків 24-34 SEQ ID NO: 349 (CDR-L1); залишків 50-56 SEQ ID NO: 349 (CDR-L2); залишків 89-97 SEQ ID NO: 349 (CDR-L3); залишків 31-37 SEQ ID NO: 350 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 350 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 350 (CDR-H3); залишків 24-34 SEQ ID NO: 351 (CDR-L1); залишків 50-56 SEQ ID NO: 351 (CDR-L2); залишків 89-97 SEQ ID NO: 351 (CDR-L3); залишків 31-37 SEQ ID NO: 352 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 352 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 352 (CDR-H3); залишків 24-34 SEQ ID NO: 353 (CDR-L1); залишків 50-56 SEQ ID NO: 353 (CDR-L2); залишків 89-97 SEQ ID NO: 353 (CDR-L3); залишків 31-37 SEQ ID NO: 354 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 354 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 354 (CDR-H3); залишків 24-34 SEQ ID NO: 355 (CDR-L1); залишків 50-56 SEQ ID NO: 355 (CDR-L2); залишків 89-97 SEQ ID NO: 355 (CDR-L3); залишків 31-37 SEQ ID NO: 356 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 356 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 356 (CDR-H3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 357 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 357 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 357 (CDR-L3); залишків 31-37 SEQ ID NO: 358 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 358 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 358 (CDR-H3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 359 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 359 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 359 (CDR-L3); залишків 31-37 SEQ ID NO: 360 (CDR-H1); залишків 52-67 SEQ ID NO: 360 (CDR-H2); залишків 100-110 SEQ ID NO: 360 (CDR-H3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 361 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 361 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 361 (CDR-L3). У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок містить щонайменше 3 CDR, описані вище. Переважно, DLL4-зв'язувальний білок згідно з винаходом містить одну або декілька описаних вище CDR. Більш переважно, вказаний зв'язувальний білок містить три або більше CDR, описаних вище. Найбільш переважно, DLL4-зв'язувальний білок згідно з винаходом 4 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 містить шість CDR, описаних вище, тобто CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 і CDR-L3, описані вище. У переважному варіанті винаходу зв'язувальний білок містить щонайменше 3 CDR, вибрані з групи, що складається з описаних вище послідовностей. Більш переважно, зв'язувальний білок містить 3 CDR, вибрані з набору CDR варіабельного домену, вибраного з нижченаведеної групи: набір VH E9 CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 1, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 1, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 1; набір VL E9 CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 111, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 111, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 111; набір VH E9.4 CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 117, CDR-H2: SEQ ID NO: 118, CDR-H3: SEQ ID NO: 119; набір VL E9.4 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 229, CDR-L2: SEQ ID NO: 230, CDR-L3: SEQ ID NO: 231; набір VH E9.11 CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 121, CDR-H2: SEQ ID NO: 122, CDR-H3: SEQ ID NO: 123; набір VL E9.11 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 233, CDR-L2: SEQ ID NO: 234, CDR-L3: SEQ ID NO: 235; набір VH E9.14 CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 125, CDR-H2: SEQ ID NO: 126, CDR-H3: SEQ ID NO: 127; набір VL E9.14 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 237, CDR-L2: SEQ ID NO: 238, CDR-L3: SEQ ID NO: 239; набір VH E9.17 CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 129, CDR-H2: SEQ ID NO: 130, CDR-H3: SEQ ID NO: 131; набір VL E9.17 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 241, CDR-L2: SEQ ID NO: 242, CDR-L3: SEQ ID NO: 243; набір VH E9.18 CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 133, CDR-H2: SEQ ID NO: 134, CDR-H3: SEQ ID NO: 135; набір VL E9.18 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 245, CDR-L2: SEQ ID NO: 246, CDR-L3: SEQ ID NO: 247; набір VH E9.19 CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 137, CDR-H2: SEQ ID NO: 138, CDR-H3: SEQ ID NO: 139; набір VL E9.19 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 249, 5 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 CDR-L2: SEQ ID NO: 250, CDR-L3: SEQ ID NO: 251; набір VH E9.22 СDR CDR-H1: SEQ ID NO: 141, CDR-H2: SEQ ID NO: 142, CDR-H3: SEQ ID NO: 143; набір VL E9.22 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 253, CDR-L2: SEQ ID NO: 254, CDR-L3: SEQ ID NO: 255; набір VH E9.48 CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 145, CDR-H2: SEQ ID NO: 146, CDR-H3: SEQ ID NO: 147; набір VL E9.48 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 257, CDR-L2: SEQ ID NO: 258, CDR-L3: SEQ ID NO: 259; набір VH E9.65 CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 149, CDR-H2: SEQ ID NO: 150, CDR-H3: SEQ ID NO: 151; набір VL E9.65 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 261, CDR-L2: SEQ ID NO: 262, CDR-L3: SEQ ID NO: 263; набір VH E9.66 CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 153, CDR-H2: SEQ ID NO: 154, CDR-H3: SEQ ID NO: 155; набір VL E9.66 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 265, CDR-L2: SEQ ID NO: 266, CDR-L3: SEQ ID NO: 267; набір VH E9.71 CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 157, CDR-H2: SEQ ID NO: 158, CDR-H3: SEQ ID NO: 159; набір VL E9.71 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 269, CDR-L2: SEQ ID NO: 270, CDR-L3: SEQ ID NO: 271; набір VH E9.13 CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 161, CDR-H2: SEQ ID NO: 162, CDR-H3: SEQ ID NO: 163; набір VL E9.13 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 217, CDR-L2: SEQ ID NO: 218, CDR-L3: SEQ ID NO: 219; набір VH E9.16 CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 165, CDR-H2: SEQ ID NO: 166, CDR-H3: SEQ ID NO: 167; набір VL E9.16 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 221, CDR-L2: SEQ ID NO: 222, CDR-L3: SEQ ID NO: 223; набір VH E9.38 CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 169, 6 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 CDR-H2: SEQ ID NO: 170, CDR-H3: SEQ ID NO: 171; набір VL E9.38 CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 225, CDR-L2: SEQ ID NO: 226, CDR-L3: SEQ ID NO: 227; набір VH E9.2В CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 173, CDR-H2: SEQ ID NO: 174, CDR-H3: SEQ ID NO: 175; набір VL E9.2В CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 273, CDR-L2: SEQ ID NO: 274, CDR-L3: SEQ ID NO: 275; набір VH E9.1F CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 177, CDR-H2: SEQ ID NO: 178, CDR-H3: SEQ ID NO: 179; набір VL E9.1F CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 277, CDR-L2: SEQ ID NO: 278, CDR-L3: SEQ ID NO: 279; набір VH E9.10Н CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 181, CDR-H2: SEQ ID NO: 182, CDR-H3: SEQ ID NO: 183; набір VL E9.10Н CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 301, CDR-L2: SEQ ID NO: 302, CDR-L3: SEQ ID NO: 303; набір VH E9.5Е CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 185, CDR-H2: SEQ ID NO: 186, CDR-H3: SEQ ID NO: 187; набір VL E9.5Е CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 293, CDR-L2: SEQ ID NO: 294, CDR-L3: SEQ ID NO: 295; набір VH E9.10С CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 189, CDR-H2: SEQ ID NO: 190, CDR-H3: SEQ ID NO: 191; набір VL E9.10С CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 281, CDR-L2: SEQ ID NO: 282, CDR-L3: SEQ ID NO: 283; набір VH E9.7Е CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 193, CDR-H2: SEQ ID NO: 194, CDR-H3: SEQ ID NO: 195; набір VL E9.7Е CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 289, CDR-L2: SEQ ID NO: 290, CDR-L3: SEQ ID NO: 291; набір VH E9.12В CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 197, CDR-H2: SEQ ID NO: 198, CDR-H3: SEQ ID NO: 199; набір VL E9.12В CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 297, 7 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 CDR-L2: SEQ ID NO: 298, CDR-L3: SEQ ID NO: 299; набір VH E9.10Е CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 201, CDR-H2: SEQ ID NO: 202, CDR-H3: SEQ ID NO: 203; набір VL E9.10Е CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 285, CDR-L2: SEQ ID NO: 286, CDR-L3: SEQ ID NO: 287; набір VH E9.6А CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 205, CDR-H2: SEQ ID NO: 206, CDR-H3: SEQ ID NO: 207; набір VL E9.6А CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 305, CDR-L2: SEQ ID NO: 306, CDR-L3: SEQ ID NO: 307; набір VH E9.7А CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 209, CDR-H2: SEQ ID NO: 210, CDR-H3: SEQ ID NO: 211; набір VL E9.7А CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 309, CDR-L2: SEQ ID NO: 310, CDR-L3: SEQ ID NO: 311; набір VH E9.8Н CDR CDR-H1: SEQ ID NO: 213, CDR-H2: SEQ ID NO: 214, CDR-H3: SEQ ID NO: 215; набір VL E9.8Н CDR CDR-L1: SEQ ID NO: 313, CDR-L2: SEQ ID NO: 314, CDR-L3: SEQ ID NO: 315; набір VH E9.1 CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 334, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 334, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 334; набір VL E9.1 CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 335, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 335, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 335; набір VH E9-SE1 CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 336, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 336, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 336; набір VL E9-SE1 CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 337, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 337, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 337; набір VH E9-SE2 CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 338, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 338, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 338; набір VL E9-SE2 CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 339, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 339, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 339; набір VH E9-SE3 CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 340, 8 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 340, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 340; набір VL E9-SE3 CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 341, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 341, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 341; набір VH E9-SE4 CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 342, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 342, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 342; набір VL E9-SE4 CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 343, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 343, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 343; набір VH E9-SE5 CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 344, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 344, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 344; набір VL E9-SE5 CDR CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO: 345, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO: 345, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO: 345; набір VH E9-SE6 CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 346, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 346, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 346; набір VL E9-SE6 CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 347, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 347, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 347; набір VH E9-SE7 CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 348, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 348, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 348; набір VL E9-SE7 CDR CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO: 349, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO: 349, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO: 349; набір VH E9-SE8 CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 350, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 350, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 350; набір VL E9-SE8 CDR CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO: 351, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO: 351, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO: 351; набір VH E9-FR1 CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 352, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 352, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 352; набір VL E9-FR1 CDR CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO: 353, CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO: 353, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO: 353; набір VH E9-FR2 CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 354, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 354, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 354; набір VL E9-FR2 CDR CDR-L1: залишки 24-34 SEQ ID NO: 355, 9 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 CDR-L2: залишки 50-56 SEQ ID NO: 355, CDR-L3: залишки 89-97 SEQ ID NO: 355; набір VH E9.71 CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 356, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 356, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 356; набір VL E9.71 CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 357, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 357, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 357; набір VH E9.71(M) CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 358, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 358, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 358; набір VL E9.71(M) CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 359, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 359, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 359; набір VH E9.71(L) CDR CDR-H1: залишки 31-37 SEQ ID NO: 360, CDR-H2: залишки 52-67 SEQ ID NO: 360, CDR-H3: залишки 100-110 SEQ ID NO: 360; набір VL E9.71(L) CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 361, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 361, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 361. У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок містить набір з 3 CDR варіабельних важких ланцюгів (VH), вибраних з будь-якого набору з 3 CDR VH у вищезгаданій групі, і набір з 3 CDR варіабельних легких ланцюгів (VL), вибраних з будь-якого набору з 3 CDR VL у вищезгаданій групі. У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок містить набір з 3 CDR ланцюгів, позначених VH, і набір з 3 CDR ланцюгів, відповідно позначених VL, у вищезгаданій групі. Переважно, зв'язувальний білок згідно з винаходом містить щонайменше два набори CDR варіабельних доменів, вибрані з групи наборів CDR варіабельних доменів, що складається з: набору VH E9 CDR і набору VL E9 CDR, набору VH E9.4 CDR і набору VL E9.4 CDR, набору VH E9.11 CDR і набору VL E9.11 CDR, набору VH E9.14 CDR і набору VL E9.14 CDR, набору VH E9.17 CDR і набору VL E9.17 CDR, набору VH E9.18 CDR і набору VL E9.18 CDR, набору VH E9.19 CDR і набору VL E9.19 CDR, набору VH E9.22 CDR і набору VL E9.22 CDR, набору VH E9.48 CDR і набору VL E9.48 CDR, набору VH E9.65 CDR і набору VL E9.65 CDR, набору VH E9.66 CDR і набору VL E9.66 CDR, набору VH E9.71 CDR і набору VL E9.71 CDR, набору VH E9.13 CDR і набору VL E9.13 CDR, набору VH E9.16 CDR і набору VL E9.16 CDR, набору VH E9.38 CDR і набору VL E9.38 CDR, набору VH E9.2В CDR і набору VL E9.2В CDR, набору VH E9.1F CDR і набору VL E9.1F CDR, набору VH E9.10Н CDR і набору VL E9.10Н CDR, набору VH E9.5Е CDR і набору VL E9.5Е CDR, набору VH E9.10С CDR і набору VL E9.10С CDR, набору VH E9.7Е CDR і набору VL E9.7Е CDR, набору VH E9.12В CDR і набору VL E9.12В CDR, набору VH E9.10Е CDR і набору VL E9.10Е CDR, набору VH E9.6А CDR і набору VL E9.6А CDR, набору VH E9.7А CDR і набору VL E9.7А CDR, набору VH E9.8Н CDR і набору VL E9.8Н CDR, 10 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 набору VH E9-SE1 CDR і набору VL E9-SE1 CDR, набору VH E9-SE2 CDR і набору VL E9-SE2 CDR, набору VH E9-SE3 CDR і набору VL E9-SE3 CDR, набору VH E9-SE4 CDR і набору VL E9-SE4 CDR, набору VH E9-SE5 CDR і набору VL E9-SE5 CDR, набору VH E9-SE6 CDR і набору VL E9-SE6 CDR, набору VH E9-SE7 CDR і набору VL E9-SE7 CDR, набору VH E9-SE8 CDR і набору VL E9-SE8 CDR, набору VH E9-FR1 CDR і набору VL E9-FR1 CDR, набору VH E9-FR2 CDR і набору VL E9-FR2 CDR, набору VH E9.71 CDR і набору VL E9.71 CDR, набору VH E9.71(M) CDR і набору VL E9.71(M) CDR, і набору VH E9.71(L) CDR і набору VL E9.71(L) CDR. У іншому варіанті винаходу описаний вище зв'язувальний білок також містить людську акцепторну каркасну область. Переважно, людська акцепторна каркасна область містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: послідовностей акцепторної каркасної області важкого ланцюга SEQ ID NO: 6-22, акцепторних послідовностей важкого ланцюга SEQ ID NO: 35-62, акцепторних послідовностей легкого ланцюга SEQ ID NO: 23-34, і акцепторних послідовностей легкого ланцюга SEQ ID NO: 63-98. У іншому варіанті винаходу вищеописаний зв'язувальний білок містить людську акцепторну каркасну область, яка включає щонайменше одну амінокислотну заміну в каркасній області, де вказана амінокислотна послідовність каркасної області щонайменше на 65% ідентична послідовності вказаної людської акцепторної каркасної області і містить щонайменше 70 амінокислотних залишків, ідентичних залишкам вказаної людської акцепторної каркасної області. У іншому варіанті винаходу описаний тут зв'язувальний білок містить людську акцепторну каркасну область, що включає щонайменше одну амінокислотну заміну в каркасній області в положенні ключового залишку, де вказаний ключовий залишок вибраний з групи, що складається з: залишку, суміжного з CDR; залишку сайта глікозилування; рідкого залишку; залишку, здатного взаємодіяти з людським DLL4; канонічного залишку; залишку зони контактування варіабельної області важкого ланцюга з варіабельною областю легкого ланцюга; залишку в зоні Верньєра; і залишку в області, яка перекривається з областю CDR1 варіабельного важкого ланцюга, визначеною по Чотіа, і з першою каркасною областю важкого ланцюга, визначеною по Кебату. Переважно, ключовий залишок вибраний з групи, що складається з: 2H, 4H, 24H, 26H, 27H, 29H, 34H, 35H, 37H, 39H, 44H, 45H, 47H, 48H, 49H, 50H, 51H, 58H, 59H, 60H, 63H, 67H, 69H, 71H, 73H, 76H, 78H, 91H, 93H, 94H, 2L, 4L, 25L, 29L, 27bL, 33L, 34L, 36L, 38L, 43L, 44L, 46L, 47L, 48L, 49L, 55L, 58L, 62L, 64L, 71L, 87L, 89L, 90L, 91L, 94L, 95L. У іншому варіанті винаходу описаний тут зв'язувальний білок містить консенсусний людський варіабельний домен. У переважному варіанті винаходу вищеописаний зв'язувальний білок містить щонайменше один варіабельний домен, який має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: SEQ ID NO: 1, 111, 116, 228, 120, 232, 124, 236, 128, 240, 132, 244, 136, 248, 140, 252, 144, 256, 148, 260, 152, 264, 156, 268, 160, 216, 164, 220, 168, 224, 172, 272, 176, 276, 180, 300, 184, 292, 188, 280, 192, 288, 196, 296, 200, 284, 204, 304, 208, 308, 212, 312, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360 і 361. У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом містить два варіабельних домени, де вказані два варіабельних домени мають амінокислотні послідовності, вибрані з групи, що складається з: SEQ ID NO: 1 і 111, SEQ ID NO: 116 і 228, SEQ ID NO: 120 і 232, SEQ ID NO: 124 і 236, SEQ ID NO: 128 і 240, SEQ ID NO: 132 і 244, SEQ ID NO: 136 і 248, SEQ ID NO: 140 і 252, SEQ ID NO: 144 і 256, SEQ ID NO: 148 і 260, SEQ ID NO: 152 і 264, SEQ ID NO: 156 і 268, SEQ ID NO: 160 і 216, SEQ ID NO: 164 і 220, SEQ ID NO: 168 і 224, SEQ ID NO: 172 і 272, SEQ ID NO: 176 і 276, SEQ ID NO: 180 і 300, SEQ ID NO: 184 і 292, SEQ ID NO: 188 і 11 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 280, SEQ ID NO: 192 і 288, SEQ ID NO: 196 і 296, SEQ ID NO: 200 і 284, SEQ ID NO: 204 і 304, SEQ ID NO: 208 і 308, SEQ ID NO: 212 і 312, SEQ ID NO: 334 і 335, SEQ ID NO: 336 і 337, SEQ ID NO: 338 і 339, SEQ ID NO: 340 і 341, SEQ ID NO: 342 і 343, SEQ ID NO: 344 і 345, SEQ ID NO: 346 і 347, SEQ ID NO: 348 і 349, SEQ ID NO: 350 і 351, SEQ ID NO: 352 і 353, SEQ ID NO: 354 і 355, SEQ ID NO: 356 і 357, SEQ ID NO: 358 і 359, SEQ ID NO: 360 і 361. У одному з варіантів винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом містить варіабельний домен важкого ланцюга (VH), де, переважно, VH включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: SEQ ID NO: 1, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144, 148, 152, 156, 160, 164, 168, 172, 176, 180, 184, 188, 192, 196, 200, 204, 208, 212, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358 і 360. У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом містить варіабельний домен легкого ланцюга (VL), де, переважно, VL включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: SEQ ID NO: 111, 228, 232, 236, 240, 244, 248, 252, 256, 260, 264, 268, 216, 220, 224, 272, 276, 300, 292, 280, 288, 296, 284, 304, 308, 312, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359 і 361. У переважному варіанті винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом містить VH і VL, де, переважно, VH і VL являють собою будь-яку з описаних вище послідовностей. У іншому варіанті даний винахід стосується зв'язувального білка, що має здатність зв'язуватися з людським DLL-4, де вказаний зв'язувальний білок містить: константну область важкого ланцюга Ig, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NO: 2 і SEQ ID NO: 3; константну область легкого ланцюга Ig, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NO: 4 і SEQ ID NO: 5; варіабельну область важкого ланцюга Ig, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: SEQ ID NO: 1, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144, 148, 152, 156, 160, 164, 168, 172, 176, 180, 184, 188, 192, 196, 200, 204, 208, 212, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358 і 360; і варіабельну область легкого ланцюга Ig, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: SEQ ID NO: 111, 228, 232, 236, 240, 244, 248, 252, 256, 260, 264, 268, 216, 220, 224, 272, 276, 300, 292, 280, 288, 296, 284, 304, 308, 312, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359 і 361. У іншому аспекті даний винахід стосується зв'язувального білка, який містить антигензв’язувальний домен, що має здатність зв'язуватися з людським DLL4, де вказаний антигензв’язувальний домен містить щонайменше одну або декілька CDR, вибраних з групи, що складається з: CDR-H1: X1-X2-X3-X4-Х5 (SEQ ID NO: 105), де X1 являє собою S, N або D; X2 являє собою Н або Y; X3 являє собою W; X4 являє собою M; X5 являє собою S або Н; CDR-H2: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-Х17 (SEQ ID NO: 106), де: X1 являє собою I, D, M або Т; X2 являє собою I; X3 являє собою S; X4 являє собою Y, N, S, Q, V, Т, Н або D; X5 являє собою D; X6 являє собою G; X7 являє собою S, R, I, Т, G, K, Н або N; X8 являє собою N, Y, S, I або Т; X9 являє собою K, M, N, Q, Е, Т, R, S, А або L; X10 являє собою Y, D або Е; X11 являє собою S або Y; X12 являє собою А; X13 являє собою D; X14 являє собою S; 12 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 X15 являє собою V; X16 являє собою K; і X17 являє собою G; CDR-H3: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 (SEQ ID NO: 107), де: X1 являє собою А; X2 являє собою G, А або R; X3 являє собою G; X4 являє собою G, S або А; X5 являє собою N; X6 являє собою V або М; X7 являє собою G; X8 являє собою F, L, Y або M; X9 являє собою D; і X10 являє собою I, S або L; CDR-L1: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11 (SEQ ID NO: 108), де: X1 являє собою S; X2 являє собою А або G; X3 являє собою D; X4 являє собою K, N, L, Q, M, Е, S, Т, G або D; X5 являє собою L; X6 являє собою G; X7 являє собою Т, S, N, А, G або Е; X8 являє собою K, Q, N або R; X9 являє собою Y; X10 являє собою V або I; і X11 являє собою S; CDR-L2: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEQ ID NO: 109), де: X1 являє собою Q; X2 являє собою D; X3 являє собою А, G, W, S або D; X4 являє собою K, M, Q, N, L, Т, I або Е; X5 являє собою R; X6 являє собою Р; і X7 являє собою S; і CDR-L3: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 (SEQ ID NO: 110), де: X1 являє собою Q; X2 являє собою S або А; X3 являє собою W; X4 являє собою D; X5 являє собою R, S, Q, Р, А, V, W або M; X6 являє собою S, G, I, N, R або Т; X7 являє собою D або G; X8 являє собою V, А, Р або Е; і X9 являє собою V. Переважно, антигензв’язувальний домен DLL4-зв'язувального білка згідно з винаходом містить щонайменше одну CDR, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: залишків 31-35 SEQ ID NO: 112 (CDR-H1); залишків 50-66 SEQ ID NO: 112 (CDR-H2); залишків 99-108 SEQ ID NO: 112 (CDR-H3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 113 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 113 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 113 (CDR-L3); залишків 31-35 SEQ ID NO: 316 (CDR-H1); залишків 50-66 SEQ ID NO: 316 (CDR-H2); залишків 99-108 SEQ ID NO: 316 (CDR-H3); залишків 31-35 SEQ ID NO: 317 (CDR-H1); залишків 50-66 SEQ ID NO: 317 (CDR-H2); залишків 99-108 SEQ ID NO: 317 (CDR-H3); залишків 31-35 SEQ ID NO: 318 (CDR-H1); залишків 50-66 SEQ ID NO: 318 (CDR-H2); залишків 99-108 SEQ ID NO: 318 (CDR-H3); залишків 31-35 SEQ ID NO: 319 (CDR-H1); залишків 50-66 SEQ ID NO: 319 (CDR-H2); залишків 99-108 SEQ ID NO: 319 (CDR-H3); 13 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 залишків 31-35 SEQ ID NO: 320 (CDR-H1); залишків 50-66 SEQ ID NO: 320 (CDR-H2); залишків 99-108 SEQ ID NO: 320 (CDR-H3); залишків 31-35 SEQ ID NO: 321 (CDR-H1); залишків 50-66 SEQ ID NO: 321 (CDR-H2); залишків 99-108 SEQ ID NO: 321 (CDR-H3); залишків 31-35 SEQ ID NO: 322 (CDR-H1); залишків 50-66 SEQ ID NO: 322 (CDR-H2); залишків 99-108 SEQ ID NO: 322 (CDR-H3); залишків 31-35 SEQ ID NO: 323 (CDR-H1); залишків 50-66 SEQ ID NO: 323 (CDR-H2); залишків 99-108 SEQ ID NO: 323 (CDR-H3); залишків 31-35 SEQ ID NO: 324 (CDR-H1); залишків 50-66 SEQ ID NO: 324 (CDR-H2); залишків 99-108 SEQ ID NO: 324 (CDR-H3); залишків 31-35 SEQ ID NO: 325 (CDR-H1); залишків 50-66 SEQ ID NO: 325 (CDR-H2); залишків 99-108 SEQ ID NO: 325 (CDR-H3); залишків 31-35 SEQ ID NO: 326 (CDR-H1); залишків 50-66 SEQ ID NO: 326 (CDR-H2); залишків 99-108 SEQ ID NO: 326 (CDR-H3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 327 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 327 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 327 (CDR-L3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 328 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 328 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 328 (CDR-L3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 329 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 329 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 329 (CDR-L3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 330 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 330 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 330 (CDR-L3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 331 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 331 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 331 (CDR-L3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 332 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 332 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 332 (CDR-L3); залишків 23-33 SEQ ID NO: 333 (CDR-L1); залишків 49-55 SEQ ID NO: 333 (CDR-L2); залишків 88-96 SEQ ID NO: 333 (CDR-L3). У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок містить щонайменше 3 CDR, описані вище. Переважно, DLL4-зв'язувальний білок згідно з винаходом містить одну або декілька описаних вище CDR. Більш переважно, вказаний зв'язувальний білок містить три або більше CDR, описаних вище. Найбільш переважно, DLL4-зв'язувальний білок згідно з винаходом містить шість CDR, описаних вище, тобто CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 і CDR-L3, описані вище. У переважному варіанті винаходу зв'язувальний білок містить щонайменше 3 CDR, вибрані з групи, що складається з описаних вище послідовностей. У іншому переважному варіанті винаходу, зв'язувальний білок містить 3 CDR, вибрані з набору CDR варіабельного домену, вибраного з нижченаведеної групи: набір VH A10 CDR CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO: 112, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO: 112, CDR-H3: залишки 99-108 SEQ ID NO: 112; набір VL A10 CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 113, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 113, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 113; набір VH A10.3 CDR CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO: 316, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO: 316, CDR-H3: залишки 99-108 SEQ ID NO: 316; набір VL A10.3 CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 327, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 327, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 327; набір VH A10.K30 CDR CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO: 317, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO: 317, CDR-H3: залишки 99-108 SEQ ID NO: 317; набір VH A10.K42 CDR CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO: 318, 14 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO: 318, CDR-H3: залишки 99-108 SEQ ID NO: 318; набір VH A10.9А CDR CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO: 319, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO: 319, CDR-H3: залишки 99-108 SEQ ID NO: 319; набір VH A10.8А CDR CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO: 320, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO: 320, CDR-H3: залишки 99-108 SEQ ID NO: 320; набір VH A10.1А CDR CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO: 321, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO: 321, CDR-H3: залишки 99-108 SEQ ID NO: 321; набір VH A10.5D CDR CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO: 322, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO: 322, CDR-H3: залишки 99-108 SEQ ID NO: 322; набір VH A10.3А CDR CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO: 323, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO: 323, CDR-H3: залишки 99-108 SEQ ID NO: 323; набір VL A10.3А CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 330, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 330, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 330; набір VH A10.6В CDR CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO: 324, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO: 324, CDR-H3: залишки 99-108 SEQ ID NO: 324; набір VL A10.6В CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 331, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 331, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 331; набір VH A10.3D CDR CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO: 325, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO: 325, CDR-H3: залишки 99-108 SEQ ID NO: 325; набору VL A10.3D CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 332, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 332, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 332; набір VH A10.4С CDR CDR-H1: залишки 31-35 SEQ ID NO: 326, CDR-H2: залишки 50-66 SEQ ID NO: 326, CDR-H3: залишки 99-108 SEQ ID NO: 326; набір VL A10.4С CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 333, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 333, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 333; набір VL A10.L45 CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 328, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 328, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 328; набір VL A10.L73 CDR CDR-L1: залишки 23-33 SEQ ID NO: 329, CDR-L2: залишки 49-55 SEQ ID NO: 329, CDR-L3: залишки 88-96 SEQ ID NO: 329. У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок містить набір з 3 CDR варіабельних важких ланцюгів (VH), вибраних з будь-якого набору з 3 CDR VH у вищезгаданій групі, і набір з 3 CDR 15 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 варіабельних легких ланцюгів (VL), вибраних з будь-якого набору з 3 CDR VL у вищезгаданій групі. У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок містить набір з 3 CDR ланцюгів, позначених VH, і набір з 3 CDR ланцюгів, відповідно позначених VL у вищезгаданій групі. Переважно, зв'язувальний білок згідно з винаходом містить щонайменше два набори CDR варіабельних доменів, вибрані з групи наборів CDR варіабельних доменів, що складається з: набору VH A10 CDR і набору VL A10 CDR; набору VH A10.3 CDR і набору VL A10.3 CDR: набору VH A10.3А CDR і набору VL A10.3А CDR; набору VH A10.6В CDR і набору VL A10.6В CDR; набору VH A10.3D CDR і набору VL A10.3D CDR; набору VH A10.4С CDR і набору VL A10.4С CDR; набору VH A10.K30 CDR і набору VL A10.3 CDR; набору VH A10.K42 CDR і набору VL A10.3 CDR; набору VH A10.3 CDR і набору VL A10.L45 CDR; набору VH A10.3 CDR і набору VL A10.L73 CDR; набору VH A10.9А CDR і набору VL A10.3 CDR; набору VH A10.8А CDR і набору VL A10.3 CDR; набору VH A10.1А CDR і набору VL A10.3 CDR; і набору VH A10.5D CDR і набору VL A10.3 CDR. У іншому варіанті винаходу описаний вище зв'язувальний білок також містить людську акцепторну каркасну область. Переважно, людська акцепторна каркасна область містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: послідовностей акцепторної каркасної області важкого ланцюга SEQ ID NO: 6-22, акцепторних послідовностей важкого ланцюга SEQ ID NO: 35-62, акцепторних послідовностей легкого ланцюга SEQ ID NO: 23-34 і акцепторних послідовностей легкого ланцюга SEQ ID NO: 63-98. У іншому варіанті винаходу вищеописаний зв'язувальний білок містить людську акцепторну каркасну область, яка включає щонайменше одну амінокислотну заміну в каркасній області, де вказана амінокислотна послідовність каркасної області щонайменше на 65% ідентична послідовності вказаної людської акцепторної каркасної області і містить щонайменше 70 амінокислотних залишків, ідентичних залишкам вказаної людської акцепторної каркасної області. У іншому варіанті винаходу описаний тут зв'язувальний білок містить людську акцепторну каркасну область, що включає щонайменше одну амінокислотну заміну в каркасній області в положенні ключового залишку, де вказаний ключовий залишок вибраний з групи, що складається з: залишку, суміжного з CDR; залишку сайта глікозилування; рідкого залишку; залишку, здатного взаємодіяти з людським DLL4; канонічного залишку; залишку зони контактування варіабельної області важкого ланцюга з варіабельною областю легкого ланцюга; залишку в зоні Верньєра; і залишку в області, яка перекривається з областю CDR1 варіабельного важкого ланцюга, визначеною по Чотіа, і з першою каркасною областю важкого ланцюга, визначеною по Кебату. Переважно, ключовий залишок вибраний з групи, що складається з: 2H, 4H, 24H, 26H, 27H, 29H, 34H, 35H, 37H, 39H, 44H, 45H, 47H, 48H, 49H, 50H, 51H, 58H, 59H, 60H, 63H, 67H, 69H, 71H, 73H, 76H, 78H, 91H, 93H, 94H, 2L, 4L, 25L, 29L, 27bL, 33L, 34L, 36L, 38L, 43L, 44L, 46L, 47L, 48L, 49L, 55L, 58L, 62L, 64L, 71L, 87L, 89L, 90L, 91L, 94L, 95L. У іншому варіанті винаходу описаний тут зв'язувальний білок містить консенсусний людський варіабельний домен. У переважному варіанті винаходу вищеописаний зв'язувальний білок містить щонайменше один варіабельний домен, який має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з: SEQ ID NO: 112, 113, 316, 327, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 330, 324, 331, 325, 332, 326, 333, 328 і 329. У іншому варіанті винаходу вищеописаний зв'язувальний білок містить два варіабельних домени, де вказані два варіабельних домени мають амінокислотні послідовності, вибрані з 16 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 групи, що складається з SEQ ID NO: 112 і 113, SEQ ID NO: 316 і 327, SEQ ID NO: 323 і 330, SEQ ID NO: 324 і 331, SEQ ID NO: 325 і 332 і SEQ ID NO: 326 і 333. У одному з варіантів винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом містить варіабельний домен важкого ланцюга (VH), де, переважно, VH включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NO: 112, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325 і 326. У іншому варіанті винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом містить варіабельний домен легкого ланцюга (VL), де, переважно, VL включає амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NO: 113, 327, 328, 329, 330, 331, 332 і 333. У іншому варіанті даний винахід стосується зв’язувального білка, що має здатність зв'язуватися з людським DLL-4, де вказаний зв'язувальний білок містить: константну область важкого ланцюга Ig, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NO: 2 і SEQ ID NO: 3; константну область легкого ланцюга Ig, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NO: 4 і SEQ ID NO: 5; варіабельну область важкого ланцюга Ig, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NO: 112, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325 і 326; і варіабельну область легкого ланцюга Ig, що має амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NO: 113, 327, 328, 329, 330, 331, 332 і 333. Відповідно до даного винаходу варіабельні домени важкого ланцюга (VH) і варіабельні домени легкого ланцюга (VL) DLL4-зв'язувальних білків, описаних в даній заявці, можуть бути також піддані процедурі перестановки ланцюгів рекомбінантними методами, відомими фахівцям, з метою одержання і відбору додаткових DLL4-зв'язувальних білків, що містять різні комбінації описаних тут доменів VH і VL. У переважному варіанті винаходу DLL4-зв'язувальний білок згідно з винаходом зв'язується з людським DLL4 (huDLL4) і щонайменше з одним DLL4 іншого виду. Більш переважно, описаний тут DLL4-зв'язувальний білок зв'язується з людським DLL4 і DLL4, вибраним з групи, що складається з мишачого DLL4 (muDLL4), DLL4 яванського макака (DLL4 яванського макака, cynoDLL4), щурячого DLL4 і їх комбінацій. У іншому варіанті винаходу DLL4-зв'язувальним білком є повністю людське антитіло або його антигензв’язувальна частина. У іншому варіанті винаходу DLL4-зв'язувальним білком є CDR-прищеплене антитіло. Більш переважно, DLL4-зв'язувальний білок являє собою CDR-прищеплене антитіло або його антигензв’язувальну частину, що містить одну або декілька описаних вище CDR. Ще більш переважно, CDR-прищеплене антитіло або його антигензв’язувальна частина містять описаний вище варіабельний домен. Більш переважно, CDR-прищеплене антитіло або його антигензв’язувальна частина містять два вищеописаних варіабельних домени. Переважно, CDR-прищеплене антитіло або його антигензв’язувальна частина містять людську акцепторну каркасну область. Більш переважно, вказаною людською акцепторною каркасною областю є будь-яка з вищеописаних людських акцепторних каркасних областей. Більш переважно, зв'язувальний білок має здатність нейтралізувати активність DLL4, вибраного з групи, що складається з людського DLL4, мишачого DLL4, DLL4 яванського макака, щурячого DLL4 і їх комбінацій. Оцінка нейтралізації активності DLL4 може бути проведена за допомогою декількох in vitro і in vivo аналізів, відомими фахівцям. Репрезентативними параметрами для оцінки нейтралізації активності DLL4 є, але не обмежуються ними, антитіла, які інгібують взаємодію DLL4 з рецептором Notch і/або шлях передачі Notch-сигналу при -6 -7 величинах IC50, що складають приблизно щонайменше 10 М; щонайменше 10 М або -8 щонайменше 10 М. У одному з варіантів винаходу зв'язувальний білок згідно з винаходом має константу 2 -1 -1 швидкості асоціації (Kon) відносно DLL4, що складає щонайменше приблизно 10 M c ; 3 -1 -1 4 -1 -1 щонайменше приблизно 10 M c ; щонайменше приблизно 10 M c ; щонайменше приблизно 5 -1 -1 6 -1 -1 10 M c або щонайменше приблизно 10 M c , як було виміряно методом поверхневого плазмонного резонансу. Переважно, зв'язувальний білок згідно з винаходом має константу 2 -1 -1 3 -1 -1 3 -1 -1 4 швидкості асоціації (Kon) відносно DLL4, що складає в межах 10 M c - 10 M c ; 10 M c - 10 -1 -1 4 -1 -1 5 -1 -1 5 -1 -1 6 -1 -1 M c ; 10 M c - 10 M c або 10 M c - 10 M c , як було виміряно методом поверхневого плазмонного резонансу. У іншому варіанті винаходу, зв'язувальний білок згідно з винаходом має константу швидкості -3 -1 дисоціації (Koff) відносно DLL4, що складає приблизно максимум 10 с ; приблизно максимум -4 -1 -5 -1 -6 -1 10 с ; приблизно максимум 10 с або приблизно максимум 10 с , як було виміряно методом поверхневого плазмонного резонансу. Переважно, зв'язувальний білок згідно з винаходом має 17 UA 105397 C2 -3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 -1 -4 -1 -4 -1 константу швидкості дисоціації (Koff) відносно DLL4, що складає в межах 10 с - 10 с ; 10 с -5 -1 -5 -1 -6 -1 10 с або 10 с - 10 с , як було виміряно методом поверхневого плазмонного резонансу. У іншому варіанті винаходу, зв'язувальний білок згідно з винаходом має константу дисоціації -7 -8 (KD) відносно DLL4, що складає приблизно максимум 10 M; приблизно максимум 10 M; -9 -10 -11 приблизно максимум 10 M; приблизно максимум 10 M; приблизно максимум 10 M; -12 -13 приблизно максимум 10 M і максимум 10 M. Переважно, зв'язувальний білок згідно з -7 -8 -8 винаходом має константу дисоціації (KD) відносно DLL4, що становить 10 M - 10 M; 10 M - 10 9 -9 -10 -10 -11 -11 -12 -12 -13 M; 10 M - 10 M; 10 М - 10 M; 10 M - 10 M або 10 M - 10 M. У одному з варіантів даний винахід стосується конструкції антитіла, що включає будь-який з вищеописаних DLL4-зв'язувальних білків і поліпептидний лінкер або константний домен імуноглобуліну. У переважному варіанті винаходу конструкцію антитіла згідно з винаходом вибирають з групи, що складається з молекули імуноглобуліну, моноклонального антитіла, химерного антитіла, CDR-прищепленого антитіла, гуманізованого антитіла, Fab, Fab', F(ab') 2, Fv, Fv, зв'язаного дисульфідним зв'язком, scFv, однодоменного антитіла, діантитіла, мультиспецифічного антитіла, антитіла з подвійною специфічністю і біспецифічного антитіла. У переважному варіанті винаходу конструкція антитіла згідно з винаходом містить константний домен важкого ланцюга імуноглобуліну, вибраний з групи, що складається з константного домену людського IgM, константного домену людського IgG1, константного домену людського IgG2, константного домену людського IgG3, константного домену людського IgG4, константного домену людського IgE і константного домену людського IgA, і мутантів Ig вищезгаданих підтипів, які можуть модифікувати зв’язування з рецептором Fc-гамма, зв’язування з FcRn і зв’язування з C1q і можуть змінювати фармакокінетичні властивості і/або ефекторні функції Fc. У іншому варіанті винаходу конструкція антитіла є глікозилованою. Переважно, вказаний профіль глікозилування є характерним для людини. У іншому варіанті винаходу описаний тут DLL4-зв'язувальний білок кон’югований з агентом. Кон’югатами зв'язувального білка згідно з винаходом є кон’югати антитіл, в яких описана тут конструкція антитіла кон’югована з агентом. Вказаний агент переважно вибирають з групи, що складається з молекули імуноадгезину, візуалізуючого агента, терапевтичного засобу і цитотоксичного агента. У переважному варіанті винаходу візуалізуючий агент вибраний з групи, що складається з радіоактивної мітки, ферменту, флуоресцентної мітки, люмінесцентної мітки, біолюмінесцентної мітки, магнітної мітки і біотину. Більш переважно, вказаним візуалізуючим 3 14 35 90 99 111 125 агентом є радіоактивна мітка, вибрана з групи, що складається з: H, C, S, Y, Tc, In, I, 131 177 166 153 I, Lu, Ho і Sm. У переважному варіанті винаходу терапевтичний або цитотоксичний засіб вибраний з групи, що складається з антиметаболіту, алкілувального агента, антибіотика, фактора росту, цитокіну, антиангіогенного агента, антимітотичного засобу, антрацикліну, токсину і апоптотичного агента. У іншому варіанті винаходу описані вище DLL4-зв'язувальний білок, конструкція антитіла або кон’югат зв'язувального білка (включаючи кон’югати антитіла) присутні у вигляді кристалів. Переважним кристалом є фармацевтичний кристал, що не містить носія, з контрольованим вивільненням. У переважному варіанті винаходу вказані кристалізований зв'язувальний білок, кристалізована конструкція антитіла або кристалізований кон’югат антитіла мають більш тривалий час напівжиття in vivo, ніж їх розчинний аналог. У іншому переважному варіанті винаходу вказані кристалізований зв'язувальний білок, кристалізована конструкція антитіла або кристалізований кон’югат зв'язувального білка (включаючи кон’югат антитіла) зберігають біологічну активність після кристалізації. У одному зі своїх аспектів, даний винахід стосується ізольованої нуклеїнової кислоти, що кодує DLL4-зв'язувальний білок, конструкцію антитіла, кон’югат DLL4-зв'язувального антитіла або його DLL4-зв'язувальну частину. Особливо переважною є ізольована нуклеїнова кислота, яка кодує поліпептид, вибраний з групи, що складається з: поліпептиду, що містить варіабельний домен важкого ланцюга, де вказаний варіабельний домен важкого ланцюга включає CDR-H1, CDR-H2 або CDR-H3, описані вище; поліпептиду, що містить варіабельний домен легкого ланцюга, де вказаний варіабельний домен легкого ланцюга включає CDR-L1, CDR-L2 або CDR-L3, описані вище, або комбінації обох поліпептидів. У іншому варіанті даний винахід стосується вектора, що містить описану вище ізольовану нуклеїнову кислоту. У переважному варіанті винаходу вказаний вектор вибраний з групи, що складається з: pcDNA, pTT (Durocher et al., Nucl. Acids Res., 30(2e9): 1-9 (2002)), pTT3 (pTT з додатковими сайтами множинного клонування), pEFBOS (Mizushima et al., Nucl. Acids. Res., 18 (17): 5322 (1990)), pHybE, pBV, pJV і pBJ, і будь-яких інших експресійних векторів, придатних для їх використання в прокаріотичних або еукаріотичних клітинах. 18 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 У іншому аспекті даний винахід стосується клітини-хазяїна, трансформованої вищеописаним вектором. Вказаною клітиною-хазяїном може бути прокаріотична або еукаріотична клітина. Переважною прокаріотичною клітиною-хазяїном є Escherichia coli. Переважно, еукаріотична клітина вибрана з групи, що складається з клітини протист, клітини тварини, клітини рослини і клітини грибів. Більш переважно, клітиною-хазяїном є клітина ссавця, включаючи, але не обмежуючись ними, клітини CHO і COS. Переважними клітинами грибів є, але не обмежуються ними, клітини Saccharomyces cerevisiae. Переважною клітиною комахи є клітина Sf9. У іншому аспекті даний винахід стосується способу продукування зв'язувального білка, який зв'язується з людським DLL4, де вказаний спосіб включає стадію культивування будь-якої з вищеописаних клітин-хазяїнів в культуральному середовищі в умовах, придатних для продукування зв'язувального білка, який зв'язується з людським DLL4. У іншому варіанті даний винахід стосується зв'язувального білка, одержаного способом, описаним вище. У одному з варіантів даний винахід стосується композиції для вивільнення DLL4зв'язувального білка згідно з винаходом, де вказана композиція містить склад, який, в свою чергу, містить кристалізований DLL4-зв'язувальний білок, кристалізовану конструкцію антитіла або кристалізований кон’югат зв'язувального білка (включаючи кон’югати антитіла), описані вище; і інгредієнт, а також щонайменше один полімерний носій. Переважним полімерним носієм є полімер, вибраний з однієї або декількох груп, що складаються з поліакрилової кислоти, поліціаноакрилатів, поліамінокислот, поліангідридів, полідепсипептидів, поліефірів, полімолочної кислоти, співполімеру молочної і гліколевої кислоти або PLGA, полі-βгідроксибутирату, полікапролактону, полідіоксанону, поліетиленгліколю, полігідроксипропілметакриламіду, поліорганофосфазену, поліортоефірів, полівінілового спирту, полівінілпіролідону, співполімерів малеїнового ангідриду-алкілвінілового ефіру, поліолів плюроніків, альбуміну, альгінату, целюлози і похідних целюлози, колагену, фібрину, желатину, гіалуронової кислоти, олігосахаридів, глікаміногліканів, сульфатованих полісахаридів і їх сумішей і співполімерів. Переважно, вказаний інгредієнт вибраний з групи, що складається з альбуміну, сахарози, трегалози, лактиту, желатину, гідроксипропіл-β-циклодекстрину, метоксиполіетигенгліколю і поліетиленгліколю. У іншому варіанті даний винахід стосується способу лікування ссавця, який включає стадію введення вказаному ссавцю ефективної кількості композиції, що містить кристалізований DLL4зв'язувальний білок, кристалізовану конструкцію антитіла або кристалізований кон’югат білка (включаючи кон’югати антитіла), описані вище. Даний винахід також стосується фармацевтичної композиції, що містить DLL4-зв'язувальний білок, конструкцію антитіла або кон’югат білка (включаючи кон’югати антитіла), описані вище, і фармацевтично прийнятний носій. У іншому варіанті винаходу фармацевтична композиція містить щонайменше один додатковий агент. Вказаним додатковим агентом може бути терапевтичний засіб, використовуваний для лікування розладу, асоційованого з негативним впливом DLL4. Переважно, фармацевтична композиція містить додатковий агент, вибраний з групи, що складається з терапевтичного засобу, візуалізуючого агента, протипухлинного засобу; хіміотерапевтичного засобу (такого як ДНК-алкілувальний агент, цисплатин, карбоплатин, антитубуліновий агент, паклітаксел, доцетаксел, доксорубіцин, гемцитабін, гемзар, антрациклін, адріаміцин, інгібітор топоізомерази I, інгібітор топоізомерази II, 5-фторурацил (5-FU), лейковорин, іринотекан) і інгібіторів тирозинкіназних рецепторів (наприклад, ерлотинібу, гефітинібу), інгібітору COX-2 (наприклад, целекоксибу), інгібітору кінази і інгібітору ангіогенезу (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-VEGF антитіло або VEGF-пастка); блокатора костимулюючої молекули (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-B7.1 антитіло, анти-B7.2 антитіло, CTLA4-Ig, анти-CD20 антитіло); блокатора адгезивної молекули (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-LFA-1 антитіло, антитіло проти Е/L-селектину і інгібітор невеликої молекули); антитіла проти цитокінів або його функціонального фрагмента (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-IL-18 антитіло, анти-TNF антитіло і анти-IL-6 антитіло/антитіло проти рецептора цитокіну), метотрексату, циклоспорину, рапаміцину, FK506, детектованої мітки або репортера, антагоніста TNF, протиревматичного засобу, м’язового релаксанту, наркотичного засобу, нестероїдного протизапального засобу (НСПЗЗ), аналгетику, анестетику, седативного засобу, місцевого анестетику, нейром’язового блокатора, протимікробного засобу, засобу проти псоріазу, кортикостероїду, анаболічного стероїду, еритропоетину, імунізуючого засобу, імуноглобуліну, імунодепресанту, гормону росту, лікарського засобу для гормонзамісної терапії, радіофармацевтичного засобу, антидепресанту, антипсихотичного засобу, стимулятора, протиастматичного лікарського засобу, бета-агоніста, стероїду, що вводиться шляхом інгаляції, епінефрину або його аналога, цитокіну і антагоніста цитокіну. 19 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У іншому аспекті даний винахід стосується способу інгібування активності людського DLL4, який включає контактування людського DLL4 з описаним вище зв'язувальним білком в цілях інгібування або нейтралізації людського DLL4. У своєму спорідненому аспекті, даний винахід стосується способу інгібування активності DLL4 у людини, страждаючої розладом, асоційованим з негативним впливом DLL4, де вказаний спосіб включає введення вказаній людині вищеописаного зв'язувального білка в цілях інгібування людського DLL4 у людини і лікування вказаного пацієнта, страждаючого даним розладом. Вказаний розлад переважно вибраний з групи, що включає первинний і метастатичний рак, включаючи карциноми молочної залози, товстої кишки, прямої кишки, легень, ротоглотки, гортані, стравоходу, шлунка, підшлункової залози, печінки, жовчного міхура і жовчних проток, тонкої кишки, сечових шляхів (включаючи нирки, сечовий міхур і уротелій), жіночих статевих органів (включаючи шийку матки, матку і яєчники, а також хоріокарциноми і трофобластоз у вагітних), чоловічих статевих органів (включаючи передміхурову залізу, сім’яні пухирці, яєчка і ембріональноклітинні пухлини), ендокринних залоз (включаючи щитовидну залозу, кору надниркової залози і гіпофіз) і шкіри, а також гемангіоми, меланоми, саркоми (включаючи саркоми кісток і м'яких тканин, а також саркому Капоші), пухлини головного мозку, нервових тканин, очей і мозкової оболонки (включаючи астроцитоми, гліоми, гліобластоми, ретинобластоми, невроми, нейробластоми, шваноми і менінгіоми), солідні пухлини, що походять від гемопоетичних злоякісних пухлин, такі як лейкоз і лімфоми (ходжкінська і неходжкінська лімфоми), метастази пухлини, очну неоваскуляризацію (включаючи сліпоту при діабеті, ретинопатію, вікову дегенерацію жовтої плями і почервоніння), набряки, ревматоїдний артрит, розсіяний склероз, атеросклеротичні бляшки, хворобу Крона, запальне захворювання кишечнику, асцит, що важко піддається лікуванню, псоріаз, саркоїдоз, артеріосклероз, сепсис, пептичні виразки, опіки, панкреатит, полікістоз яєчника (ПКЯ), ендометріоз, фіброму матки, злоякісну гіпертрофію передміхурової залози і інші асоційовані і неасоційовані з ангіогенезом захворювання, що характеризуються аберантною активністю DLL4. У іншому аспекті даний винахід стосується способу лікування пацієнта, страждаючого розладом, асоційованим з негативним впливом людського DLL4, де вказаний спосіб включає стадію введення будь-якого з описаних вище зв'язувальних білків до, під час або після введення другого агента, описаного вище. У переважному варіанті винаходу вказаний другий агент вибраний з групи, що складається з: засобу для променевої терапії; протипухлинного засобу; хіміотерапевтичного засобу (такого як ДНК-алкілувальний агент, цисплатин, карбоплатин, антитубуліновий агент, паклітаксел, доцетаксел, таксол, доксорубіцин, гемцитабін, гемзар, антрациклін, адріаміцин, інгібітор топоізомерази I, інгібітор топоізомерази II, 5-фторурацил (5FU), лейковорин, іринотекан) і інгібіторів тирозинкіназних рецепторів (наприклад, ерлотинібу, гефітинібу), інгібітору COX-2 (наприклад, целекоксибу), інгібітору кінази і інгібітору ангіогенезу (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-VEGF антитіло або VEGF-пастка); блокатора костимулюючої молекули (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-B7.1 антитіло, анти-B7.2 антитіло, CTLA4-Ig, анти-CD20 антитіло), блокатора адгезивної молекули (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-LFA-1 антитіло, антитіло проти Е/L-селектину і інгібітор невеликої молекули); антитіла проти цитокінів або його функціонального фрагмента (включаючи, але не обмежуючись ними, анти-IL-18 антитіло, анти-TNF антитіло і анти-IL-6 антитіло/антитіло проти рецептора цитокіну), метотрексату, циклоспорину, рапаміцину, FK506, детектованої мітки або репортера, антагоніста TNF, протиревматичного засобу, м’язового релаксанту, наркотичного засобу, нестероїдного протизапального засобу (НСПЗЗ), аналгетику, анестетику, седативного засобу, місцевого анестетику, нейром’язового блокатора, протимікробного засобу, засобу проти псоріазу, кортикостероїду, анаболічного стероїду, еритропоетину, імунізуючого засобу, імуноглобуліну, імунодепресанту, гормону росту, лікарського засобу для гормонозамісної терапії, радіофармацевтичного засобу, антидепресанту, антипсихотичного засобу, стимулятора, протиастматичного лікарського засобу, бета-агоніста, стероїду, що вводиться шляхом інгаляції, епінефрину або його аналога, цитокіну і антагоніста цитокіну. У переважному варіанті винаходу вищеописані фармацевтичні композиції вводять індивідууму щонайменше одним способом, вибраним з групи, що складається з парентерального введення, підшкірного введення, внутрішньом'язового введення, внутрішньовенного введення, внутрішньосуглобового введення, внутрішньобронхіального введення, внутрішньоочеревинного введення, інтракапсулярного введення, внутрішньохрящового введення, внутрішньопорожнинного введення, внутрішньочеревного введення, внутрішньомозочкового введення, інтрацеребровентрикулярного введення, введення в товсту кишку, інтрацервікального введення, внутрішньошлункового введення, введення в печінку, введення в міокард, внутрішньокісткового введення, внутрішньотазового введення, 20 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 введення в перикардій, інтраперитонеального введення, інтраплеврального введення, введення в передміхурову залозу, інтрапульмонарного введення, інтраректального введення, внутрішньониркового введення, введення в сітківку ока, інтраспінального введення, введення в синовіальну рідину, введення в грудну клітку, внутрішньоматкового введення, інтравезикулярного введення, введення у вигляді болюсу, вагінального введення, ректального введення, трансбукального введення, під’язикового введення, інтраназального введення і черезшкірного введення. У іншому аспекті даний винахід стосується щонайменше одного антиідіотипічного анти-DLL4 антитіла проти щонайменше одного DLL4-зв'язувального білка згідно з винаходом. Таким антиідіотипічним антитілом є будь-яка білок- або пептидвмісна молекула, що включає щонайменше частину молекули імуноглобуліну, таку як, але не обмежується ними, щонайменше одна гіперваріабельна область (область, що визначає комплементарність (CDR)) важкого або легкого ланцюга або її лігандзв'язувальна частина, варіабельна область важкого ланцюга або легкого ланцюга, константна область важкого ланцюга або легкого ланцюга, каркасна область або будь-яка їх частина, які можуть бути включені в зв'язувальний білок згідно з винаходом. Будь-який з ряду форматів імунодетектуючих аналізів може бути адаптований для використання DLL4-зв'язувального білка згідно з винаходом з метою детектування DLL4 в суміші, в розчині або в біологічному зразку. Такими форматами імунодетектуючих аналізів є, але не обмежуються ними, радіоімуноаналіз (РІА), імунопреципітація, твердофазний імуноферментний аналіз (ELISA), імуноблот-аналіз (наприклад, вестерн-блот-аналіз), імунологічні смужки (наприклад, індикаторні тест-смужки), що містять DLL4-зв'язувальний білок згідно з винаходом, адсорбований або іммобілізований на субстраті, FACS і т. п. Детектування DLL4 з використанням DLL4-зв'язувального білка згідно з винаходом може бути проведене in vitro в суміші, в розчині або в біологічному зразку. Біологічними зразками, які можуть бути піддані контактуванню зі зв'язувальним білком згідно з винаходом для детектування DLL4 або для вимірювання його рівня в зразку, є, але не обмежуються ними, сеча, слина, мазок з ротової порожнини (щічний мазок, мазок з язика або із зіва), шкірний мазок, зскрібок зі шкіри, мазок з прямої кишки, вагінальний мазок, проба цільної крові, проба плазми, проба сироватки, біоптат тканини і будь-який інший зразок, взятий у індивідуума відповідно до процедури, відомої фахівцям. У іншому варіанті винаходу DLL4-зв'язувальний білок може бути використаний для детектування DLL4 in vivo різними методами томографії і сканування, включаючи, але не обмежуючись ними, рентгенівську комп'ютерну томографію (КТ), магнітно-резонансну томографію (МРТ) і позитронно-емісійну томографію (ПЕТ). Докладний опис винаходу Даний винахід стосується DLL4-зв'язувальних білків, зокрема анти-DLL4 антитіл або їх антигензв’язувальних частин, які зв'язуються з DLL4. У різних аспектах даний винахід стосується антитіл і фрагментів антитіл і фармацевтичних композицій, що містять такі антитіла і фрагменти, а також нуклеїнових кислот, рекомбінантних експресійних векторів і клітин-хазяїнів, використовуваних для одержання таких антитіл і фрагментів. У обсяг даного винаходу входять також способи застосування антитіл згідно з винаходом для детектування людського DLL4 або мишачого DLL4, способи інгібування активності людського або мишачого DLL4 і/або людського або мишачого VEGFR2 або VEGR1, in vitro або in vivo, і способи регуляції експресії генів. Якщо це не обумовлено особливо, то всі технічні і наукові терміни, використовувані в даній заявці, мають значення, в основному, зрозумілі середньому фахівцю в галузі, до якої належить винахід. Значення і обсяг термінів повинні бути зрозумілі фахівцям в даній галузі, однак, у випадку виникнення яких-небудь прихованих різночитань, потрібно віддати перевагу визначенням, наданим в даній заявці, а не тим визначенням, які наводяться в словниках або в інших джерелах. Крім того, якщо це не суперечить контексту даного опису, то іменники, застосовувані в однині, можуть означати і іменники у множині, і навпаки. У даній заявці, застосування слова "або" означає "і/або", якщо це не обумовлено особливо. Крім того, термін "який включає", а також інші його форми, такі як "включати" або "включений", є необмежувальними. Такі терміни, як "елемент" або "компонент" охоплюють як елементи, так і компоненти, які включають одну одиницю, і елементи і компоненти, які включають більше ніж одну субодиницю, якщо це не обумовлено особливо. У загальних рисах, номенклатура і способи, що стосуються клітин, тканинних культур, молекулярної біології, імунології, мікробіології, генетики, хімії білків і нуклеїнових кислот і гібридизації описаних тут білків і нуклеїнових кислот, добре відомі фахівцям і широко застосовуються в даній галузі. Даний винахід звичайно здійснюють стандартними методами і способами, добре відомими фахівцям і описаними в різних загальних керівництвах і в 21 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 спеціальній науковій літературі, які цитуються і обговорюються в даному описі, якщо це не вказано особливо. Ферментативні реакції і способи очищення здійснюють відповідно до інструкцій виробників, звичайно рекомендованих фахівцям або запропонованих в даній заявці. Використовувана номенклатура і лабораторні процедури, а також методи аналітичної хімії, хімії органічного синтезу і медичної фармацевтичної хімії, описані в даній заявці, добре відомі і широко застосовуються фахівцями. Для хімічних синтезів, хімічних аналізів, фармацевтичних складів, складів доставки і для лікування пацієнтів застосовуються стандартні методи. Для кращого розуміння даного винаходу нижче наводяться визначення окремих термінів. Використовуваний тут термін "поліпептид" означає будь-який полімерний ланцюг з амінокислот. Терміни "пептид" і "білок" є синонімами терміна "поліпептид", а також означають полімерний ланцюг з амінокислот. Термін "поліпептид" охоплює нативні або штучні білки, фрагменти білків і поліпептидні аналоги послідовності білка. Поліпептид може бути мономерним або полімерним. При застосуванні терміна "поліпептид" мається на увазі, що він включає поліпептид і його фрагменти і варіанти (включаючи фрагменти варіантів), якщо це не суперечить контексту винаходу. Що стосується антигенного поліпептиду, то фрагмент поліпептиду містить, але необов'язково, щонайменше один епітоп з безперервним ланцюгом або нелінійний епітоп поліпептиду. Точні границі щонайменше одного фрагмента епітопа можуть бути визначені середнім фахівцем в даній галузі. Цей фрагмент містить щонайменше приблизно 5 суміжних амінокислот, наприклад щонайменше приблизно 10 суміжних амінокислот, щонайменше приблизно 15 суміжних амінокислот або щонайменше приблизно 20 суміжних амінокислот. Варіанти поліпептиду описані в даній заявці. Терміни "ізольований білок" або "ізольований поліпептид" означають білок або поліпептид, які, за своїм походженням або в своєму джерелі, не асоціюються з природними компонентами, разом з якими вони звичайно присутні в своєму природному стані; по суті, не містять інших білків, що походять від одного і того ж виду; експресуються клітиною іншого виду або не існують в природі. Таким чином, поліпептид, який синтезується хімічними методами або синтезується в клітинній системі, відмінній від його природної клітинної системи, буде розглядатися як поліпептид, "ізольований" з його природного оточення. Білок може також, по суті, не містити природних компонентів в результаті його виділення методами очищення білка, добре відомими фахівцям. Використовуваний тут термін "виділення" означає спосіб одержання хімічних молекул, таких як поліпептид, який, по суті, не містить природних компонентів в результаті його виділення, наприклад, методами очищення білка, добре відомими фахівцям. Використовуваний тут термін "людський DLL4" (скорочено позначуваний тут "hDLL4" або "huDLL4") включає декілька EGF-подібних доменів і домен DSL, необхідні для зв’язування з рецептором. Цей термін включає білок розміром приблизно 74-75 кДа. Структура і виведені послідовності ДНК і послідовності білка людського DLL4 більш детально описані, наприклад, Shutter et al., Genes & Dev., 4: 1313-1318 (2000). Використовуваний тут термін "людський DLL4" також включає рекомбінантний людський DLL4 (rhDLL4), який може бути одержаний стандартними рекомбінантними методами експресії. Використовуваний тут термін "біологічна активність", якщо він стосується DLL4, означає всі біологічні властивості, характерні для DLL4. Біологічними властивостями DLL4 є, але не обмежуються ними, зв’язування з рецептором Notch, активація рецептора Notch, інгібування передачі сигналу VEGF, пригнічення VEGFR2 і індукування VEGFR1. Використовувані тут терміни "специфічне зв’язування" або "який специфічно зв'язує", якщо вони стосуються взаємодії антитіла, білка або пептиду з другою хімічною молекулою, означають, що така взаємодія залежить від присутності конкретної структури (наприклад, антигенної детермінанти або епітопа) на хімічній молекулі, так, наприклад, антитіло розпізнає специфічну білкову структуру, а не білки загалом, і зв'язується з цією структурою. Якщо антитіло є специфічним до епітопа "А", то присутність молекули, що містить епітоп А (або вільний немічений А), в реакційній суміші, що включає мічений "А" і антитіло, буде приводити до зниження кількості міченого А, зв'язаного з антитілом. Використовуваний тут термін "антитіло", в своєму широкому значенні, означає будь-яку молекулу імуноглобуліну (Ig), що складається з чотирьох поліпептидних ланцюгів, двох важких ланцюгів (Н) і двох легких ланцюгів (L), або будь-які її функціональні фрагменти, мутанти, варіанти або похідні, що зберігають основні епітопзв'язувальні властивості молекули Ig. Такі типи мутантних, модифікованих або дериватизованих антитіл відомі фахівцям. Необмежувальні варіанти таких антитіл обговорюються нижче. У повнорозмірному антитілі кожний важкий ланцюг складається з варіабельної області важкого ланцюга (позначуваної тут HCVR або VH) і константної області важкого ланцюга. 22 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Константна область важкого ланцюга складається з трьох доменів, CH1, CH2 і CH3. Кожний легкий ланцюг складається з варіабельної області легкого ланцюга (позначуваної тут LCVR або VL) і константної області легкого ланцюга. Константна область легкого ланцюга складається з одного домену, CL. Області VH і VL можуть бути також поділені на гіперваріабельні області, звані областями, що визначають комплементарність (CDR), які чергуються з областями, які є більш консервативними і називаються каркасними областями (FR). Кожна VH і VL складається з трьох CDR і чотирьох FR, розташованих в напрямі від амінокінця до карбоксикінця в наступному порядку: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 і FR4. Молекулами імуноглобуліну можуть бути молекули будь-якого типу (наприклад, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA і IgY), класу (наприклад, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 і IgA2) або підкласу. Термін "Fc-область" використовується для визначення С-кінцевої області важкого ланцюга імуноглобуліну, яка може бути одержана шляхом гідролізу інтактного антитіла папаїном. Fcобластю може бути Fc-область нативної послідовності або Fc-область її варіанта. Fc-область імуноглобуліну звичайно містить два константних домени, домен CH2 і домен CH3, і включає, але необов'язково, домен CH4. Заміни амінокислотних залишків в Fc-частині, що вводяться для зміни ефекторної функції антитіла, відомі фахівцям (патенти США №№ 5648260 і 5624821). Fcчастина антитіла опосередковує декілька важливих ефекторних функцій, наприклад індукування цитокінів, ADCC, фагоцитоз, комплементзалежну цитотоксичність (CDC), час напівжиття/швидкість кліренсу антитіла і утворення комплексів антиген-антитіло. У деяких випадках бажано, щоб терапевтичне антитіло мало ці ефекторні функції, але в інших випадках, залежно від терапевтичного застосування, такі функції можуть бути необов'язковими або навіть небажаними. Деякі ізотипи людських IgG, зокрема IgG1 і IgG3, опосередковують ADCC і CDC за допомогою зв’язування з FcγR і з комплементом C1q, відповідно. Fc-рецептори у новонароджених (FcRn) являють собою важливі компоненти, що визначають час напівжиття антитіл в кровотоці. У іншому варіанті винаходу щонайменше один амінокислотний залишок в константній області антитіла, наприклад в Fc-області антитіла, замінюють так, щоб це приводило до зміни ефекторних функцій антитіла. Димеризація двох ідентичних важких ланцюгів імуноглобуліну опосередковується димеризацією доменів CH3 і стабілізується дисульфідними зв'язками в шарнірній області (Huber et al., Nature; 264: 415-420 (1976); Thies et al., J. Mol. Biol; 293: 67-79 (1999)). Мутація цистеїнових залишків в шарнірних областях, що проводиться з метою запобігання утворенню дисульфідних зв'язків між важкими ланцюгами, буде дестабілізувати димеризацію доменів СН3. Були ідентифіковані залишки, відповідальні за димеризацію СН3 (Dall'Acqua Biochem. 37: 9266-9273 (1998)). Тому це дає можливість одержати одновалентну половину Ig. Цікаво зазначити, що такі одновалентні молекули, що становлять половину Ig, були виявлені в природі для імуноглобулінів підкласів IgG і IgA (Seligman, Ann. Immunol. 129: 855-70 (1978); Biewenga et al., Clin Exp Immunol 51:395-400 (1983)). Стехіометрія Fc-області FcRn:Ig, як було визначено, становить 2:1 (West et al., Biochem. 39: 9698-9708 (2000)), і половина Fc є достатньою для опосередковування зв’язування з FcRn (Kim et al., Eur. J. Immunol.; 24: 542-548 (1994)). Мутації, що вводяться для порушення димеризації домену CH3, більше не зможуть негативно впливати на зв’язування з FcRn, оскільки залишки, що грають важливу роль в димеризації CH3, розташовані на внутрішній поверхні β-складчастої структури CH3, а область, відповідальна за зв’язування з FcRn, розташована за межами границі доменів CH2-CH3. Однак половина молекул Ig може мати певну перевагу з точки зору проникнення в тканину, що зумовлено її меншим розміром в порівнянні із звичайним антитілом. У одному з варіантів винаходу щонайменше один амінокислотний залишок в константній області зв'язувального білка згідно з винаходом, наприклад в Fc-області, замінюють так, щоб це приводило до зміни димеризації важких ланцюгів і до утворення половинних молекул Ig. Протизапальна активність IgG повністю залежить від сіалілування N-зв'язаного глікану Fcфрагмента IgG. Було визначено, що присутність глікану є обов'язковою умовою для надання протизапальної активності, оскільки його присутність дозволяє створити відповідний Fcфрагмент IgG1 і, тим самим, одержати повністю рекомбінантний сіалілований Fc-фрагмент IgG1 зі значно більш високою активністю (Anthony et al., Science 320: 373-376 (2008)). Використовуваний тут термін "антигензв’язувальна частина" антитіла (або просто "частина антитіла") означає один або декілька фрагментів антитіла, які зберігають здатність специфічно зв'язуватися з антигеном (тобто з конкретним епітопом антигену, таким як епітоп DLL4). Було показано, що антигензв’язувальна функція антитіла може бути реалізована завдяки фрагментам повнорозмірного антитіла. Такі варіанти антитіл можуть бути також біспецифічними, мати "подвійну" специфічність або бути мультиспецифічними, тобто специфічно зв'язуватися з двома або більше різними антигенами (або з двома або більше різними епітопами на одному і тому ж антигені). Прикладами фрагментів, що зв’язуються, які 23 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 входять в обсяг терміна "антигензв’язувальна частина" антитіла, є (i) Fab-фрагмент, одновалентний фрагмент, що складається з доменів VL, VH, CL і CHl; (ii) F(ab') 2-фрагмент, двовалентний фрагмент, що включає два Fab-фрагменти, зв'язані дисульфідним містком в шарнірній області; (iii) Fd-фрагмент, що складається з доменів VH і CHl; (iv) Fv-фрагмент, що складається з доменів VL і VH одного плеча антитіла; (v) dAb-фрагмент (Ward et al., Nature 341: 544-546 (1989); публікація PCT WO 90/05144Al), який містить один варіабельний домен; і (vi) ізольована гіперваріабельна область (CDR). Крім того, хоч два домени Fv-фрагмента, VL і VH, кодуються окремими генами, однак, вони можуть бути приєднані один до одного рекомбінантними методами за допомогою синтетичного лінкера, який дозволяє створити один білковий ланцюг, де області VL і VH спарюються, утворюючи одновалентні молекули (відомі як одноланцюжковий Fv (scFv); див. наприклад, Bird et al., Science 242: 423-426 (1988); і Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 85: 5879-5883 (1988)). Такі одноланцюжкові антитіла також входять в обсяг терміна "антигензв’язувальна частина" антитіла. У обсяг цього терміна також входять і інші форми одноланцюжкових антитіл, таких як діантитіла. Діантитіла являють собою двовалентні біспецифічні антитіла, в яких домени VH і VL експресуються на одному поліпептидному ланцюгу, але сполучені за допомогою лінкера, який є дуже коротким для утворення пари між двома доменами на одному і тому ж ланцюгу, а тому домени вимушені спарюватися з комплементарними доменами іншого ланцюга і утворювати два антигензв’язувальних сайти (див., наприклад, Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 90: 64446448 (1993); Poljak R.J., Structure 2:1121-1123 (1994)). Такі антигензв’язувальні частини антитіла відомі фахівцям (Kontermann & Dubel eds., Antibody Engineering. Springer-Verlag. New York, 2001 р. 790 (ISBN 3-540-41354-5)). Крім того, одноланцюжковими антитілами також є "лінійні антитіла", що містять пару тандемних Fv-сегментів (VH-CH1-VH-CH1), які, разом з комплементарними поліпептидами легкого ланцюга, утворюють пару антигензв’язувальних областей (Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 (1995); і патент США № 5641870). Використовуваний тут термін "конструкція антитіла" (або "конструкція анти-DLL4 антитіла") означає поліпептид, що містить одну або декілька антигензв’язувальних частин згідно з винаходом, зв'язаних з лінкерним поліпептидом або з константним доменом імуноглобуліну. Лінкерні поліпептиди містять два або більше амінокислотних залишків, зв'язаних пептидними зв'язками, і використовуються для зв’язування з однією або декількома антигензв’язувальними частинами. Такі лінкерні поліпептиди добре відомі фахівцям (див., наприклад, Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993); Poljak RJ., Structure, 2: 1121-1123 (1994)). Термін "константний домен імуноглобуліну" означає константний домен важкого або легкого ланцюга. Амінокислотні послідовності константного домену важкого і легкого ланцюгів людського IgG відомі фахівцям і представлені в таблиці 1. Таблиця 1 Послідовність константного домену важкого ланцюга людського IgG і константного домену легкого ланцюга людського IgG Білок Константна область Ig-гамма 1 Ідентифікатор послідовності Послідовність SEQ ID NO: 2 24 UA 105397 C2 Мутантна константна область Ig-гамма 1 SEQ ID NO: 3 Константна область Ig SEQ ID NO: 4 каппа Константна область Ig SEQ ID NO: 5 лямбда 5 10 15 20 25 30 35 40 Крім того, антитіло або його антигензв’язувальна частина можуть бути частиною більш великих імуноадгезивних молекул, утворених за допомогою ковалентного або нековалентного зв’язування даного антитіла або його антигензв’язувальної частини з одним або декількома іншими білками або пептидами. Прикладами таких імуноадгезивних молекул є корова область стрептавідину, використовувана для одержання тетрамерної молекули scFv (Kipriyanov et al., Human Antibodies and Hybridomas, 6: 93-101 (1995)), цистеїновий залишок, маркерний пептид і С-кінцева поліпептидна мітка, використовувана для одержання двовалентних і біотинільованихмолекул scFv (Kipriyanov et al., Mol. Immunol, 31: 1047-1058 (1994)). Частини антитіл, такі як Fabі F(ab')2-фрагменти, можуть бути одержані з цілих антитіл стандартними методами, такими як гідроліз цілих антитіл папаїном або пепсином, відповідно. Крім того, антитіла, частини антитіл і імуноадгезивні молекули можуть бути одержані стандартними методами рекомбінантних ДНК, описаними в даній заявці і відомими в даній галузі техніки. Використовуваний тут термін "ізольоване антитіло" означає антитіло, яке, по суті, не містить інші антитіла, що мають різні специфічності до антигену (наприклад, ізольоване антитіло, яке специфічно зв'язується з hDLL4, в основному, ізольоване від антитіл, які специфічно зв'язуються з антигенами, що не є hDLL4). Однак ізольоване антитіло, яке специфічно зв'язується з hDLL4, може перехресно реагувати з іншими антигенами, такими як молекули DLL4, що походять від інших видів (наприклад, muDLL4). Крім того, ізольоване антитіло може бути, в основному, відділене від іншого клітинного матеріалу і/або інших хімічних речовин. Використовуваний тут термін "моноклональне антитіло" або скорочено "Мab" і "mAb" означає антитіло, одержане від популяції, в основному, гомогенних антитіл, тобто окремих антитіл, що складають дану популяцію, які є ідентичними за винятком антитіл з можливими природними мутаціями, які можуть бути присутніми в невеликих кількостях. Моноклональні антитіла є високою мірою специфічними і направлені проти одного антигену. Крім того, на відміну від складів поліклональних антитіл, які звичайно включають різні антитіла, направлені проти різних детермінант (епітопів), кожне mAb направлене проти однієї детермінанти на антигені. Визначення "моноклональний" не означає, що дане антитіло повинно бути продуковане яким-небудь конкретним методом. Використовуваний тут термін "людське антитіло" включає антитіла, які мають варіабельні і константні області, що походять від послідовностей імуноглобуліну людської зародкової лінії. Людські антитіла згідно з винаходом можуть включати амінокислотні залишки, що не належать до послідовностей імуноглобуліну людської зародкової лінії (наприклад, в них можуть бути введені мутації за допомогою неспецифічного або сайт-специфічного мутагенезу in vitro або за допомогою соматичної мутації in vivo), наприклад, такі залишки можуть бути присутніми в СDR, зокрема в CDR3. Однак використовуваний тут термін "людське антитіло" не включає антитіла, в яких послідовності СDR, що походять від зародкової лінії ссавців інших видів, таких як миша, були приєднані до людських каркасних послідовностей. Використовуваний тут термін "рекомбінантне людське антитіло" включає всі людські антитіла, які були одержані, експресовані, сконструйовані або виділені рекомбінантними методами, наприклад антитіла, експресовані з використанням рекомбінантного експресійного вектора, трансфікованого в клітину-хазяїна, антитіла, виділені з бібліотеки рекомбінантних 25 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 комбінаторних людських антитіл (Hoogenboom, Trends Biotechnol. 15: 62-70(1997); Azzazy & Highsmith Clin. Biochem. 35: 425-445(2002); Gavilondo & Larrick BioTechniques 29: 128-145 (2002); Hoogenboom & Chames, Immunol. Today 21: 371-378 (2000)), антитіла, виділені у тварин (наприклад, мишей), які є трансгенними відносно генів людського імуноглобуліну (див. Taylor et al., Nucl. Acids Res. 20: 6287-6295 (1992); Kellermann & Green, Curr. Opin. Biotechnol. 13: 593-597 (2002); Little et al., Immunol. Today 21: 364-370 (2000)), або антитіла, які були одержані, експресовані, сконструйовані або виділені іншими методами, що включають сплайсинг послідовностей генів людського імуноглобуліну з утворенням інших послідовностей ДНК. Такі рекомбінантні людські антитіла мають варіабельні і константні області, що походять від послідовностей імуноглобуліну людської зародкової лінії. Однак, в деяких варіантах винаходу, такі рекомбінантні людські антитіла піддають мутагенезу in vitro (або, якщо використовується тварина, яка є трансгенною відносно послідовності людського Ig, її піддають соматичному мутагенезу in vivo), і, таким чином, амінокислотні послідовності областей VH і VL рекомбінантних антитіл являють собою послідовності, які, якщо вони походять від послідовностей VH і VL людської зародкової лінії і є спорідненими з цими послідовностями, звичайно не входять в репертуар людських антитіл зародкової лінії in vivo. Термін "химерне антитіло" означає антитіла, які містять послідовності варіабельної області важкого і легкого ланцюгів, що походять від одного виду, і послідовності константної області, що походять від інших видів, такі як антитіла, що мають мишачі варіабельні області важкого і легкого ланцюгів, приєднані до людських константних областей. Використовуваний тут термін "CDR" означає гіперваріабельну область у варіабельних послідовностях антитіла. У кожній з варіабельних областей важкого ланцюга і легкого ланцюга присутні три CDR, які, для кожної варіабельної області, позначаються CDR1, CDR2 і CDR3. Використовуваний тут термін "набір CDR" означає групу з трьох CDR, які присутні в одній варіабельній області, що має здатність зв'язуватися з антигеном. Точні границі цих CDR були визначені різним чином залежно від різних систем. Система, описана Кебатом (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) і (1991)), має не тільки однозначну систему нумерації залишків, застосовувану до будь-якої варіабельної області антитіла, але також і точні границі залишків, що визначають три СDR. Ці CDR можуть називатися "СDR по Кебату". Чотія і співробітники (Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987) і Chothia et al., Nature 342: 877-883 (1989)) виявили, що деякі субположення в СDR по Кебату набувають майже ідентичної конформації пептидного кістяка, незважаючи на те, що вони мають значні відмінності на рівні амінокислотної послідовності. Такі підобласті були позначені "L1", "L2" і "L3" або "H1", "H2" і "H3", де "L" і "Н" означають області легкого і важкого ланцюгів, відповідно. Такі області, які мають границі, що перекриваються з СDR по Кебату, можуть називатися "СDR по Чотіа". Інші границі, що визначають перекривання СDR з СDR по Кебату, були описані в публікації Padlan, FASEB J. 9: 133-139 (1995) і MacCallum, J. Mol. Biol. 262(5): 732-45 (1996). Інші визначення границь CDR можуть, але не суворо, відповідати одній з описаних тут систем, але проте ці границі перекриваються з СDR по Кебату, хоч ці області можуть бути коротшими або довшими, ніж це було передбачено або одержано з експериментальних даних, які вказують на те, що конкретні залишки або групи залишків або навіть повнорозмірні СDR не здійснюють значного впливу на зв’язування з антигеном. У описаних тут способах можуть використовуватися СDR, визначені відповідно до будь-якої з цих систем, хоч в деяких варіантах використовуються СDR, визначені по Кебату або Чотія. Використовувані тут терміни "нумерація по Кебату", "визначення по Кебату" і "мічення по Кебату" є синонімами. Ці терміни, відомі фахівцям, означають систему нумерації амінокислотних залишків, які є більш варіабельними (тобто гіперваріабельними), ніж інші амінокислотні залишки у варіабельних областях важкого і легкого ланцюгів антитіла або його антигензв’язувальної частини (Kabat et al., Ann. NY Acad. Sci., 190: 382-391 (1971) and Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest. Fifth Edition. U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication № 91-3242 (1991)). Для варіабельної області важкого ланцюга (VH) гіперваріабельна область простягається в межах від амінокислотного положення 31 до амінокислотного положення 35 для CDR1, від амінокислотного положення 50 до амінокислотного положення 65 для CDR2, і від амінокислотного положення 95 до амінокислотного положення 102 для CDR3. Для варіабельної області легкого ланцюга (VL) гіперваріабельна область простягається в межах від амінокислотного положення 24 до амінокислотного положення 34 для CDR1, від амінокислотного положення 50 до амінокислотного положення 56 для CDR2, і від амінокислотного положення 89 до амінокислотного положення 97 для CDR3. 26 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 За останні 20 років спостерігається збільшення загальнодоступних баз даних і даних аналізу наявних в них амінокислотних послідовностей варіабельних областей важких і легких ланцюгів, що дозволяє фахівцям визначити типові граничні області між каркасними областями (FR) і послідовностями CDR, присутніми в послідовностях варіабельних областей, і точно ідентифікувати CDR відповідно до нумерації по Кебату, нумерації по Чотіа або відповідно до інших систем нумерації. Див., наприклад, Martin. "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains", Kontermann and Dϋbel, eds., Antibody Engineering (Springer-Verlag, Berlin, 2001), розділ 31, сторінки 432-433. Нижче наводиться приданий метод визначення амінокислотних послідовностей CDR по Кебату, присутніх в амінокислотних послідовностях варіабельних областей важкого ланцюга (VH) і легкого ланцюга (VL): Ідентифікація амінокислотної послідовності CDR-L1: приблизно перші 24 амінокислотних залишки від амінокінця області VL; залишком перед послідовністю CDR-L1 завжди є цистеїн (С); залишком після послідовності CDR-L1 завжди є триптофан (W), звичайно Trp-Tyr-Gln (W-YQ), але також і Trp-Leu-Gln (W-L-Q), Trp-Phe-Gln (W-F-Q) і Trp-Tyr-Leu (W-Y-L); довжина звичайно складає від 10 до 17 амінокислотних залишків. Ідентифікація амінокислотної послідовності CDR-L2: завжди перші 16 залишків після CDR-L1; залишками перед послідовністю CDR-L2 звичайно є Ile-Tyr (I-Y), але також і Val-Tyr (V-Y), IleLys (I-K) і Ile-Phe (I-F); довжина завжди становить 7 амінокислотних залишків. Ідентифікація амінокислотної послідовності CDR-L3: завжди перші 33 амінокислоти після CDR-L2; залишком перед амінокислотною послідовністю CDR-L3 завжди є цистеїн (С); залишками після послідовностями завжди є Phe-Gly-X-Gly (F-G-X-G) (SEQ ID NO: 374), де X являє собою будь-яку амінокислоту; довжина звичайно складає від 7 до 11 амінокислотних залишків. Ідентифікація амінокислотної послідовності CDR-H1: приблизно перші 33 амінокислотних залишки від амінокінця області VH і завжди 9 залишків після цистеїну (С); залишками перед послідовністю завжди є Cys-X-X-X-X-X-X-X-X (SEQ ID NO: 375), де X являє собою будь-яку амінокислоту; залишком після послідовності завжди є Trp (W), звичайне Trp-Val (W-V), але також і Trp-Ile (W-I) і Trp-Ala (W-A); довжина звичайно складає від 5 до 7 амінокислотних залишків. Ідентифікація амінокислотної послідовності CDR-H2: завжди перші 15 амінокислотних залишків після CDR-H1; залишками перед послідовністю звичайно є Leu-Glu-Trp-Ile-Gly (L-E-W-I-G) (SEQ ID NO: 376), але можливі також і інші варіанти; залишками після послідовності є Lys/Arg-Leu/Ile/Val/Phe/Thr/Ala-Thr/Ser/Ile/Ala (K/RL/I/V/F/Т/A-T/S/I/А); довжина звичайно складає від 16 до 19 амінокислотних залишків. Ідентифікація амінокислотної послідовності CDR-H3: завжди перші 33 амінокислотних залишки після CDR-H2 і завжди 3 залишки після цистеїну (С); залишками перед послідовністю завжди є Cys-X-X(C-X-X), де X являє собою будь-яку амінокислоту, а звичайно Cys-Ala-Arg (C-A-R); залишками після послідовності завжди є Trp-Gly-X-Gly (W-G-X-G) (SEQ ID NO: 377), де X являє собою будь-яку амінокислоту; довжина звичайно складає від 3 до 25 амінокислотних залишків. Термін "CDR-прищеплене антитіло" означає антитіла, які містять послідовності варіабельної області важкого і легкого ланцюгів, які походять від одного виду, але в яких послідовності однієї або декількох СDR-областей VH і/або VL замінені послідовностями СDR інших видів, наприклад, такі антитіла мають мишачі варіабельні області важкого і легкого ланцюгів, в яких одна або декілька мишачих СDR (наприклад, CDR3) були замінені людськими послідовностями CDR. Термін "гуманізоване антитіло" означає антитіла, які містять послідовності варіабельної області важкого і легкого ланцюгів, що походять від ссавців, що не є людиною (наприклад, миші), але в яких щонайменше частина послідовності VH і/або VL була модифікована для надання їй більшої схожості з послідовністю людського антитіла, тобто більшої схожості з 27 UA 105397 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 варіабельними послідовностями людської зародкової лінії. "Гуманізоване антитіло" являє собою антитіло або його варіант, похідне, аналог або фрагмент, які імуноспецифічно зв'язуються з антигеном, що представляє інтерес, і містять каркасну область (FR), що має, в основному, амінокислотну послідовність людського антитіла і гіперваріабельну область (СDR), що має, в основному, амінокислотну послідовність нелюдського антитіла. Використовуваний тут термін "в основному", що стосується CDR, означає, що CDR має амінокислотну послідовність, яка щонайменше на 80%, щонайменше на 85%, щонайменше на 90%, щонайменше на 95%, щонайменше на 98% або щонайменше на 99% ідентична амінокислотній послідовності СDR нелюдського антитіла. Гуманізоване антитіло включає в основному всі або щонайменше один, а звичайно два варіабельних домени (Fab, Fab', F(ab') 2, FabC, Fv), в яких всі або в основному всі області CDR відповідають нелюдському імуноглобуліну (тобто донорному антитілу), а всі або в основному всі каркасні області являють собою області, що мають консенсусну послідовність людського імуноглобуліну. У одному з варіантів винаходу гуманізоване антитіло також містить щонайменше частину константної області імуноглобуліну (Fc), а звичайно людського імуноглобуліну. У деяких варіантах винаходу гуманізоване антитіло містить легкий ланцюг, а також щонайменше варіабельний домен важкого ланцюга. Таке антитіло також може включати області CH1, шарнірну область і області CH2, CH3 і CH4 важкого ланцюга. У деяких варіантах винаходу гуманізоване антитіло містить тільки гуманізований легкий ланцюг. У деяких варіантах винаходу гуманізоване антитіло містить тільки гуманізований важкий ланцюг. У конкретних варіантах винаходу гуманізоване антитіло містить тільки гуманізований варіабельний домен легкого ланцюга і/або гуманізований важкий ланцюг. Гуманізоване антитіло може бути вибране з імуноглобулінів будь-якого класу, включаючи IgM, IgG, IgD, IgA і IgE, і будь-якого ізотипу, включаючи, але не обмежуючись ними, IgG1, IgG2, IgG3 і IgG4. Гуманізоване антитіло може містити послідовності, що походять від антитіл більше ніж одного класу або ізотипу, а конкретні константні домени можуть бути вибрані для оптимізації потрібних ефекторних функцій методами, добре відомими фахівцям. Каркасні області і CDR гуманізованого антитіла необов'язково повинні точно відповідати батьківським послідовностям, так, наприклад, CDR донорного антитіла або консенсусна каркасна область можуть бути піддані мутагенезу шляхом заміни, інсерції і/або делеції щонайменше одного амінокислотного залишку так, щоб CDR або каркасний залишок в цьому сайті не відповідав залишку донорного антитіла або консенсусній каркасній області. Однак, в переважному варіанті винаходу, такі мутації не повинні бути надмірними. Звичайно залишки гуманізованого антитіла щонайменше на 80%, переважно щонайменше на 85%, більш переважно щонайменше на 90%, а найбільш переважно щонайменше на 95% відповідають залишкам послідовностей батьківських FR і CDR. Використовуваний тут термін "консенсусна каркасна область" означає каркасну область в консенсусній послідовності імуноглобуліну. Використовуваний тут термін "консенсусна послідовність імуноглобуліну" означає послідовність, що походить від амінокислот, що найчастіше зустрічаються (або нуклеотидів), в сімействі споріднених послідовностей імуноглобуліну (див., наприклад, Winnaker, From Genes to Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, 1987)). "Консенсусна послідовність імуноглобуліну" може також містити "консенсусну(і) каркасну(і) область(і)" і/або "консенсусну(і) CDR". У сімействі імуноглобулінів кожне положення в консенсусній послідовності зайняте амінокислотою, що найчастіше зустрічається в цьому положенні вказаного сімейства. Якщо дві амінокислоти зустрічаються з однаковою частотою, то в консенсусній послідовності може бути присутньою будь-яка з цих амінокислот. "Афінно зрілим" антитілом є антитіло, яке має одну або декілька модифікацій в одній або декількох СDR, які приводять до підвищення афінності антитіла до антигену-мішені, на відміну від батьківського антитіла, що не має такої(их) модифікації(й). Репрезентативні афінно зрілі антитіла мають наномолярну або навіть пікомолярну афінність відносно антигену-мішені. Афінно зрілі антитіла одержують різними методами, відомими фахівцям. У публікації Marks et al., BioTechnology, 10: 779-783 (1992), описане афінне дозрівання, що досягається за допомогою перестановки доменів VH і VL. Неспецифічний мутагенез CDR і/або каркасних залишків описаний в публікаціях: Barbas et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 91: 3809-3813 (1994); Schier et al., Gene, 169: 147-155 (1995); Yelton et al., J. Immunol, 155: 1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol, 154(7): 3310-3319 (1995); Hawkins et al., J. Mol. Biol, 226: 889-896 (1992). Селективна мутація в селективних положеннях мутагенезу і контактування або гіпермутація із заміною амінокислотним залишком, що підвищує активність, описано в патенті США US6914128B1. Термін "полівалентний зв'язувальний білок" означає зв'язувальний білок, що містить два або більше антигензв’язувальних сайтів (також званих тут "антигензв’язувальними доменами"). Полівалентний зв'язувальний білок переважно конструюють так, щоб він містив три або більше 28