Комплекс, що містить ifn типу і і субодиницю рецептора інтерферону-a/b

Формула / Реферат | Подібні патенти | МПК / Мітки | Додаткова інформація | Код посилання

Номер патенту: 74132

Опубліковано: 15.11.2005

Автори: Каннінгхем Марк, Шерріс Девід, Теппер Марк, Маккенна Сін, Ел Тейєр Нейбіл

Є ще 21 сторінка.

Дивитися все сторінки або завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

1. Комплекс, що містить IFN типу I i субодиницю рецептора інтерферону- людини (IFNAR), здатну зв'язуватися з IFN типу I комплексу, де вказаний IFN типу I являє собою

a) нативний IFN типу I;

b) фрагмент а), який має біологічну активність IFN типу I;

c) варіант а) або b), який має щонайменше на 70% ідентичну послідовність відносно а) або b) i який має біологічну активність IFN типу I;

d) вapiaнт а) або b), який кодується послідовністю ДНК, що гібридизується з комплементом нативної послідовності ДНК, що кодує а) або b), при помірно жорстких умовах i, який має біологічну активність IFN типу I; або

e) сіль або функціональну похідну а), b), с) або d), які мають біологічну активність IFN типу I; i де вказаний IFNAR являє собою

f) нативний поліпептидний ланцюг IFNAR людини;

g) фрагмент f), який має біологічну активність IFNAR;

h) варіант f) або g), який має щонайменше на 70% ідентичну послідовність відносно f) або g) i який має біологічну активність IFNAR;

i) варіант f) або g), який кодується послідовністю ДНК, яка гібридизується з комплементом послідовності нативної ДНК, що кодує f) або g) при помірно жорстких умовах і, який має біологічну активність IFNAR; або

j) сіль або функціональна похідна f), g), h) або i), які мають біологічну активність IFNAR.

2.Комплекс за п.1, де вказаний IFN типу I зв'язаний з вказаним IFNAR ковалентним зв'язком.

3.Комплекс за п.1, де вказаний IFN типу I зв'язаний з вказаним IFNAR пептидним зв'язком.

4.Комплекс за п.1, де вказаний IFN типу I зв'язаний з вказаним IFNAR через пептидний лінкер.

5.Комплекс за п.4, де вказаний пептидний лінкер являє собою (GGGGS)n, де n = 1-5.

6.Комплекс за будь-яким з пп. 1-5, де вказаний IFN типу I являє собою IFN, IFN або IFN.

7.Комплекс за п.6, де вказаний IFN типу I являє собою IFN.

8.Комплекс за будь-яким з пп.1- 7, де вказаний IFNAR являє собою -субодиницю рецептора інтерферону- людини (IFNAR2).

9.Молекула ДНК, що кодує злитий білок за пп.3, 4 або 5.

10.Вектор, що містить молекулу ДНК за п.9.

11.Клітина-хазяїн, трансформована вектором за п. 10 таким чином, щоб забезпечити експресію вказаного злитого білка.

12.Фармацевтична композиція, що включає фармацевтично прийнятний носій i комплекс за будь-яким з пп.1-8.

13.Комплекс за будь-яким з пп.1-8, який застосовується як лікарський засіб.

14.Комплекс за п.13, який застосовується в противірусній, протираковій або імуномодулюючій терапії.

15.Комплекс за п.13 або п.14, який застосовується для пролонгування ефектів in vivo IFN типу I у пацієнта.

16.Лікарський засіб, що містить інтерферон (IFN) типу I i субодиницю рецептора інтерферону- людини (IFNAR), для роздільного, одночасного або послідовного введення пацієнту з метою надання противірусного, протиракового або імуномодулюючого терапевтичного впливу, де IFN являє собою

а) нативний IFN типу I;

b) фрагмент а), який має біологічну активність IFN типу I.

17.Лікарський засіб за п.16, де вказаний інтерферон (IFN) типу I i вказаний IFNAR вводять роздільно, а вказаний комплекс за будь-яким з пп.1-8 утворюється in vivo.

18.Лікарський засіб за п.16 або 17, де IFN типу I являє собою IFN, IFN або IFN.

19.Лікарський засіб за п.18, де вказаний IFN типу I являє собою IFN.

20.Лікарський засіб за будь-яким з пп.16-19, де вказаний IFNAR являє собою -субодиницю рецептора інтерферону- людини (IFNAR2).

21.Застосування рецептора інтерферону- людини (IFNAR) для виробництва лікарського засобу для пoтeнцiювaння біологічних ефектів інтерферону (IFN) типу I, де вказаний IFNAR являє собою

a)нативний поліпептидний ланцюг IFNAR людини;

b) фрагмент а), який має біологічну активність IFNAR;

c) варіант а) або b), який має щонайменше на 70% ідентичну послідовність відносно а) або b), i який має біологічну активність IFNAR;

e) сіль або функціональна похідна а), b), с) або d), які мають біологічну активність IFNAR.

22.Застосування інтерферону (IFN) типу I i субодиниці рецептора інтерферону- людини (IFNAR), яка здатна зв'язуватися з вказаним IFN типу I для виробництва комбінованого препарату для одночасного, послідовного або роздільного введення з метою пролонгування дії in vivo ефектів IFN типу I у пацієнта, де вказаний IFN типу I являє собою

a) нативний IFN типу I;

b) фрагмент а), який має біологічну активність IFN типу I;

c) вapіант а) або b), який має щонайменше на 70% ідентичну послідовність відносно а) або b) і, який має біологіччну активність IFN типу I;

d) вapiaнт а) або b), який кодується послідовністю ДНК, яка гібридизується з комплементом нативної послідовності ДНК, що кодує а) або b), в помірно жорстких умовах i, який має біологічну активність IFN типу I; або

e) сіль або функціональна похідна а), b), с) або d), яка має біологічну активність IFN типу I; i де вказаний IFNAR являє собою

f) нативний поліпептидний ланцюг IFNAR людини;

g) фрагмент f), який має біологічну активність IFNAR;

h) вapiaнт f) або g), який має щонайменше на 70% ідентичну послідовність відносно f) або g) i який має біологічну активність IFNAR;

i) вapiaнт f) або g), який кодується послідовністю ДНК, що гібридизується з комплементом нативної послідовності ДНК, що кодує f) або g), в помірно жорстких умовах i, який має біологічну активність IFNAR; або

j) сіль або функціональна похідна f), g), h) або i), які мають біологічну активність IFNAR.

23.Комплекс за будь-яким з пп.1-8 у виробництві лікарського засобу для пролонгування дії in vivo IFN типу I.

24.Cnoci6 одержання злитого білка, що передбачає культивування клітини-хазяїна за п. 11 i виділення експресованого нею злитого білка.

25.Cnociб збільшення строку зберігання інтерферону типу I, який передбачае зберігання вказаного інтерферону у формі комплекса за будь-яким з пп.1-8.

Текст

, / (IFNAR2) (IFN , IFN IFN ). in vivo , . , , IFNAR2, (IFN , IFN , IFN ), " IFN . IFN , II 9 (Lengyl, 1982), , , 80% 25 50% IFN , IFN [Weissman et al, 1986; Dron et al, 1992]. IFN , 17-23 (165-166 ), IFN , ~23 (166 ) IFN , ~24 (172 ). ( ) , , [Baron et al, 1994; Baron et al, 1991]. ; , ( ) ( ); ; ; II ; . IFN IFN (IFN / ) , , ( , , ), dsRNA (M-CSF, IL-l , IL-2, TNF ). in vivo , , , 2',5'2 [(Alain et al, 1997;) Fierbeck et al, 1996; Salmon et al, 1996]. (IFN / / ) , , , . IFN (IFNAR.) , [ et l, 1992; Colamonici et al, 1993; Platanias et al, 1993]. 21, [Tan et al, 1973]. IFN IFNAR1 1990] , . , (IFN ), IFN . , , . , (IFN ), (IFN ) IFN , IFN IFN IFN , 6 (IFN ). , , II (Pestka et al, 1987). " IFN , 70% IFN , IFN R3 IFN R i, . IFNAR2. , 100-130 100 . ( , IFNAR1 ( IFNAR2 ( , : , , BL, IFN / R) Uze) [Uze et al, ) IFNAR2 ( s) IFNAR1 IFNAR2, ( s IFNAR2, s L, , 51 .) (Novick et al, 1994;)(Domanski et al, 1995). ; , 15 . IFNAR2 IFN / , IFNAR1 IFN / . IFNAR1 L-929, IFN , IFN /lFN B, [Uze et al, 1990]. IFNAR2, LIFNAR1, IFN 2 , 0,45 . IFNAR2 IFNAR1, , 0,026-0,114 [Novick et al, 1994; Domanski et al, 1995]. , 500-20 000 IFN 2000-100000 . IFNAR1/2 ( / s / L) IFN , , / L . IFNAR1 IFNAR2, ( L L-929, IFN 2, , (Jak1 k2) (STAT 1, 2, 3) [(Novick et al, 1994;) Domanski et al, 1995]. IFNAR2 s . , IFNAR2 L ) , IFNAR1. IFNAR, IFNAR, , [Novick et al, 1994; Novick et al, 1995; Novick et al, 1992; Lutfalla et al, 1995]. IFNAR, , , 55 , SDS-PAGE, IFNAR , 40-45 ( 40). 40 IFNAR2 IFNAR2 . IFNAR2. , 40 IFNAR2 IFN 2 IFN in vitro IFN (" IFN") IFNs [Novick et al, 1995]. , IFNAR2 lg IFN (IFN A, IFN B, IFN D, IFN , IFN , Con1 IFN ) Daudi Cos, L, / s. IFN [Platanias et al, 1996; Yan et al, 1996; Qureshi et al, 1996; Duncan et al, 1996; Sharf et al, 1995; Yang et al, 1996]. , IFN / / IFNAR2, IFNAR1 IFNAR1/2 [Platanias et al, 1994]. IFN / / IFNAR1/2 Janus (Jak1 Tyk2), , , IFNAR1 IFNAR2. STAT (STAT 1, 2 3), STAT , IFN. IFN[Alan et al, 1997; Fierlbeck et al, 1996; Salmon et al, 1996]. IFN IFN , . IFN , IFN . ( ) (6 IU) IFN 5 , ~5 [Alam et al, 1997]. IFN , ( ) ) , , ~15% . IFN , ( 2'5'(2'5'-AS) PBMCs) 24 4 . . ( ) ( ) IFN , (REBIF Serono AVONEX -Biogen), 6 MIU IFN [Salmon, 1996]. IFN IFN , , . IFN IFN , ~12-15 , REBIF . IFN REBIF , AVONEX , 36 , 48 . REBIF AVONEX , ~44-50 , 72 , 144 . [Fierlbeck et al, 1996], IFNF , 3 MIU/ . , 2'5'-AS , 2, (4 ) 28 , . , . . , , IFNAR (IFN) , IFN , in vivo , . , (IFN) , / (IFNAR) , IFN , in vivo , . , IFNAR2 , IFNAR1 IFN . , , , IFNAR, IFNAR2, , , IFN , IFN , IFN , . , IFNAR IFNAR, , . IFNAR , , , IgG. IFN, IFN , IFN 20 , , , . IFN IFN , IFNAR2 . , IFN IFN , IFNAR2. , IFN IFNAR2 . ( ) IFN IFNAR2, , " " . , in vivo. , IFNAR2 IFN, IFN IFN IFNAR2. , IFNAR IFN, , in vivo IFN, IFN. IFN , IFN , IFN , IFNAR2, , IFN IFNAR2 . in vivo. , , , , , , , , . in vivo IFN, , IFN. IFNAR IFN. IFNP IFNAR2. . IFNAR, IFN , . , IFNAR. , 1 : , IFNAR2Ig ( 3) SIFNAR2 hIFNAR2, IgGI, 2 IFN . 2 , SIFNAR2 IFN . IFNP sIFNAR2 IFN . (0,95 ) 3 ) SIFNAR2 , . IFN , . 4 48 SIFNAR2 IFN (0,95 WISH . VSV. IFN IFNAR2/IFN . 4 , IFN sIFNAR2. 5 , , IFN , sIFNAR, IFNAR2, . 6 , IFN IFN /IFNAR2 , ELISA. 7 , IFN IFN /IFNAR2 , . 8 , IFN IFN /IFNAR2 , ELISA. 9 , IFN , IFN /IFNAR2 , . 10 n=2 IFNAR2/IFN (SEQ ID NO: 14). (GGGGS)2 ( 240-249 SEQ ID NO: 14) . 11 , pCMV-IFNAR2/IFNJ ; 10% PAG, 3-7: BamHI/XhoI ; 2: Smal/Xhol ; 1: pBR322 DNA-MspI; 2: pCMV-IFNAR2/IFN , OGS; 3: 1GS; 4: 2GS; 5: 3GS; 6: 4GS; 7: 5GS; 8: X174RFDNA . 12 IFNAR2/IFN . 13 IFNAR2/IFN . 1, IFNAR2/IFN , ; 2, IFNAR2/IFN , Gly4Ser (SEQ ID N0:1); 3, IFNAR2/IFN , Gly4Ser (SEQ ID N0:1); 4, IFNAR2/IFN , Gly4Ser (SEQ ID N0:1); 5, R2/IFN , Gly4Ser (SEQ ID N0:1); 6, IFNAR2/IFN , Gly4Ser (SEQ ID N0:1). 14 , , , IFN . 15 , IFN , IFNAR2. IFN , IFNAR, SIFNAR2. IFNPELISA( 15 ) WISH ( 15 ). 16 , , " " IFN ( IFNaA/D) sIFNAR2 IFN . 17 , IFN , GS5, hI :FN . IFNAR/IFN , . IFN . . IFNAR2, , , NIFN , , . , IFN , , NIFNAR2, . IFNAR2/IFN , IFNAR2 NIFN IFNAR2/IFN , , , , , ~80 , , . IFNAR2/IFN , . : Arg273 Arg322, Ile-Glu-Glu-Arg (SEQ ID N0:2) [Nagai et al, 1984]. , , . sIFNAR2/IFN, , IFNAR2/IFN , , , , . IFNAR2/IF , ( . , Gly-Gly-Gly-Gly-Ser (GGGGS) (SEQ ID N0:1). , , ). 51 , , , , , , , , Argl52-Ilel53 [Kazam et al, 1995]. sIFNAR2/IFN, IFNAR2/IFN . , VII. , , . , IFNAR2/IFN . . , , , , ) 1 ), , . ), [Ertel et al, 1994; Szilagyi et al, 1995]. , , , sIFNAR2/IFN, , . , IFNAR2/IFN , , sIFNAR2 (P40NIFN (MSY) . : ESEFS (GGGGS)nMSY, n=5, (SEQ ID NO:3), 4 (SEQ ID NO:4), 3 (SEQ ID NO:5), 2 (SEQ ID NO:6), 1 (SEQ ID NO:7); ESEFS (hCG-CTP)MSY, hCG-CTP = SSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPPILPQ (SEQ ID NO:8); ESEFS (EFM:)nMSY, n=5 (SEQ ID NO:9), 4 (SEQ ID NO:10), 3 (SEQ ID NO:11); ESEFS(EFGAGLVLGGQFM) nMSY, n=1 (SEQ ID NO:12), 2 (SEQ ID NO:13), , IFNAR2 IFN , . , 30 . . IFNAR2 , (PEG), , , IFNAR2 , Ser210 Cys Asn89 Cys ( ). : IFNAR(S210C)-PEGn-IFNp(Cysl7), n=2000, 5000 10000 , IFNAR(N89C)-PEGn-IFNp(Cysl7). Cys ( ) . . IFNAR2 IFN , . , in vitro , 2,5 IFNAR2 1 (MO) INFp. IFNAR2 IFN , in vivo, , , , IFN . , , IFNAR2 IFN 2 104 IFN 2/5 4 IFNAR2 IFN , 5 10 IFN 0,3 IFNAR2 IFN . in vitro, IFN in vivo. , IFNAR2 IFN , , . in vitro IFN . IFN sIFNAR2, ( R2/IF ) WISH ( ). WISH (VSV) IFN 48 . IFNAR2 IFN VSV IFNAR2 IFN. , IFNAR2 IFN IFN . , IFNAR2/IFN IFN , IFN . ESEFS) , IFN . , , , IFNAR2/IFN ( , . , , in vivo IFN ), , , IFN. IFN, , , IFN/IFNAR, IFNAR, IFN IFNAR/IFN. IFNAR, IFN IFNAR, IFN/IFNAR, IFN. IFNAR , IFN IFN. " " in vivo , IFN, IFN , . IFNAR IFN. IFN IFNAR. IFN . IFNAR. , . IFNAR/IFN , IFNAR2 IFN. , , , , IFNAR2 30 IFN , . , IFNAR2 IFN) , . , 30 IFNAR2 IFN . , (, ), , , , , , , , , , , , . , , , , , 30, , 30, ( IFNAR2/IFN), . , . , . IFNAR2/IFN , , , , , , , , 2-7. , , , , , , , , , . [ . Schuiz, et al. Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, New York (1978); Creighton, . ., Proteins: Structure and Molecular Properties, W. H. Freeman & Co, San Francisco (1983)], . , , [ . Ausubel et al (1987, 1992), .1.1- .1.24, Sambrook et al (1987, 1992), §§ 6.3 and 6.4 at Appendices and D]. , " " . , , IFNAR2 IFN, , , (Grantham, 1974). , , , , , , , , , , , , (Anfmsen, 1973). , . , , . , , II; , , III. Ser Arg Leu Pro Thr Ala Val Gly IIe Phe Tyr Cys His Gin Asn Lys Asp Glu Met Trp Ser, Thr, Gly, Asn Arg, Gin, Lys, Glu, His He, Phe, Tyr, Met, Val, Leu Gly, Ala, Thr, Pro Pro, Ser, Ala, Gly, His, Gin, Thr Gly, Thr, Pro, Ala Met, Tyr, Phe, IIe, Leu, Val Ala, Thr, Pro, Ser, Gly Met, Tyr, Phe, Val, Leu, He Trp, Met, Tyr, Phe, Val, Leu, Phe Trp, Met, Phe, IIe, Val, Leu, Tyr Ser, Thr, Cys Glu, Lys, Gin, Thr, Arg, His Glu, Lys, Asn, His, Thr, Arg, Gin Gin, Asp, Ser, Asn Glu, Gin, His, Arg, Lys Glu, Asn, Asp Asp, Lys, Asn, Gin, His, Arg, Glu Phe, He, Val, Leu, Met Trp II Ser Arg Leu Pro Tnr Ala Val Gly IIe Phe Tyr Cys His Gin Asn Lys Asp Glu Met Trp Ser His, Lys, Arg Leu, IIe, Phe, Met Ala, Pro Thr Pro, Ala Val, Met, IIe Gly lIe, Met, Phe, Val, Leu Met, Tyr, IIe, Leu, Phe Phe, Tyr Cys, Ser His, Gin, Arg Glu, Gin, His Asp, Asn Lys, Arg Asp, Asn Glu, Gin Met, Phe, lie, Val, Leu Trp III Ser Arg Leu Pro Thr Ala Val Gly IIe Phe Tyr Cys Ser Arg Leu, IIe, Met Pro Thr Ala Val Gly IIe, Met, Leu Phe Tyr Cys, Ser His Gin Asn Lys Asp Glu Met Trp His Gin Asn Lys Glu Glu Met, IIe, Leu Met , IFNAR2/IFN , Koths et al; 4965195, Namen et al; 4904584 (Shaw et al). RE 33653; 4959314; 4588585 4737462, Mark et al; 5116943, 5017691 Lee, et al, , , . " " , , , , . ", , " , , , , , , . IFNAR2 , , , , , 70% , . , 90% , 85% , 95% . IFN , , , , , , 90% , 70% , , , 85% 95% . IFN, , , . « », . Computing Group's GAP (global alignment program), -4 +11) « » » , -4 ( , , , 9 Genetic (BLOSUM62) , 12 ( ) ). . . IFNAR, , IFN , , , . , , , , , , IFN, , , . , , . , (1984) : 100% , ) , 100% , =81,5° +16,6(logM)+0,41(%GC)-0,61(% )-500/L, , %GC G , % , a L . 100% , 1%. , , 10° , Meinkoth, , 10%. , 15% , 20% ( 12-15° ) ) 2 SSC ( 0,5% SDS Meinkoth et al. ( ) 1° , , , . ( 15-20° . , , , , . . , , 6 SSC (6 SSPE), 5 Denhardt, 0,5% SDS, 100 , , , , SSC (Ausubel, 1987, 1998). ", , , N , , 20°-25° . ) ( , , , , , . , , , , , , . , , , , N, ( , ), ( 0 ), . , , , . " " , , " . " , . , , , . ., , , , , , , , , , . . , , , , , , , , , , , , , . , , . « », , . IFNAR2, , . , , . . , IFNAR2 , . . N , , , , , . , , , , , IFNAR2, sIFNAR2, , , . , , . , " ", , , . . IFNAR2 , IFNAR2 , sIFNAR2, , IFNAR1, , , IFNAR1 IFNAR1. . , . IFNAR1 IFNAR1 , , IFN . , IFN , , , , , , , . . , , , , . , , . . , , IFNAR , , , . , , , , . , , , , , . , , ) (Ratner, 1989) (Reuveny, 1993; Reff, 1993), , t-PA ( (Edington, 1995). , ) (Olins, 1993) ( ( , ) , . , , ) , , (Keown, 1990). , , , (Grazia, 1997). , , , (Ibanez, 1991). , , , (Curtis, 1991). , IFN ). (Utsumi, 1987), 1 (Smith, 1983) , sIFNAR2 , (Terlizzese, 1996). (Christofmis, 1981). . , . , sIFNAR2, , , , , , , . , IFNAR2/IFN , , , , . IFN , , . , , , . , , , , , , , , . . , , , , . , , , , . IFN . IFN , . IFNAR IFN IFN . , IFN , , IFN IFNAR . , . , , , , , , , , , , , , , . , , . , , . . WISH WISH Novick et al (1982). : - WISH - IFN , 264,5 10 ( CCL 25), ( V-520-001-522), , InterPharm Laboratories LTD 90 106 -70° , : , IFNAR2, PBS 373 , WISH (MEM (100 , 100 +5%FBS+0,1%L70° )). PBS, IFN WISH. 90 , sIFNAR2 25 WISH 25 3 12 96sIFNAR2 WISH , 50 0,8 106 (4 104 , WISH SIFNAR2 , sIFNAR2 50) WISH. ( 25 IFN ). 12 ) WISH ) ) 4,75 2, 50 1:10 100% WISH ( 25 , . 200 100% 1 Spectramax ( WISH 48 ) ). 48 2 (IX) . 5% , . IFN 24 , VSV ( . WISH . 22,5 , . 595 , Soft max Pro (Molecular Devices). , ThermoSequenase (Amersham Life Science; Cleveland, ). CastAway Precast (Stratagene; 7 . A. The Genetics Computer Group Sequence Analysis Software . LaJolla, C-G-T. (4 /EDTA, IFN 19 (11) WISH. 1296IFNAR2 sIFNAR2 ( . 1-4 37° IFN 12 IFN +10%FBS+0,1%LWISH (MEM (100 , 100 ), , ) ) 6% Package UNIX workstation. 1. IFN sIFNAR2 ( , IFN (4,75 sIFNAR2Ig . 40) WISH-VSV sIFHAR2/IFN ) sIFNAR2Ig3 37° (0,25-300000 ) IFN ). ( 30 50) IFN , VSV. ( . .1 IFNAR2 32 IFN IFNAR. IFN sIFNAR2 . 48 50, , 0,45, IFNAR2Ig IFNAR2 IFNAR21g ( , , , FNAR2/IFN. 2. ~0,0, , . ~4 2 .2). « » 32 IFN IFNAR2 sIFNAR ~1,8). IFN IFNAR2Ig, , IFN ED50. IFNP IFN 1 SIFNAR2/IFN 4,75 IFN , . 32 .2, ~2 IFN , . IFNAR2 . IFN , , IFNAR2/IFN IFN. 3. IFNAR2/IFN IFN (0,95 ) .3, 4 . . IFNP, , IFN , , IFNAR2 IFN IFN ( IFNAR2 ). IFNAR2 in vitro 37° IFN , , . Gibco) (2,5 , IFN. IFN. IFNAR2/IFN 4. , , IFNAR2. IFN (PBS pH 7,4). , RPMI 1640 IFNAR2 , IFN 3 IFN (500 ) 37° . WISH . VSV , .4, IFN ) 48 ED50 - 104 . , IFN 50 IFN IFN IFNAR2 IFN .5, IFN RPMI 96 ) IFNAR2 IFN . SIFNAR2, (1/25 RPMI 96 . ED50=~7 IFN IFNAR2. 5. sIFNAR2 (1,25 WISH , IFN 24 ( ) (500 IFNAR2 (BSA)). IgG, 4 37° .) IFN WISH . IFN . VSV 48 IFN 24 . , BSA IgG) IFNAR2/IFN , sIFNAR2 ( IFN . IFN , WISH IFN 2,5 IFN IFN . 6. IFNAR2/IFN ELISA B6D2F1 IFN ; 0,05-48 IFN IFN ( .6 7). 1 IFN (2,5 106 ) IFNAR2 (2,5 IFN). , IFN , ( .7) . ELISA 4° ELISA ( .6) WISH (7,55 ) . , WISH IFN , IFNAR2/IFN IFN . 7. IFNAR2/IFN 2a ELISA ( .8 9). B6D2F1 (1/25 105 ) IFNAR2 (14,9 IFN). IFN 2a . IFN ELISA, IFN 2a IFN IFN , 1 IFN (30 ) ELISA ( IFN . . ELISA, 4° .8) WISH ( .9) , IFN , WISH , IFN , IFNAR2/ FN IFN . 8. IFNAR2/lFN . , IFN, IFNAR2 , G N S, : IFNAR2 ( ) IFN . ... ESEFS (GGGGS)nMSY, n = 0 (SEQ ID NO:5), 1 (SEQ ID NO:7), 2 (SEQ ID NO:6), 3 (SEQ ID NO:5), 4 (SEQ ID NO:4) 5 (SEQ ID NO:3). , n=2 IFNAR2/IFN .10 (SEQ ID NO:14). pSVEIF, , IFN, . , IFN(MSY..) . 5' Smal, 7 IFNAR2 (GQESEFS) 344-349 (SEQ ID NO:14) (GGGGS) i (SEQ ID NO:1) . BamHI Xhol 5' . 3' Avrll TGA hlFN . 1 ,1 , 0/2 , , , IX ThermoPol Reaction Buffer (10mM KCl, 20mM Tris-HCl, (pH 8,8, 25° ), 10mM (NH4)2SO4, 2mM, MgSO4, 0,1% Triton X-100: New England Biolabs; Beverly, MA.) 3mM MgSO4 (5mM MgSO4 ) 100 . VENTR 99,9° 30 ,2 VENTR . 20 : ) 99,9° 30 , ) 65-55° 30 , 0,5° , ) 75° 40 . 15 , 55° . , Wizard PCR Preps DNA Purification System (Promega; Madison, WI). Avrll, , , XL-1 , n=1) Xhol , ID NO:1) hIFN pCMV-p40, 1 GS . (Smal+ , , INFAR2. , (Sambrook et al, 1989). pCMV-IFNAR2/IFNA GS " " , . , , (GGGGS)n . GS Smal Xhol . pC VSmal Xhol . Smal Xhol . 6 , pCMV-1 FNAR2 /1 FN n (GS), n 0, 1, 2, 3, 4 . , , ). coli (SEQ ID NO:1, 2/IFNA GS GS 5 GGGGS (SEQ .11. . , , .12 . (Qiagen; Chatsworth, CA). V-IFNAR2/IFN " CMV. (hGH), , 1 2 3 4 5 6 " FNAR2/IFN 3' IFNAR2/IFN pCMV-IFNAR2-IFN pCMV-IFNAR2-IFN pCMV-IFNAR2-IFN pCMV-IFNAR2-IFN pCMV-IFNAR2-IFN pCMV-IFNAR2-IFN . GGGGS (SEQ ID NO:1)/ N/A PCMV.PA4 PCMV.PA4 PCMV.PA4 PCMV.PA4 PCMV. PAS PCMV.PA4 , OGS , lGS , 2GS , 3GS , 4GS , 5GS IFNAR2/IFN , , ; , 1,4 IFN , , hlFN , 9 ; . . , . 1GS . IFNAR2-IFN n GS 0,9 . , 6 . IFNAR2 IFN IFNAR2 (n) GS , 9. . CHO-DUKX , (Uriaub et al (1980), Graff et al (1982)). ( ) , 10% (FBS) 1% L( ). Lipo-fectamine PLUS Reagent (GibcoBRL Life Technologies; Gaithersburg, MD) , . 24 100 2 106 . (pCMV-IFNAR2/IFN n GS, n = 0, 1, 2, 3, 4, 5). PLUS , . 37° 48 ELISA (IFNAR2-IFN ) . . (Chomczynski et al 1987) CHO-DUKX . 10 , . . GeneScreen Plus (DuPont/NEW Medical Products; Boston, MA) 10 x SSC (1,5M 32 , 0,15 ), ^ hIFNAR2 hlFN , Church Gilbert (1984). 0,25 , 7,2 0/25 , 7% (SDS), 1 32 100 . , ("High Prime" Boehringer Mannheim; Indiapolis/IN) , . Sephadex G-50 . , 0,2 x SSC, 0,1% SDS 65° . . . , IFNAR2 IFN , INFAR2 ELISA IFN ELISA (Toray), . IV. IV , [hIF 0GS 1GS 2GS 3GS 4GS 5GS IFNAR2 ]* ( [hINAR2]' ) 1094 994 600 718 535 540 1176 ) 29,175 24,906 13,597 14,998 9,998 9,597 [hlFN ]'' ) 0,146 0,125 0,068 0,075 0,050 0,048 [hIFNAR2]+ ) 31,802 28,895 17,442 20,857 15,538 15,698 34,200 [hIFN ]# ) 6,571 5,609 3,063 3,378 2,251 2,161 IFN/IFNAR 0,207 0,194 0,175 0,162 0,145 0,138 0 *'"#+ hIFNAR2 ELISA 2,0 105E/mg (2 108mg) 22200 ( MALDITOF 34400 ( MALDITOF hlFN ) ) , IFN . IFNAR2 , , , IFNP IFNAR2 , IFN ELISA. IFNAR2/IFN , IFN , , , IFN . . -IFN . .13. 15 ( 1-6) IFN ( . IFNAR2 SDS-PAGE 9) ( IFNAR2/IFN ( 8) PVDF , . . , 7), , IFN Western-Star IFN , MB . 10. . , , IFN ( , WISH ( ) ) . VSV, .14. ( , ELISA 96, 25 WISH ) 75 . 50 WISH . , ( , WISH, . , WISH 500 5% ) ) , 50 . 1000 , ), , 37° 2 50 WISH WISH , IFNP, 50 , (0,6 106 WISH , 1:2. ( REBIF , 24 , , , VSV (1:10 ). 48 . , 50, 50 IFN . . 11. IFNAR2/IFN . . 36 D2F1 (6-8 20 ) 4 : 1 IFN ( 2 (9 ). 3 (9 9 200 ) ) 10000 200 (1) 200 50000 ). 5000 IFN 125 , 125 (2) 200 SIFNAR2 (2,5 50000 IFN (2,5 4 (9 IFN (10 ( ). (1) 200 ). ) 200 . 625 , (2) 200 50000 ) 0,05, 2 12 . 0,54 24 1, 8 48 . 1 , , -70° . , IFN IFN (TFB, Inc.) IFN .15 . , . ELISA, IFN , WISH. ELISA , IFN .15 WISH , IFN , IFN /IFNAR2, 12. C57BL/6 IFNAR2, , IFNAR. . in vitro " " IFN ( IFN A/D) 5 103ME . 3 sIFNAR2. 5 10 ME PBS/2% NMS. IFN SIFNAR2. IFN 5 5 10ME IFN IFN. YAC-1. .16. , IFN , sIFNAR2 IFN. 13. , IFN in vitro IFN. sIFNAR2, , IFN. IFNAR2 , IFN IFNAR2 , in vivo, (scid/scid) (Ghetie 1991; Ghetie 1990). 14-20 . IFN , IFN . IFNAR2 , IFN, in vivo. IFN , BALB/cByJSmn-scid/scid IFN 200 , , 4-5 , , scid , 0 30 . 5 106 0 PBS. 1: 135 104 . (675 104 2: 45 104 (225 104 4 3: 15 10 (75 104 4 4: 5 10 (25 104 5: PBS3 4% NMS , IFN: ) ) ) ) V. V (± 1 2 3 4 5 26, 31, 35, 37, 40 20, 23, 23, 23, 26 20, 20, 22, 22, 23 17, 18, 18, 18, 18 14, 14, 15, 15, 15 ) 33,8 (5,4) 23,0 (2,1) 21,4 (1,3) 17,8 (0,5) 14,6 (0,6) , /scid IFN . 14. , IFNAR2 2,5 13, IFN , , , , IFN 1 2 102ME 2 2 103 3 2 104 7 : IFN +sIFNAR2/ 4 2 102ME 5 2 102ME 6 2 102ME , 0,5 5,0 50,0 : VI (± 3D) 1 2 3 4 5 6 7 16, 16, 17, 18, 19 17, 18, 18, 19, 19 17, 17, 17, 18, 18 17, 17, 18, 18, 19 17, 18, 19, 20, 20 21, 22, 22, 23, 26 16, 16, 17, 17, 17 *3 ( 17,2 (1,3) 18,2 (0,8) 17,6 (0,9) 17,8 (0,8) 18,8 (1,3) 22,8 (1,9)* 16,6 (0,6)

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Ifnar2/ifn complex

Автори англійською

Tepper Mark, Cunningham, Mark

Назва патенту російською

Комплекс ifnar2/ifn

Автори російською

Теппер Марк

МПК / Мітки

МПК: A61K 38/21, C07K 19/00, C12P 21/02, C12N 5/10, A61P 35/00, C12N 1/15, C07K 14/565, C07K 14/715, C12N 15/12, C12N 1/21, A61P 37/02, C07K 14/56, C12N 15/09, C12N 1/19, A61P 43/00, A61P 31/12

Мітки: типу, рецептора, містить, комплекс, субодиницю

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/29-74132-kompleks-shho-mistit-ifn-tipu-i-i-subodinicyu-receptora-interferonu-a-b.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Комплекс, що містить ifn типу і і субодиницю рецептора інтерферону-a/b</a>

Подібні патенти