Рідке середовище для діагностики трихомоніазу “скм-1″

Рідке середовище для діагностики трихомоніазу, що містить сольовий розчин, компонент крові, дріжджовий аутолізат і стрептоміцин, яке відрізняється тим, що як сольовий розчин середовище містить розчин Рингера, як компонент крові - дефібринізовану плазму донорської людської крові та додатково - рідке тіогліколеве середовище, бульйон з бичачих сердець, панангін, 15% розчин фру 3 крові, дріжджовий аутолізат і стрептоміцин, новим є те, що як сольовий розчин середовище містить розчин Рингера, як компонент крові - дефібрінізовану плазму донорської людської крові та додатково - рідке тіогліколеве середовище, бульйон з бичачих сердець, панангін, 15% розчин фруктози, 15% розчин гліцину, 15% розчин тіосечовини та 4% розчин гентаміцину при такому співвідношенні компонентів: рідке тіогліколеве середовище 100мл; бульйон з бичачих сердець 100мл; дріжджовий аутолізат 15мл; панангін 10мл; 15% розчин фруктози 10мл; 15% розчин гліцину 10мл; 15% розчин тіосечовини 7мл; дефібрінізована плазма донорської людської крові 70мл; стрептоміцин 100 000МО; 4% розчин гентаміцину 20мл; розчин Рінгера 158мл. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом полягає у такому. Введення до складу середовища панангіну дозволило підвищити осмотичний тиск до 440±2,0мОсм/л, загальна щільність 1015±3,0, що наближається до осмотичного тиску рідин сечовидільної системи людини in vivo. Такі умови сприятливо впливають на кліткову стінку найпростіших, що поділяються. Додавання тіосечовини сприяє підтриманню нормальних умов життєдіяльності найпростіших, тому що тіосечовина метаболізується протеолітичними ферментами найпростіших. Для підвищення онкотичного тиску до складу додають тіогліколеве середовище, бульйон з бичачих сердець і дефібрінізовану плазму донорської людської крові, що в значній мірі підвищує білкові трофічні властивості найпростіших, тому що останні мають тропність до плазмових білків людини. Відомо, що серед найпростіших за останній час зустрічаються резистентні форми, які є стійкими до коливань pH середовища існування, а середовище, що нами пропонується, має слабко кислу реакцію, яка змінюється в лужний бік в період росту і розмноження найпростіших, таким чином, загальна pH пропонованого середовища складає 4,0±1,0. Введення до складу середовища гліцину дозволить покращити трофічні властивості трихомонад. Бульон з бичачих сердець забезпечує необхідні умови життєвої діяльності трихомонад. Дефібрінізована плазма донорської людської крові підвищує якість середовища, яке стає більш наближеним до людських секреторних рідин, що дозволяє розвиватись трихомонадам. В цілому, склад середовища, що пропонується, дає змогу отримувати більш раннє збільшення кількості не тільки піхвових, але й інших видів трихомонад, амеб на 3-5 діб раніш у порівнянні з прототипом. Приготування такого середовища рутинним 13850 4 способом можливе у будь-якій бактеріологічній лабораторії. Термін зберігання середовища, що пропонується, у два рази більший, ніж середовища-прототипу. Середовище готують таким чином. У стерильний флакон ємністю 500мл додають 100мл бульйону з бичачих сердець, при помішуванні додають 100мл тіогліколевого середовища, потім при перемішуванні додають 15мл дріжджового аутолізату, 70мл плазми, отриманої методом дефібрінізування донорської крові людини. До отриманої суміші додають по 10мл 15% розчину фруктози та гліцину, у суміш додається 7мл 15% розчину тіосечовини. Далі додають 10мл препарату панангін (виробник - Гедеон Ріхтер, Угорщина), суміш ретельно перемішують і наприкінці додають 100000МО стрептоміцину і 20мл 4% розчину гентаміцину. Об'єм приготованої рідини доводиться розчином Рінгера до 500мл, після чого приготовану суміш розливають у стерильні пробірки по 2-5мл. Зверху на рідке середовище обережно нашаровують стерильне вазелінове масло 0,2-0,5мм, зверху пробірку закривають ватно-марлевою пробкою. Бульйон з бичачих сердець готують таким чином. Свіжі яловичі серця очищують від жиру, плівок та сухожилків. Пропускають через м'ясорубку, складають отриману масу у емальовану каструлю та заливають водою у співвідношенні 1:1. Залишають на 12 годин при кімнатній температурі, потім кладуть до автоклаву з температурою 100°С, тиск 0,2-0,5 атмосфер на годину. Автоклавована маса після відстоювання фільтрується через мілке сито, отриманий бульйон розливають до стерильних флаконів по 400мл, які потім стерилізуються в автоклаві на протязі 45 хвилин при тиску 1 атмосфера. Флакони можна зберігати у холодильнику на протязі року. Тіогліколеве середовище готують за загальноприйнятою методикою. 31 грам живильного середовища для контролю стерильності (тіогліколеве середовище) розчиняють в 1 літрі дистильованої води. Готовий розчин кип'ятять на протязі 2 хвилин, потім фільтрують через паперовий фільтр і розливають по флаконам. Флакони стерилізують автоклавуванням при температурі 121°С на протязі 15 хвилин при тиску 1 атмосфера. Суміш, яка простигла, доводять до pH 7 ±0,2. Флакони зберігаються у холодильнику на протязі 1 року. Дріжджовий аутолізат готують за відомою методикою. 2,00кг пекарських дріжджів нарізають мілкими шматочками і закладають в 10-літровий бутель. Залишають на двоє діб в термостаті при температурі 60 С. Кінець автолізу визначається повним розжиженням дріжджів. По закінченню автолізу у бутель додають потрійну (по вихідній вазі) кількість теплої водопровідної води (на 2кг дріжджів додають 6л води) і аутолізат ставлять до автоклаву для стерилізації при тиску 1-1,3 атмосфери, температурі 120-123°С на 30 хвилин, потім відстоюють 5-7 днів. Відстій зливають, додають поварену сіль, доводять pH до 7,4 [Методичний лист, затверджений МОЗ СРСР, від 28.03.69 №1083/14-34]. Дослідження за допомогою середовища, що 5 13850 пропонується, проводять шляхом засівання біологічного матеріалу зі статевих органів (піхва, уретра) або секреторних рідин (сеча, секрет передміхурової залози) у рідке середовище під вазелінову пробку, намагаючись не порушувати її, тим самим зменшуючи доступ кисню. Пробірки з середовищем відразу після висівання кладуть до термостату при температурі 37°С. Перегляд середовища на наявність найпростіших рекомендується через 48-72 години після посіву, при негативному результаті - ще через 7-10 днів. Найбільш інтенсивно трихомонади розмножуються у нижньому шарі середовища, тому при контролі посівів треба брати матеріал за допомо Комп’ютерна верстка А. Крулевський 6 гою пастеровської петлі з дна пробірки. На предметному склі готують препарат „розчавлена капля". Препарати продивляються у затіненому полі мікроскопу при збільшенні в 280-600 разів. Умови зберігання та транспортування: пробірки зберігаються в холодильнику при 4°С. Готовий розчин чи розлитий по стерильних пробірках зберігають при температурі 7±3°С. Термін зберігання готового розчину в пробірках не більш 25-30 днів. Пробірки транспортують в звичайних умовах в штативі у вертикальному положенні, запобігаючи струшування, сильного нагрівання або заморожування середовища. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601