Спосіб насичення-відмивання нирки

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано при разработке способов низкотемпературного консервирования почки. Наиболее близким к заявляемому является способ насыщения-отмывания почки путем ступенчатой перфузии раствором криопротектора [1]. Согласно способу орган насыщают криопротектором ступенчато возрастающей концентрации, и отмывают, ступенчато снижая концентрацию криопротектора в перфузате. Недостатком способа является повреждение органа в процессе его перфузии, приводящее к снижению функции почки. Задачей изобретения является создание такого способа насыщения-отмывания почки, в котором путем введения этапа предварительной подготовки к перфузии можно было бы исключить повреждение органа в процессе перфузии и таким образом повысить его функциональную полноценность. Эта задача решается тем, что в способе насыщения-отмывания почки путем ступенчатой перфузии раствором криопротектора, перед перфузией производят перевязку мочеточниковой артерии в дистальном ее отделе. За счет перевязки мочеточниковой артерии в дистальном отделе исключается шунтирование (сброс) в нее перфузионного раствора, что позволяет сохранить заданный режим изменения концентрации криопротектора как при насыщении, так и отмывании почки. Это, в свою очередь, исключает резкое изменение концентрационного градиента и предупреждает осмотические диффузионные повреждения клеток почки. Способ насыщения-отмывания почки иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Кроликам породы шиншилла весом 23 - 5,5кг под внутривенным гексеналовым наркозом вскрывали брюшную полость и выделяли почечные сосуды (артерию и вену) и мочеточник, Сосуды канюлировали фторопластовыми катетерами. Почку удаляли из организма, перевязывали лигатурой мочеточниковую артерию в дистальном отделе и подключали к перфузионному аппарату. Время тепловой ишемии не превышало 5мин. Насыщение почки криопротетером проводили при 0 - +4°C и перфузионном давлении 60мм рт.ст. пульсирующим потоком. В качестве перфузионной среды использовали раствор Хенкса, в который в процессе насыщения добавляли криопротектор полиэтилен-оксид молекулярной массы 400 (ПЭО-400) до конечной концентрации 20%, увеличивая концентрацию криопротектора со скоростью 1% мин. Отмывание ПЭО-400 проводили снижая его концентрацию в перфузате со скоростью 1% мин. Параллельно проводили насыщение-отмывание почки известным способом, т.е. без перевязки мочеточниковой артерии. Сохранность органа в процессе перфузии определяли флуоресцентным методом. Для этого в перфузионную среду добавляли нефлуоресцирующее соединение-флуоресцеиндиацетат в концентрации 10М, которое интрацеллюлярно разлагается на флуоресцеїн и уксусную кислоту. Увеличение интенсивности флуоресценции служило показателем повреждения органа. Измерения проводили в проточной кювете в, перфузате, оттекающем из вены, на спектрофлуориметре при длине волны возбуждения 486 нм и максимуме длимы волны флуоресценции 517нм. Результаты представлены на фиг.1, где а - флуоресценция перфузата из вены при перфузии почки с перевязанной, б - неперевязанной мочеточниковой артерией. Как видно, перевязка мочеточниковой артерии в дистальном отделе позволяет предупредить повреждение почки в процессе перфузии раствором ПЭО-400. Пример 2. Способ осуществляли аналогично примеру 1, за включением того, что в качестве перфузионной среды использовали раствор Хенкса, в который в процессе насыщения добавляли криопротектор этиленгликоль (ЭГ) до конечной концентрации 40%. Отмывание ЭГ проводили, снижая его концентрацию в перфузате со скоростью 1% мин. Результаты представлены на фиг.2, где а - флуоресценции перфузата из вены при перфузии почки с перевязанной, б неперевязанной мочеточниковой артерией. Как видно, перевязка мочеточниковой артерии в дистальном отделе позволяет предупредить повреждение почки в процессе перфузии раствором ЭГ. Функциональное состояние почки после перфузии оценивали, подключая орган к брюшному отделу аорты и нижней полой вене. Результаты представлены в таблице. Как видно из таблицы, перевязка мочеточниковой артерии позволяет избежать повреждения почки в процессе ее насыщения-отмывания, и таким образом повысить мочевыделительную функцию органа по сравнению с прототипом в 2 - 3 раза, т.е. достичь уровня контроля.