Спосіб контролю відсутності імуносупресивних властивостей живих вірус-вакцин проти інфекційної бурсальної хвороби

Спосіб контролю відсутності імуносупресивних властивостей живих вірус-вакцин проти інфекційної бурсальної хвороби, що включає гістологічні, 3 чення відносної і абсолютної кількості лімфоцитів, виявлення Т-лімфоцитів методом спонтанного розеткоутворення, виявлення В-лімфоцитів за наявністю поверхневих імуноглобулінів, вивчення функціональних властивостей Т- і В-лімфоцитів, визначення теофілін-чутливих і теофілінрезистентних субпопуляцій Т-лімфоцитів, визначення загальної кількості гамма-глобулінів і імуноглобулінів класів A, G, М у сироватці крові, визначення титрів ізогемаглютинінів і гетерофільних аглютинінів, оцінка фагоцитарної активності макрофагів, оцінка активності комплементу в реакції гемолізу, дослідження специфічного гуморального імунітету за допомогою загальноприйнятих серологічних реакцій. Достатньо повну оцінку стану імунітету можна отримати при використанні усіх цих тестів, які в більшості випадків практично недоступні із за трудомісткості, необхідності складного дорогого обладнання і реактивів та кваліфікованого персоналу. Одним із перспективних напрямків визначення імуносупресії у птиці є гістологічні, гістохімічні та імуноморфологічні дослідження імунних органів. [Рекомендації щодо патоморфалогічної діагностики імунодефіцитів птиці, їх корекції та стимуляція післявакцинального імунітету похідними імідазолу, Харків 2002р]. Це рішення може бути прототипом. Недоліком його є те, що за цим рішенням не можливо контролювати антигенні та імуногенні (протективні) властивості живих вірус-вакцин проти інфекційної бурсальної хвороби. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб контролю відсутності імуносупресивних властивостей живих вірус - вакцин поти інфекційної бурсальної хвороби, що включає гістологічні, гістохімічні та імуноморфологічні дослідження імунних органів після щеплення шляхом щеплення 1-деного віку курчат першої групи вірусвакциною проти ІБХ, через 2 тижні є щеплення курчат першої та другої групи вакциною проти НХ та через 14 днів контрольним зараженням курчат першої, другої та третьої групи вірулентним штамом «SGN» вірусу Ньюкаслської хвороби, введення внутрішньом'язово у дозі 1000 ID 50/0,2см3 на одну голову, щоб забезпечити спосіб контролю відсутності супресивних властивостей живих вірусвакцин проти інфекційної бурсальної хвороби. При проведенні досліду враховують показники, які вказують на порушення розвитку курчат та імуносупресію, а саме проявлення ознак захворювання курчат, середню масу тіла, приріст маси тіла, бурсальний індекс, середнє значення титрів до вірусу НХ, результати контрольного інфікування. Жива вірус - вакцина проти ІБХ не має виражених імуносупресивних властивостей, якщо у курчат щеплених та не щеплених вакциною проти ІБХ не спостерігається достовірна різниця (S0.05) за показниками бурсальний індекс, приріст маси тіла, середнє значення титрів антитіл до НХ та результатами контрольного зараження. Виконання способу відображають слідуючи приклади. Приклад 1. Для проведення способу у роботі використовували: 15724 4 - комерційну вакцину «Вірус-вацина-2 проти інфекційної бурсальної хвороби птиці (хвороби Гамборо) із штаму УМ-93», виробництва ДП «Ветеринарна медицина», Україна, реєстраційне посвідчення 0639-04-0122-05, ТУУ 46.15.280-98, виготовлену в 2005 р, серія №1; - комерційну вакцину «CEVAC NEW L - вакцина проти Ньюкаслської хвороби птиці, ліофілізована, жива», СЕВА Санте Анімаль, Франція, виробник CEVA-PHYLAXIA Veterinaru Biologicals Co. ltd., Угорщина, реєстраційне посвідчення № 1188-03 ІВП, виготовлену в 2005 p., серія №2. Одна доза містить вірус Ньюкаслської хвороби штам «ЛаСота» 105,5 ЕІД 50/см3. - штам «ХГ-05» вірусу інфекційної бурсальної хвороби активністю 8,1 lg ТЦД 50/см3. Штам був виділений від курчат у 1995 р. та зберігається в колекції мікроорганізмів ІЕКВМ УААН; - вірулентний штам «SGN» вірусу Ньюкаслської хвороби активністю 6,4 lg ЛД 50/0,2 см3; - гіперімунну сироватку крові кролика специфічну до вірусу інфекційної бурсальної хвороби активністю 8 logs в РН; - гіперімунну сироватку крові кролика специфічну до вірусу Ньюкаслської хвороби активністю 8 log2 в РН - SPF-курчат 1-денного віку у кількості 60 голів; Курчат 1-денного віку поділили на три групи, по 20 голів у кожній. Птицю першої групи щепили комерційною вакциною «Вірус-вацина-2 проти інфекційної бурсальної хвороби птиці (хвороби Гамборо) із штаму УМ-93». Щеплення курчат проводили згідно діючої настанови по застосуванню методом випоювання, одна доза на одне курча. Кожну групу курчат утримували та годували ізольовано протягом 14 діб відповідно чинним зоотехнічним та санітарно-ветеринарним нормам. Після чого курчат першої та другої групи щепили комерційною вакциною «CEVAC NEW L - вакцина проти Ньюкаслської хвороби птиці, ліофілізована, жива» згідно діючої настанови по застосуванню окулярно, одну дозу на одне курча. Третя група залишилась не щепленою - контроль досліду. Курчат після щеплення вакциною проти Ньюкаслської хвороби утримали ізольовано протягом 14 діб. Після чого провели контрольне інфікування курчат усіх груп вірулентним штамом «SGN» вірусу Ньюкаслської хвороби. Вірус вводили внутрішньом'язово у дозі 1000 ID 50/0,2см на одну голову. Строк спостереження за курчатами після зараження 2 тижня. Курчата третьої групи (контроль досліду не щеплені курчата) захворіли та загинули. Курчата першої та другої групи не захворіли. Приклад 2. При проведенні досліду враховували показники, які вказують на порушення розвитку курчат та імуносупресію: 1. Проявлення ознак захворювання курчат. З цією метою протягом проведення досліду два рази на день, вранці та ввечері, здійснювали клінічне обстеження курчат. Протягом усього строку спостереження (4 тижня) при клінічному обстеженні нами не було виявлено ознак захворювання птиці, порушення апетиту та пригнічення курчат. 5 15724 2. Середня маса тіла, приріст маси тіла. Проводили зважування курчат усіх груп до початку досліду та у кінці досліду перед проведенням контрольного інфікування. Достовірної різниці ( 0.05) за показником приріст маси тіла у курчат щеплених та не щеплених вакциною проти ІБХ не спостерігали. 3. Бурсальний індекс. Бурсальний індекс є особливим показовим критерієм. Він визначався за формулою: БІ =м/Мх1000, де ІБ - індекс бурси, м - маса бурси в мг, М - маса тіла птиці в мг. У нормі середній показник індексу маси фабрицієвої бурси становить 4,2 з коливаннями від 2,5 до 6,0. При розвитку імуносупресивного стану у курчат відбувається зменшення ваги фабрицієвої бурси та індексу маси органу, розмір та кількості фолікулів, формується кісти, спостерігається розріст міжфолікулярної тканини та атрофія складок бурси. Достовірної різниці ( 0.05) за показником бурсальний індекс у курчат щеплених та не щеплених вакциною проти ІБХ не спостерігали. БІ у курчат усіх груп був від 2,8 до 4,1. Приклад 3. Дослідження специфічного до вірусу НХ гуморального імунітету проводили за допомогою РН, РЗГА та ІФА. Визначення середнього геометричного титру сироваток здійснювали згідно формули: X log2 an / n , де х - середній геометричний титр антитіл сироваток крові, - сума, log2an - негативний логарифм кожного із титрів множений на кількість сироваток з відповідним титром. Для проведення цих досліджень кров від курчат усіх Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 6 груп відбирали з підкрильцевої вени через 2 тижня після щеплення вакциною проти НХ. Сироватку крові досліджували в РН, ІФА та РЗГА, ІФА. Реакцію нейтралізації проводили загальноприйнятим методом з використанням первинне трипсинізованої культури клітин фібробластів SPFембріонів курей (КФ) на рівні 2 субпасажу. КФ готували методом, запропонованим Dulbeco і Voget у модифікації Ягнера. Як ростове середовище застосовували середовище Ігла [ТУ У 24.400497087-683-2003, виробництва ДП «Ветеринарна медицина»] та середовище 199 [ТУУ 24.400497087-682-2003, виробництва ДП «Ветеринарна медицина»] у рівних пропорційних співвідношеннях з додаванням 10% сироватки крові великої рогатої худоби [ТУ У 24.4-00497087-681-2003, виробництва ДП «Ветеринарна медицина»]. Титр робочого розведення вірусу був 300 ТЦД 50/0,2 см3. РЗГА проводили згідно «Методичних вказівок з серологічного контролю напруженості імунітету при Ньюкаслській хворобі птахів за допомогою реакції затримки гемаглютинації» затверджених начальником Головного Управління ветеринарії МГС СССР 18.10.1979 р., № 115-6а. Достовірну різницю ( 0.05) за показником середнє значення титрів антитіл до НХ у курчат щеплених та не щеплених вакциною проти ІБХ не спостерігали. Спосіб контролю відсутності імуносупресивних властивостей живих вірус-вакцин проти інфекційної бурсальної хвороби є надійним та достовірним. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601